人肺微(wei)血(xue)管(guan)內皮細胞 細胞株

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人肺微(wei)血(xue)管(guan)內皮細胞 【培養(yang)指南】

對(dui)於貼壁細胞，傳代可參考以(yi)下方(fang)法(fa)：

1. 棄去培養(yang)上(shang)清，用不含(han)鈣(gai)、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗細胞1-2次。

2. 加(jia)2ml消(xiao)化(hua)液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)於培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，置於37℃培養(yang)箱中消(xiao)化(hua)1-2分(fen)鐘(zhong)，然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)Ⅱ型(xing)肺泡(pao)上(shang)皮細胞|細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞大部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫落，迅(xun)速拿回(hui)操作臺(tai)，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加少(shao)量(liang)培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 按(an)6-8ml/瓶(ping)補(bu)加培(pei)養(yang)基，輕輕(qing)打勻(yun)後吸出，在1000RPM條件(jian)下離(li)心(xin)4分(fen)鐘(zhong)，棄去上(shang)清液，補(bu)加1-2mL培(pei)養(yang)液後吹勻。

4. 將細胞懸液按(an)1：2到(dao)1：5的比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含(han)8ml培(pei)養(yang)基的新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

對(dui)於懸浮細胞，傳代可參考以(yi)下方(fang)法(fa)：

方法(fa)壹：收集(ji)細胞，1000RPM條件(jian)下離(li)心(xin)4分(fen)鐘(zhong)，棄去上(shang)清液，補(bu)加1-2mL培(pei)養(yang)液後吹勻，將細胞懸液按(an)1：2到(dao)1：5的比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含(han)8ml培(pei)養(yang)基的新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

方法二：可(ke)選擇(ze)半(ban)數(shu)換液(ye)方式，棄去半(ban)數(shu)培(pei)養(yang)基後，將(jiang)剩(sheng)余細胞懸起(qi)，將(jiang)細胞懸液按(an)1：2到(dao)1：3的比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含(han)8ml培(pei)養(yang)基的新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

人肺微(wei)血(xue)管(guan)內皮細胞 【細胞凍存(cun)】

待(dai)細胞生長狀(zhuang)態良好時(shi)，可進(jin)行(xing)293/HEK-293細胞|細胞凍存(cun)。貼壁細胞凍存(cun)時(shi)，棄去培養(yang)基後加(jia)入(ru)少(shao)量(liang)胰(yi)酶(mei)，細胞變圓脫落後(hou)，加(jia)入(ru)約1ml含(han)血(xue)清的培(pei)養(yang)基後加(jia)入(ru)凍存(cun)管(guan)中，再(zai)添加10%DMSO後進(jin)行(xing)凍存(cun)。懸浮細胞凍存(cun)時(shi)，應將(jiang)細胞收集(ji)，1000RPM條件(jian)下離(li)心(xin)4分(fen)鐘(zhong)，少(shao)量(liang)保(bao)存(cun)上(shang)清液(防止細胞吸走)，加(jia)入(ru)部(bu)分(fen)新鮮(xian)培養(yang)基，加入(ru)到(dao)凍(dong)存(cun)管(guan)中，在凍存(cun)管(guan)中加入(ru)10%DMSO後進(jin)行(xing)凍存(cun)。

人肺微(wei)血(xue)管(guan)內皮細胞 【復(fu)蘇的原(yuan)則】

快(kuai)速融(rong)化(hua)：必須將凍存(cun)在-196℃液氮中的細胞快速融(rong)化(hua)至37℃，使人肺微(wei)血(xue)管(guan)內皮細胞|細胞外(wai)凍(dong)存(cun)時(shi)的冰(bing)晶迅(xun)速融(rong)化(hua)，避(bi)免冰(bing)晶緩慢(man)融(rong)化(hua)時(shi)進(jin)入(ru)細胞形成再(zai)結(jie)晶(jing)，對(dui)細胞造成損(sun)害。

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人肺微(wei)血(xue)管(guan)內皮細胞 【註(zhu)意事項(xiang)】

乾(qian)思(si)生物(wu)實驗室(shi)專(zhuan)業(ye)人士提(ti)醒(xing)廣(guang)大科研(yan)實驗者(zhe)，購買(mai)人肺微(wei)血(xue)管(guan)內皮細胞培養(yang)，註(zhu)意事項(xiang)：

1. 收到(dao)細胞後，若(ruo)發現(xian)幹冰(bing)已揮發幹凈(jing)、凍(dong)存(cun)管(guan)瓶(ping)蓋(gai)脫落、破損(sun)及細胞有汙(wu)染(ran)，請立(li)即(ji)與(yu)我們。

2. 所(suo)有動物(wu)細胞均視為(wei)有潛(qian)在的生物(wu)危(wei)害性(xing)，必須在二級生物(wu)安(an)全臺(tai)內操作，並(bing)請註(zhu)意防護，所(suo)有廢(fei)液及接觸(chu)過此(ci)細胞的器皿需要(yao)滅(mie)菌後方(fang)能丟(diu)棄。

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小(xiao)徐(xu)20180323