如(ru)何(he)進行普(pu)通(tong)簡單的(de)細胞培(pei)養(yang)

就(jiu)乾(qian)思(si)生物(wu)科(ke)技(ji)列舉(ju)的五個必(bi)需(xu)：培(pei)養(yang)基、血(xue)清、無(wu)菌(jun)無(wu)毒(du)環(huan)境、恒定(ding)生長(chang)溫度以及(ji)合適氣體(ti)的環(huan)境是非(fei)常重(zhong)要(yao)的(de)，必(bi)須要(yao)註(zhu)意的(de)地(di)方。

前(qian)期(qi)需(xu)要(yao)做(zuo)好(hao)準(zhun)備(bei)工(gong)作，包(bao)括(kuo)器皿(min)的(de)清洗(xi)、幹燥(zao)與(yu)消毒(du)，培(pei)養(yang)基與其(qi)他試劑的(de)配制(zhi)、分(fen)裝及(ji)滅菌(jun)，無(wu)菌(jun)室(shi)或(huo)超凈(jing)臺的清(qing)潔和(he)消毒(du)，培(pei)養(yang)箱及(ji)其(qi)他儀(yi)器的檢(jian)查(zha)與調(tiao)試等。設施(shi)，器材就(jiu)有超(chao)凈臺，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡，離心機，壓力蒸汽消毒(du)器等，以及(ji)各(ge)種(zhong)的(de)玻璃器材，塑(su)料器材，橡皮(pi)器材和(he)金屬器材。

具(ju)體(ti)步驟(zhou)如(ru)下(xia)：

壹、復蘇(su)

1、把凍存管(guan)從(cong)液(ye)氮中(zhong)取出(chu)來，立(li)即(ji)投入(ru)37度(du)水(shui)浴(yu)鍋(guo)中，輕(qing)微(wei)搖動。液(ye)體(ti)都融(rong)化後（大概1-1.5分(fen)鐘(zhong)），拿(na)出來噴(pen)點酒(jiu)精放在超(chao)凈(jing)工(gong)作臺裏(li)。

2、把(ba)上述(shu)細胞懸液(ye)吸到(dao)裝(zhuang)10ml培(pei)養(yang)基的15ml的離(li)心管(guan)中(zhong)（用培(pei)養(yang)基把凍存管(guan)洗(xi)壹遍(bian)，把(ba)粘(zhan)在壁(bi)上的細胞都洗(xi)下來），1000轉(zhuan)離心5分(fen)鐘(zhong)。

2.把(ba)上清液(ye)倒(dao)掉(diao)，加(jia)1ml培(pei)養(yang)基把細胞懸浮起(qi)來。吸到(dao)裝(zhuang)有10ml培(pei)養(yang)基的10cm培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)前(qian)後左右輕(qing)輕(qing)搖動，使培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)的細胞均勻(yun)分(fen)布(bu)。

4.標好(hao)細胞種(zhong)類和(he)日(ri)期、培(pei)養(yang)人名(ming)字(zi)等，放到CO2培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)，細胞貼壁(bi)後換培(pei)養(yang)基。

5.zui後3天(tian)換壹(yi)次(ci)培(pei)養(yang)基。

二、傳代（傳代動物(wu)細胞）

1.培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)的細胞覆蓋率達到80%-90%時(shi)要(yao)傳代。

2.把(ba)原有培(pei)養(yang)基吸掉(diao)。

3.加(jia)適當的(de)胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶（能(neng)覆蓋細胞就(jiu)行），消化1-2分(fen)鐘(zhong)。

4.細胞都變(bian)圓(yuan)後加(jia)如(ru)入(ru)等體(ti)積的(de)含血(xue)清的(de)培(pei)養(yang)基終止消化。

5.用移(yi)液(ye)槍吹打(da)細胞，把細胞都懸浮起(qi)來。

6.把細胞吸到(dao)15ml的(de)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000轉(zhuan)離心5分(fen)鐘(zhong)。

7.倒(dao)掉(diao)上清液(ye)，加(jia)1-2ml培(pei)養(yang)基，把細胞都吹起(qi)來。

8.根(gen)據(ju)細胞種(zhong)類把細胞傳到幾(ji)個培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)。壹般，癌(ai)細胞分(fen)5個，正常細胞傳3個。繼續培(pei)養(yang)。

三、凍存

1、把細胞消化下(xia)來並離(li)心（同上）。

2、用配(pei)好(hao)的凍存液(ye)把細胞懸浮起(qi)來，分(fen)裝到滅菌(jun)的(de)凍(dong)存管(guan)中(zhong)，靜(jing)止(zhi)幾(ji)分(fen)鐘(zhong)。

3、寫(xie)明細胞種(zhong)類，凍存日(ri)期。（4℃--30min，-20℃--30min，-80℃。）

（凍(dong)存液(ye)的配(pei)制：70%的(de)*培(pei)養(yang)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要(yao)慢(man)慢(man)滴(di)加(jia)，邊(bian)滴邊(bian)搖。）

需(xu)要(yao)註(zhu)意的(de)事(shi)項(xiang)：

實驗材料要(yao)新(xin)鮮(xian)，從(cong)活體(ti)分(fen)離材料後要(yao)低(di)溫保(bao)存，並盡(jin)快(kuai)進(jin)行細胞分(fen)離實驗。無菌(jun)操(cao)作。操(cao)作時用的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，可(ke)加(jia)平時(shi)細胞培(pei)養(yang)液(ye)五倍(bei)含量(liang)的請(qing)鏈(lian)黴素(su)。

用酶(mei)法分(fen)離細胞時，註(zhu)意酶(mei)液(ye)的濃度(du)和(he)控(kong)制消化時(shi)間(jian)。貼(tie)塊法分(fen)離細胞時，註(zhu)意動作要(yao)輕(qing)柔(rou)，不(bu)要(yao)傷(shang)到(dao)細胞組織，組織塊邊(bian)緣盡(jin)量(liang)平整有利於細胞遊(you)離。

培(pei)養(yang)液(ye)的選(xuan)擇。不(bu)同的(de)細胞有對(dui)培(pei)養(yang)液(ye)中營(ying)養的(de)要(yao)求(qiu)不(bu)同，根(gen)據(ju)所(suo)分(fen)離細胞的特性選擇。

目(mu)前(qian)，細胞培(pei)養(yang)的目的和(he)用途(tu)主(zhu)要(yao)科(ke)學研(yan)究及(ji)生物(wu)制(zhi)藥(yao)，它的(de)耗(hao)資少(shao)、經(jing)濟(ji)、成(cheng)本低、可(ke)大量(liang)培(pei)養(yang)，利於生物(wu)制(zhi)品的生產。所以希望(wang)未來，我們的(de)生物(wu)科(ke)技(ji)越來越好，共(gong)同走向(xiang)美(mei)好的明天(tian)！