人(ren)膽(dan)囊(nang)成纖維(wei)細胞(bao) 細胞(bao)株

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人(ren)膽(dan)囊(nang)成纖維(wei)細胞(bao) 【培養指南】

對(dui)於(yu)貼(tie)壁(bi)細胞(bao)，傳代(dai)可參(can)考(kao)以(yi)下(xia)方(fang)法(fa)：

1. 棄(qi)去(qu)培養上清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次(ci)。

2. 加(jia)2ml消(xiao)化(hua)液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)於(yu)培養瓶(ping)中，置於37℃培養箱(xiang)中消化(hua)1-2分(fen)鐘，然後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察Ⅱ型肺泡上皮細胞(bao)|細胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大部分(fen)變圓並脫落(luo)，迅速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養瓶(ping)後加(jia)少(shao)量培養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 按(an)6-8ml/瓶(ping)補加(jia)培養基(ji)，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)4分(fen)鐘，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，補加(jia)1-2mL培養液後(hou)吹勻。

4. 將細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1：2到1：5的比例(li)分(fen)到新的(de)含8ml培養基(ji)的新皿中或(huo)者瓶(ping)中(zhong)。

對(dui)於(yu)懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)，傳代(dai)可參(can)考(kao)以(yi)下(xia)方(fang)法(fa)：

方法(fa)壹：收(shou)集細胞(bao)，1000RPM條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)4分(fen)鐘，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，補加(jia)1-2mL培養液後(hou)吹勻，將細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1：2到1：5的比例(li)分(fen)到新的(de)含8ml培養基(ji)的新皿中或(huo)者瓶(ping)中(zhong)。

方(fang)法(fa)二(er)：可選(xuan)擇半(ban)數換(huan)液方(fang)式，棄(qi)去(qu)半數(shu)培養基(ji)後，將剩(sheng)余細胞(bao)懸(xuan)起(qi)，將細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1：2到1：3的比例(li)分(fen)到新的(de)含8ml培養基(ji)的新皿中或(huo)者瓶(ping)中(zhong)。

人(ren)膽(dan)囊(nang)成纖維(wei)細胞(bao) 【細胞(bao)凍存】

待細胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態良好時，可進行293/HEK-293細胞(bao)|細胞(bao)凍存。貼(tie)壁(bi)細胞(bao)凍存時，棄(qi)去(qu)培養基(ji)後加(jia)入(ru)少(shao)量胰酶(mei)，細胞(bao)變圓脫落(luo)後，加(jia)入(ru)約(yue)1ml含血(xue)清(qing)的培養基(ji)後加(jia)入(ru)凍(dong)存管中(zhong)，再(zai)添加(jia)10%DMSO後(hou)進(jin)行凍存。懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)凍存時，應將(jiang)細胞(bao)收(shou)集，1000RPM條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)4分(fen)鐘，少(shao)量保存上清(qing)液(防(fang)止(zhi)細胞(bao)吸走)，加(jia)入(ru)部(bu)分(fen)新(xin)鮮(xian)培養基(ji)，加(jia)入(ru)到凍存管中(zhong)，在凍存管中(zhong)加(jia)入(ru)10%DMSO後(hou)進(jin)行凍存。

人(ren)膽(dan)囊(nang)成纖維(wei)細胞(bao) 【復蘇的原則】

快速(su)融(rong)化(hua)：必須(xu)將(jiang)凍存在-196℃液氮(dan)中的細胞(bao)快速(su)融(rong)化(hua)至(zhi)37℃，使人(ren)膽(dan)囊(nang)成纖維(wei)細胞(bao)|細胞(bao)外(wai)凍存時的(de)冰(bing)晶(jing)迅(xun)速(su)融(rong)化(hua)，避免(mian)冰(bing)晶緩(huan)慢(man)融(rong)化(hua)時進(jin)入(ru)細胞(bao)形(xing)成再(zai)結晶(jing)，對(dui)細胞(bao)造成損害(hai)。

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人(ren)膽(dan)囊(nang)成纖維(wei)細胞(bao) 【註(zhu)意(yi)事項】

乾思生(sheng)物(wu)實(shi)驗室專業人(ren)士(shi)提(ti)醒(xing)廣(guang)大科研(yan)實(shi)驗者，購(gou)買人(ren)膽(dan)囊(nang)成纖維(wei)細胞(bao)培養，註(zhu)意(yi)事項：

1. 收(shou)到細胞(bao)後，若發現幹(gan)冰(bing)已揮(hui)發幹(gan)凈(jing)、凍(dong)存管瓶(ping)蓋脫落(luo)、破損及細胞(bao)有汙染(ran)，請(qing)立(li)即(ji)與(yu)我(wo)們(men)。

2. 所有動物(wu)細胞(bao)均視(shi)為(wei)有潛(qian)在的生(sheng)物(wu)危害(hai)性，必須(xu)在二(er)級生(sheng)物(wu)安(an)全臺(tai)內操作(zuo)，並請(qing)註(zhu)意(yi)防護(hu)，所有廢液及接觸(chu)過(guo)此(ci)細胞(bao)的器(qi)皿需要(yao)滅(mie)菌後(hou)方能(neng)丟棄(qi)。

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