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人低轉(zhuan)移肺(fei)癌細胞 【培(pei)養(yang)指(zhi)南(nan)】

對(dui)於貼(tie)壁(bi)細胞，傳(chuan)代可(ke)參(can)考以(yi)下方(fang)法：

1. 棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清，用不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次。

2. 加2ml消(xiao)化液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)於培(pei)養(yang)瓶中，置於37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化1-2分(fen)鐘(zhong)，然後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察Ⅱ型(xing)肺(fei)泡上(shang)皮(pi)細胞(bao)|細胞消(xiao)化情(qing)況，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫落，迅(xun)速(su)拿(na)回操作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加少量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。

3. 按(an)6-8ml/瓶(ping)補加培(pei)養(yang)基(ji)，輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)吸(xi)出，在1000RPM條件下離心(xin)4分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)去上(shang)清液，補加1-2mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。

4. 將(jiang)細(xi)胞懸液按1：2到1：5的比(bi)例分(fen)到(dao)新的含8ml培(pei)養(yang)基(ji)的新皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中。

對(dui)於懸浮(fu)細胞(bao)，傳(chuan)代可(ke)參(can)考以(yi)下方(fang)法：

方(fang)法壹：收集(ji)細(xi)胞(bao)，1000RPM條件下離心(xin)4分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)去上(shang)清液，補加1-2mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)，將(jiang)細(xi)胞懸液按1：2到1：5的比(bi)例分(fen)到(dao)新的含8ml培(pei)養(yang)基(ji)的新皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中。

方(fang)法二(er)：可(ke)選(xuan)擇半數(shu)換(huan)液(ye)方(fang)式，棄(qi)去半數(shu)培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)，將(jiang)剩(sheng)余(yu)細(xi)胞(bao)懸起，將(jiang)細(xi)胞懸液按1：2到1：3的比(bi)例分(fen)到(dao)新的含8ml培(pei)養(yang)基(ji)的新皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中。

人低轉(zhuan)移肺(fei)癌細胞 【細胞凍存】

待(dai)細胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行293/HEK-293細胞|細胞(bao)凍(dong)存。貼(tie)壁(bi)細胞凍存時，棄(qi)去培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)加入少量(liang)胰(yi)酶(mei)，細(xi)胞(bao)變(bian)圓脫落後(hou)，加入約(yue)1ml含(han)血(xue)清的培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)加入凍(dong)存管中，再(zai)添(tian)加10%DMSO後進(jin)行凍存。懸浮(fu)細胞(bao)凍(dong)存時，應將(jiang)細(xi)胞收集(ji)，1000RPM條件下離心(xin)4分(fen)鐘(zhong)，少量(liang)保存上(shang)清液(防(fang)止(zhi)細胞吸(xi)走)，加入部(bu)分(fen)新(xin)鮮培(pei)養(yang)基(ji)，加入到(dao)凍(dong)存管中，在凍(dong)存管中加入10%DMSO後(hou)進(jin)行凍存。

人低轉(zhuan)移肺(fei)癌細胞 【復(fu)蘇(su)的原(yuan)則(ze)】

快速(su)融(rong)化：必須(xu)將(jiang)凍(dong)存在-196℃液(ye)氮(dan)中的細胞(bao)快速(su)融(rong)化至(zhi)37℃，使人低轉(zhuan)移肺(fei)癌細胞|細胞外凍存時的冰(bing)晶迅(xun)速(su)融(rong)化，避(bi)免(mian)冰(bing)晶緩(huan)慢(man)融化時(shi)進(jin)入細胞(bao)形成(cheng)再(zai)結(jie)晶，對細(xi)胞(bao)造(zao)成(cheng)損害。

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人低轉(zhuan)移肺(fei)癌細胞 【註意(yi)事項】

乾思(si)生(sheng)物(wu)實驗室專業人士(shi)提醒(xing)廣大科(ke)研(yan)實驗者，購(gou)買人低轉(zhuan)移肺(fei)癌細胞培(pei)養(yang)，註意(yi)事項：

1. 收到(dao)細胞(bao)後，若發現(xian)幹冰(bing)已(yi)揮(hui)發幹凈、凍存管瓶(ping)蓋脫落、破(po)損及(ji)細胞(bao)有汙(wu)染，請立(li)即(ji)與(yu)我(wo)們。

2. 所有(you)動(dong)物(wu)細胞(bao)均視為(wei)有(you)潛(qian)在的生物(wu)危害(hai)性(xing)，必須(xu)在二(er)級(ji)生(sheng)物(wu)安全臺內(nei)操作(zuo)，並(bing)請(qing)註意(yi)防(fang)護，所有(you)廢(fei)液(ye)及(ji)接(jie)觸過(guo)此(ci)細胞的器(qi)皿(min)需(xu)要滅(mie)菌後(hou)方(fang)能丟棄(qi)。

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小徐(xu)20180323