SHSY5Y細(xi)胞(bao) 細(xi)胞(bao)株

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年終*

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公(gong)司不僅(jin)有(you)大量(liang)的細(xi)胞(bao)，還提(ti)供(gong)SHSY5Y細(xi)胞(bao)的全程(cheng)後期(qi)服務(wu)，可以向(xiang)專(zhuan)業(ye)人(ren)士咨詢(xun)詳細(xi)的SHSY5Y細(xi)胞(bao)|細(xi)胞(bao)培養(yang)條件(jian)，凍存(cun)方(fang)法，及(ji)相(xiang)關培養(yang)技術(shu)。

對於貼(tie)壁細(xi)胞(bao)，傳代可參考(kao)以下方法(fa)：

1. 棄(qi)去培(pei)養(yang)上清，用不(bu)含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

2. 加2ml消(xiao)化液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)於培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2分(fen)鐘(zhong)，然(ran)後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察Ⅱ型(xing)肺(fei)泡(pao)上皮(pi)細(xi)胞(bao)|細(xi)胞(bao)消(xiao)化情況，若細(xi)胞(bao)大部分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲幾下培養(yang)瓶後加少量培養(yang)基終止消(xiao)化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yang)基，輕輕打(da)勻後(hou)吸出(chu)，在1000RPM條件下離心4分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加1-2mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

4. 將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1：2到1：5的比例(li)分(fen)到新(xin)的含8ml培(pei)養(yang)基的新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)。

對於懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)，傳代可參考(kao)以下方法(fa)：

方(fang)法壹(yi)：收(shou)集細(xi)胞(bao)，1000RPM條件下離心4分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加1-2mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻，將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1：2到1：5的比例(li)分(fen)到新(xin)的含8ml培(pei)養(yang)基的新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)。

方法(fa)二：可選擇半數換液(ye)方(fang)式，棄(qi)去半(ban)數培(pei)養(yang)基後(hou)，將(jiang)剩余(yu)細(xi)胞(bao)懸(xuan)起(qi)，將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1：2到1：3的比例(li)分(fen)到新(xin)的含8ml培(pei)養(yang)基的新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)。

SHSY5Y細(xi)胞(bao) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)

待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態(tai)良好時，可進行(xing)SHSY5Y細(xi)胞(bao)|細(xi)胞(bao)凍存(cun)。貼(tie)壁細(xi)胞(bao)凍存(cun)時(shi)，棄去培(pei)養(yang)基後(hou)加入少量胰酶，細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)脫(tuo)落(luo)後(hou)，加入約1ml含(han)血(xue)清的培養(yang)基後(hou)加入凍存(cun)管(guan)中(zhong)，再添(tian)加10%DMSO後進行凍存(cun)。懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)凍存(cun)時(shi)，應將(jiang)細(xi)胞(bao)收(shou)集，1000RPM條(tiao)件下離心4分(fen)鐘(zhong)，少量保(bao)存(cun)上清液(ye)(防(fang)止細(xi)胞(bao)吸走(zou))，加入部分(fen)新(xin)鮮培(pei)養(yang)基，加入到凍存(cun)管(guan)中(zhong)，在凍存(cun)管(guan)中(zhong)加入10%DMSO後進(jin)行凍存(cun)。

SHSY5Y細(xi)胞(bao) 細(xi)胞(bao)復蘇的原則(ze)

快(kuai)速(su)融(rong)化：必(bi)須(xu)將(jiang)凍存(cun)在-196℃液(ye)氮中(zhong)的細(xi)胞(bao)快(kuai)速(su)融(rong)化至37℃，使(shi)SHSY5Y細(xi)胞(bao)|細(xi)胞(bao)外凍存(cun)時(shi)的冰(bing)晶(jing)迅速(su)融(rong)化，避(bi)免冰(bing)晶(jing)緩慢(man)融(rong)化時進入細(xi)胞(bao)形(xing)成(cheng)再結晶(jing)，對細(xi)胞(bao)造成損(sun)害(hai)。

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小徐(xu)20180209