產(chan)品(pin)系統(tong)PRODUCT CENTER
在(zai)發展中(zhong)求生存，不斷(duan)完(wan)善(shan)，以良(liang)好信(xin)譽(yu)和(he)科學(xue)的(de)管(guan)理促(cu)進(jin)企業(ye)迅(xun)速(su)發展
首(shou)頁-產(chan)品(pin)系統(tong)--合(he)作品(pin)牌(pai)-SynQuest Laboratories
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上海乾(qian)思生物(wu)SynQuest Laboratories品(pin)牌(pai)代(dai)理專業經(jing)營(ying)進(jin)口胎(tai)牛血(xue)清、細胞因(yin)子、ELISA試劑(ji)盒(he)、細胞、抗體、生物(wu)試(shi)劑(ji)、耗材、培養(yang)基、壹抗、二抗、其(qi)產(chan)品(pin)吸(xi)附(fu)均(jun)勻，吸(xi)附(fu)性(xing)好，空白(bai)值(zhi)低，孔底(di)透(tou)明(ming)度(du)高，代(dai)做ELISA實驗(yan)等(deng)。完善(shan)的(de)庫(ku)存及供(gong)應體系以及高效(xiao)穩(wen)定的(de)純(chun)化技(ji)術，保(bao)證(zheng)產(chan)品(pin)均(jun)能現(xian)貨供(gong)應和產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的(de)穩(wen)定性(xing)。
怎樣(yang)查到(dao)壹個(ge)特(te)定細胞株的(de)相(xiang)關(guan)知識和培養(yang)條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕(jue)大多(duo)數細胞的(de)詳(xiang)細資料(liao)。打(da)開(kai)ATCC網頁的(de)Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸入細胞名稱就可(ke)以搜(sou)索(suo)ATCC的(de)細胞數據庫(ku)。數據庫(ku)中有(you)每(mei)壹種細胞的(de)詳(xiang)細描述(shu)，包(bao)括(kuo)細胞的(de)來(lai)源(yuan)，培養(yang)和凍(dong)存條件，以及相(xiang)關(guan)文獻等(deng)資料(liao)。
如(ru)何(he)選用特殊(shu)細胞系培養(yang)基？
培養(yang)某類(lei)型細胞沒有(you)固(gu)定的(de)培養(yang)條件。MEM中(zhong)培養(yang)的(de)細胞，很可(ke)能在(zai)DMEM或(huo)M199中同(tong)樣(yang)容易(yi)生長。總(zong)之(zhi)，*MEM、DMEM做貼壁(bi)細胞培養(yang)；RPMI1640做懸(xuan)浮(fu)細胞培養(yang)；各種目的(de)無(wu)血(xue)清培養(yang)*AIMV培養(yang)基（SFM）。
測(ce)序(xu)實(shi)驗流程(cheng)：
1 收集(ji)樣(yang)品
2 相(xiang)關(guan)試劑(ji) 總RNA提取(qu)試劑(ji)TREzol Reagent (RNA提取(qu)試劑(ji)), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄酶(mei)), RNA 純(chun)化試劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒(ying)光定量(liang)PCR預混試(shi)劑(ji))。
3 實(shi)驗(yan)儀器(qi) 熒(ying)光定量(liang)PCR儀; PCR儀;低溫(wen)離心機。
4 總(zong)RNA提取(qu)
5 cDNA合成 在0.5ml的(de)離心管(guan)中加(jia)入1µl模板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨機引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至(zhi)15µl體系。混勻後70℃變性(xing)RNA 5分鐘，冰上速(su)冷(leng)1分鐘，離心將(jiang)溶(rong)液(ye)收集(ji)至管(guan)底(di)加(jia)入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至(zhi)30µl體系。PCR儀中反(fan)應條件設(she)置 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終(zhong)止(zhi)反(fan)應。合成好的(de)cDNA置於 -20 ℃保(bao)存備(bei)用。
6 引(yin)物(wu)設(she)計(ji)與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成
7 實時(shi)定量(liang)PCR 按以下(xia)反應體系進(jin)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引(yin)物(wu)F 1 ul，下(xia)遊(you)引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定量(liang)PCR儀擴(kuo)增(zeng)反(fan)應條件設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循(xun)環(huan))。
8 PCR產(chan)物(wu)溶解曲(qu)線(xian)分析(xi) 將(jiang)所(suo)擴(kuo)增(zeng)的(de)PCR 產(chan)物(wu)進(jin)行溶解曲(qu)線(xian)分析(xi)，單峰溶解曲(qu)線(xian)表示(shi)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)單壹，無(wu)非(fei)特異(yi)性(xing)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)。溶解曲(qu)線(xian)生成的(de)反(fan)應程序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。
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