大鼠(shu)肝臟星(xing)形(xing)細(xi)胞靜息表(biao)型(xing)維持與(yu)活(huo)化(hua)誘(you)導的(de)精準(zhun)調控策略

　　低血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)條(tiao)件

　　采用含0.5%-2%胎牛血清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，可顯著抑制(zhi)細(xi)胞活(huo)化(hua)標誌物α-SMA的(de)表(biao)達(da)。實驗數據顯示，與(yu)10%血清(qing)組(zu)相比(bi)，低血(xue)清(qing)組(zu)細(xi)胞活(huo)化(hua)率(lv)降低60%-70%，且脂(zhi)滴保(bao)留(liu)更(geng)完(wan)整(zheng)。

　　維生素(su)A代謝(xie)幹(gan)預(yu)

　　補(bu)充視(shi)黃醇（10μM）或(huo)全反式(shi)維甲酸(suan)（1μM），可維持細(xi)胞內(nei)維生素(su)A儲存(cun)功(gong)能。研究證實，視黃醇處理(li)組(zu)細(xi)胞脂(zhi)滴數量較未(wei)處理(li)組(zu)增加40%，且α-SMA表(biao)達(da)量下降50%。

　　細(xi)胞外(wai)基(ji)質(zhi)模(mo)擬(ni)

　　在(zai)培(pei)養(yang)皿(min)表(biao)面(mian)包被(bei)層粘連(lian)蛋白（5μg/cm²）或(huo)膠(jiao)原(yuan)IV（2μg/cm²），可模(mo)擬(ni)肝臟Disse間(jian)隙微(wei)環(huan)境。此條件下，細(xi)胞伸(shen)展面積(ji)減(jian)少30%，突(tu)起(qi)數量降低50%，更(geng)接近靜息態(tai)形(xing)態(tai)。

　　抑制(zhi)性(xing)細(xi)胞因(yin)子(zi)添(tian)加

　　外(wai)源性(xing)添(tian)加HGF（20ng/mL）或(huo)BMP-7（50ng/mL），可通(tong)過(guo)激(ji)活(huo)Smad7信(xin)號(hao)通(tong)路(lu)抑制(zhi)TGF-β1誘(you)導的(de)活(huo)化(hua)。聯(lian)合使用HGF+BMP-7時，活(huo)化(hua)抑制(zhi)率(lv)可達(da)85%。

　　二、活(huo)化(hua)誘(you)導策(ce)略

　　促纖維化(hua)因子(zi)刺(ci)激(ji)

　　TGF-β1（5ng/mL）處理(li)24小(xiao)時可誘(you)導α-SMA表(biao)達(da)量上升(sheng)10倍，且細(xi)胞收(shou)縮(suo)性(xing)增強(qiang)3倍。PDGF-BB（10ng/mL）則通過促進(jin)細(xi)胞增殖，使活(huo)化(hua)細(xi)胞數量增加5-8倍。

　　機械應(ying)力(li)模擬(ni)

　　采用柔性(xing)基(ji)底拉(la)伸系統(tong)（10%應(ying)變(bian)，0.5Hz頻率(lv)）處理(li)細(xi)胞，可激(ji)活(huo)YAP/TAZ通(tong)路(lu)，導致(zhi)α-SMA表(biao)達(da)量上升(sheng)6倍，且細(xi)胞排(pai)列方(fang)向與(yu)應(ying)力(li)方向壹致(zhi)。

　　代(dai)謝(xie)重編程(cheng)幹(gan)預(yu)

　　以(yi)葡萄(tao)糖(tang)（25mM）替(ti)代(dai)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)的(de)丙(bing)酮酸(suan)，可誘(you)導細(xi)胞從(cong)氧化(hua)磷(lin)酸(suan)化(hua)轉向糖(tang)酵解代謝。此條件下，細(xi)胞活(huo)化(hua)標誌物表(biao)達(da)量上升(sheng)3倍，且ECM分泌量增加50%。

　　三維培(pei)養(yang)體(ti)系構(gou)建(jian)

　　使用Matrigel（5mg/mL）或(huo)膠(jiao)原(yuan)凝(ning)膠(jiao)（2mg/mL）進(jin)行(xing)三(san)維培(pei)養(yang)，可模(mo)擬(ni)體(ti)內(nei)纖維化(hua)微(wei)環(huan)境。三(san)維培(pei)養(yang)組(zu)細(xi)胞活(huo)化(hua)率(lv)較二維培(pei)養(yang)組(zu)高(gao)40%，且膠(jiao)原(yuan)合成能力增強(qiang)3倍。