人EB病(bing)毒轉化的(de)B細胞 細胞株(zhu)

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人(ren)EB病(bing)毒轉化的(de)B細胞

人EB病毒轉化的(de)B細胞|細胞株(zhu)

人EB病(bing)毒轉化的(de)B細胞 【培養(yang)指(zhi)南】

對於(yu)貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄(qi)去培養(yang)上清(qing)，用不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次(ci)。

2. 加2ml消(xiao)化液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)於(yu)培養(yang)瓶中，置於(yu)37℃培養(yang)箱中消(xiao)化1-2分鐘，然(ran)後(hou)在顯微鏡下觀(guan)察(cha)Ⅱ型肺泡(pao)上皮細胞|細胞消(xiao)化情況，若細胞大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落，迅(xun)速(su)拿回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)少(shao)量培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。

3. 按6-8ml/瓶補加培(pei)養(yang)基(ji)，輕(qing)輕(qing)打勻後吸(xi)出(chu)，在1000RPM條件下離(li)心(xin)4分鐘，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，補加1-2mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻。

4. 將(jiang)細胞懸液(ye)按1：2到1：5的(de)比例(li)分到新的(de)含(han)8ml培養(yang)基(ji)的(de)新皿中(zhong)或者(zhe)瓶中。

對於(yu)懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法壹：收(shou)集(ji)細胞，1000RPM條件下離(li)心(xin)4分鐘，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，補加1-2mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻，將(jiang)細胞懸液(ye)按1：2到1：5的(de)比例(li)分到新的(de)含(han)8ml培養(yang)基(ji)的(de)新皿中(zhong)或者(zhe)瓶中。

方法二：可選(xuan)擇(ze)半數(shu)換液(ye)方式(shi)，棄(qi)去半數(shu)培養(yang)基(ji)後(hou)，將(jiang)剩(sheng)余細胞懸起，將(jiang)細胞懸液(ye)按1：2到1：3的(de)比例(li)分到新的(de)含(han)8ml培養(yang)基(ji)的(de)新皿中(zhong)或者(zhe)瓶中。

人(ren)EB病(bing)毒轉化的(de)B細胞 【細胞凍(dong)存】

待細胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良好時(shi)，可進(jin)行293/HEK-293細胞|細胞凍(dong)存。貼壁細胞凍(dong)存時(shi)，棄(qi)去培養(yang)基(ji)後(hou)加(jia)入少(shao)量胰(yi)酶(mei)，細胞變(bian)圓(yuan)脫(tuo)落後，加入(ru)約1ml含(han)血清的(de)培養(yang)基(ji)後(hou)加(jia)入凍(dong)存管中，再添(tian)加(jia)10%DMSO後(hou)進(jin)行凍(dong)存。懸浮細胞凍(dong)存時(shi)，應將(jiang)細胞收(shou)集(ji)，1000RPM條件下離(li)心(xin)4分鐘，少(shao)量保存(cun)上(shang)清液(ye)(防止(zhi)細胞吸(xi)走(zou))，加(jia)入(ru)部(bu)分新鮮培(pei)養(yang)基(ji)，加(jia)入(ru)到凍(dong)存管中，在凍(dong)存管中加入10%DMSO後(hou)進(jin)行凍(dong)存。

人EB病(bing)毒轉化的(de)B細胞 【復蘇的(de)原(yuan)則(ze)】

快(kuai)速(su)融化：必(bi)須將(jiang)凍(dong)存在-196℃液(ye)氮(dan)中的(de)細胞快速(su)融化至37℃，使人(ren)EB病(bing)毒(du)轉化的(de)B細胞|細胞外(wai)凍(dong)存時(shi)的(de)冰晶(jing)迅(xun)速(su)融化，避(bi)免(mian)冰晶(jing)緩(huan)慢融化時(shi)進(jin)入(ru)細胞形(xing)成(cheng)再結(jie)晶，對細胞造成(cheng)損(sun)害。

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人EB病(bing)毒(du)轉化的(de)B細胞 【註(zhu)意事項】

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1. 收(shou)到細胞後，若發現(xian)幹(gan)冰已揮發幹(gan)凈、凍(dong)存管瓶蓋(gai)脫(tuo)落、破損及(ji)細胞有汙染(ran)，請立(li)即與我(wo)們。

2. 所(suo)有動物細胞均視(shi)為(wei)有潛(qian)在的(de)生(sheng)物危(wei)害性，必(bi)須在二級生(sheng)物安(an)全臺(tai)內操(cao)作(zuo)，並(bing)請註(zhu)意防護(hu)，所(suo)有廢液(ye)及(ji)接(jie)觸(chu)過此(ci)細胞的(de)器皿(min)需要滅菌後方能(neng)丟(diu)棄(qi)。

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小徐(xu)20180323