人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞(bao)的培養(yang)技(ji)術(shu)與(yu)應(ying)用(yong)

　　人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞(bao)作(zuo)為壹種重(zhong)要(yao)的細(xi)胞(bao)系，廣(guang)泛(fan)應用於(yu)生物醫(yi)學研究，尤其(qi)是在(zai)基因表(biao)達、蛋白(bai)質生產、藥物篩(shai)選和疫(yi)苗(miao)開(kai)發等(deng)領域(yu)。來源於(yu)人(ren)類(lei)胚胎腎臟(zang)，因此(ci)具(ju)有(you)與(yu)人(ren)體(ti)細(xi)胞(bao)相(xiang)似的特性(xing)，成為科(ke)學家(jia)研究人(ren)體(ti)生理(li)和病理(li)機制(zhi)的寶(bao)貴工(gong)具(ju)。

　　壹(yi)、培(pei)養(yang)技(ji)術(shu)

　　1、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)的選擇(ze)：人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞(bao)的培養(yang)需(xu)要特定(ding)的培養(yang)基(ji)，通常(chang)使用(yong)含有基(ji)礎(chu)鹽(yan)溶(rong)液、葡(pu)萄糖、氨(an)基酸(suan)、維(wei)生素等成分的改良Eagle培養(yang)基(ji)。此外(wai)，培養(yang)基(ji)中還(hai)應加入胎牛(niu)血清(qing)（FBS）作(zuo)為營養(yang)支(zhi)持，幫助(zhu)細(xi)胞(bao)的生長和增殖。

　　2、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)：培養(yang)需(xu)要在(zai)37°C的恒溫(wen)條件(jian)下(xia)進(jin)行(xing)，培(pei)養(yang)環(huan)境的二氧(yang)化(hua)碳(tan)濃(nong)度(du)通(tong)常(chang)設置(zhi)在(zai)5%（即CO2濃(nong)度(du)）。這(zhe)種條件(jian)有助(zhu)於(yu)維(wei)持細(xi)胞(bao)的pH值和代(dai)謝穩(wen)定(ding)。培養(yang)時(shi)應保(bao)持適(shi)宜的濕度(du)，以(yi)防(fang)止(zhi)培養(yang)液的蒸發。

　　3、傳(chuan)代(dai)和細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)：細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)是培(pei)養(yang)中(zhong)的常(chang)見(jian)操(cao)作，在(zai)傳(chuan)代(dai)過程中(zhong)，首先通(tong)過PBS清(qing)洗(xi)去(qu)除(chu)殘留的培養(yang)基(ji)，隨(sui)後加入(ru)胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶將細(xi)胞(bao)從(cong)培(pei)養(yang)瓶(ping)表面(mian)消化分離，隨(sui)後加入(ru)新(xin)鮮(xian)培養(yang)基(ji)停止(zhi)消化(hua)。為了維(wei)持細(xi)胞(bao)的健(jian)康(kang)，通(tong)常(chang)需(xu)要在(zai)每次(ci)傳(chuan)代(dai)時調(tiao)整(zheng)細(xi)胞(bao)的接(jie)種(zhong)密(mi)度(du)。

　　4、凍(dong)存與(yu)復(fu)蘇(su)：由於(yu)廣(guang)泛(fan)應用於(yu)科(ke)研，細(xi)胞(bao)系的保(bao)存(cun)和復蘇(su)也是(shi)關鍵(jian)的操(cao)作。為了長期(qi)保(bao)存(cun)，通常(chang)采用(yong)低(di)溫(wen)凍(dong)存技術(shu)。凍存(cun)後的細(xi)胞(bao)需(xu)要在(zai)適(shi)宜的培養(yang)條(tiao)件(jian)下(xia)復蘇(su)，通過解凍(dong)後立即(ji)轉(zhuan)移(yi)至新鮮(xian)培(pei)養(yang)基(ji)中，維(wei)持其(qi)生長。
 

　　二、應用分析

　　1、基(ji)因表(biao)達研究：人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞(bao)常(chang)作為重組蛋(dan)白(bai)的表達系統，廣(guang)泛(fan)應用於(yu)基因工(gong)程(cheng)領域(yu)。通過將外(wai)源基因導(dao)入(ru)，研究人(ren)員可(ke)以(yi)利用(yong)這些細(xi)胞(bao)表(biao)達目標蛋白，並(bing)進(jin)行(xing)後續的功能(neng)研究。HEK293細(xi)胞(bao)系特別適(shi)用於(yu)這種(zhong)應(ying)用(yong)，因為它具(ju)有(you)較(jiao)強的轉染(ran)能力(li)和高效(xiao)的蛋白(bai)表達。

　　2、藥物篩(shai)選：在(zai)藥物發現(xian)和開(kai)發過程中(zhong)，被用作(zuo)篩(shai)選(xuan)化合(he)物的模型。通過轉染(ran)，表達特定(ding)的受體(ti)或酶，科(ke)學家(jia)能夠(gou)評(ping)估(gu)不同(tong)化(hua)合(he)物對(dui)目標分子活(huo)性(xing)的影響。例(li)如(ru)，被(bei)廣(guang)泛(fan)用於(yu)研究藥物與(yu)G蛋(dan)白(bai)偶(ou)聯受體(ti)（GPCR）的相(xiang)互作(zuo)用。

　　3、疫(yi)苗(miao)開(kai)發與(yu)生產：也被(bei)應(ying)用於(yu)疫(yi)苗(miao)的生產和研究。在(zai)病毒(du)研究中有(you)著(zhe)重要(yao)的地位(wei)，特別是(shi)在(zai)重組疫(yi)苗(miao)和病毒(du)載體(ti)疫(yi)苗(miao)的生產中。這(zhe)些(xie)細(xi)胞(bao)用(yong)於(yu)生產病毒(du)顆(ke)粒(li)或表達病毒(du)蛋(dan)白(bai)，進(jin)而用(yong)於(yu)疫(yi)苗(miao)的開(kai)發和臨床(chuang)試驗。

　　4、癌(ai)癥研究與(yu)抗體(ti)生產：由於(yu)與(yu)人(ren)體(ti)細(xi)胞(bao)相(xiang)似，因此(ci)它(ta)們(men)常(chang)用於(yu)癌(ai)癥研究，尤其(qi)是在(zai)研究腫瘤抑制基因或癌(ai)基(ji)因的功能(neng)方(fang)面(mian)。此外(wai)，還(hai)是單(dan)克隆抗體(ti)生產的理(li)想(xiang)平(ping)臺。許多(duo)商業化的抗體(ti)生產公司(si)利用它(ta)來(lai)生產針對特定(ding)抗原的單(dan)克隆抗體(ti)。

　　人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞(bao)作(zuo)為壹種重(zhong)要(yao)的實(shi)驗(yan)工(gong)具(ju)，在(zai)基礎(chu)研究和應用研究中都發揮(hui)著重要(yao)作(zuo)用。其(qi)培養(yang)技(ji)術(shu)和應用領域(yu)的不斷(duan)優(you)化(hua)，為基因工(gong)程(cheng)、藥物開(kai)發、疫(yi)苗(miao)生產等方(fang)面(mian)的研究提(ti)供(gong)了強有力(li)的支持。