人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao)_培養指(zhi)南

非(fei)常(chang)讓人(ren)著(zhe)迷(mi)的(de)實(shi)驗(yan)，其(qi)成(cheng)功(gong)關(guan)鍵(jian)之壹是(shi)選擇(ze)可(ke)信的(de)實(shi)驗(yan)試(shi)劑(ji)。

我(wo)司(si)細(xi)胞(bao)近(jin)3000種，來(lai)源於(yu)美國ATCC,細(xi)胞(bao)都是(shi)經過(guo)嚴(yan)格質量(liang)控(kong)制(zhi)，在(zai)中(zhong)國大陸努(nu)力(li)搭(da)建(jian)正(zheng)牌細胞與國內廣(guang)大科研(yan)人(ren)員(yuan)之間的(de)溝通(tong)橋(qiao)梁(liang)。為您提供人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao)外(wai)，還有(you)更多(duo)相關實(shi)驗(yan)產(chan)品(pin)，標準(zhun)品(pin)，細胞株(zhu)和實(shi)驗(yan)技(ji)術服務(wu)等等(deng)前期後續(xu)服(fu)務(wu)。

人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao)的(de)產品(pin)介(jie)紹(shao)

人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao)由(you)我(wo)司(si)*銷售人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao)。

人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao)細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao)液(ye)體(ti)培養基的(de)保(bao)存是(shi)冷藏(zang)好？還是(shi)冷凍(dong)好(hao)？

　　要冷(leng)藏(zang)！！因為液體(ti)培養基經冷(leng)凍(dong)後再經溶化時，其溶液的(de)pH值(zhi)會發(fa)生(sheng)改(gai)變(bian)，溶液往(wang)往(wang)變(bian)堿，某些成(cheng)分溶解(jie)也會(hui)受(shou)到影(ying)響(xiang)對(dui)細(xi)胞(bao)生(sheng)長不利。故(gu)液(ye)體(ti)培養基壹定(ding)要存放在(zai)冷(leng)藏(zang)箱中(zhong)，通(tong)常(chang)液體(ti)培養基在(zai)冷(leng)藏(zang)條件(jian)下可(ke)存放6個月(yue) ~ 壹年。

　　Q2.人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao) 液(ye)體(ti)培養基中(zhong)谷氨酰胺(an)的(de)作用(yong)，及(ji)使(shi)用(yong)方法。

　　幾(ji)乎(hu)所有(you)的(de)細胞(bao)對(dui)谷氨酰胺(an)有(you)較高的(de)要求(qiu)，細(xi)胞需(xu)要谷氨酰胺(an)合(he)成(cheng)蛋白(bai)質，在(zai)缺少(shao)谷氨酰胺(an)時，細胞生(sheng)長不良(liang)而死(si)亡。所以，各(ge)種(zhong)培養液(ye)中(zhong)都含有(you)較大量(liang)的(de)谷氨酰胺(an)。谷氨酰胺(an)在(zai)溶液中很不(bu)穩定(ding)，應置(zhi)-20 ?C冰凍(dong)保(bao)存，用(yong)前加入(ru)培養基中(zhong)。加(jia)有(you)谷氨酰胺(an)的(de)液體(ti)培養基4 ?C 冰箱儲(chu)存兩周以上(shang)時，應(ying)重(zhong)新(xin)加入(ru)原來(lai)量(liang)的(de)谷氨酰胺(an)。基礎(chu)醫(yi)學(xue)細(xi)胞(bao)中(zhong)心在(zai)其(qi)服(fu)務(wu)項(xiang)目(mu)中(zhong)配(pei)制(zhi)分裝了高濃(nong)度（100倍）的(de)谷氨酰胺(an)溶液（1ml/支）。每(mei)支1ml的(de)谷氨酰胺(an)加到99ml*培養基中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃(nong)度為2mM/ml培養基。包(bao)裝為粉紅(hong)色，-24?C保(bao)存。

　　Q3.細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)及(ji)存活(huo)測試(shi)
1、原(yuan)理(li)：
(1)計(ji)算(suan)細胞(bao)數(shu)目(mu)可(ke)用血(xue)球計(ji)數(shu)盤或(huo)是(shi)Coultercounter粒(li)子計(ji)數(shu)器(qi)自(zi)動計(ji)數(shu)。
(2)血(xue)球計(ji)數(shu)盤壹般有(you)二個chambers，每(mei)個chamber中細(xi)刻(ke)9個(ge)1mm2大正方形，其(qi)中(zhong)4個(ge)角落之正方形再細刻(ke)16個(ge)小(xiao)格，深度均為0.1mm。當chamber上(shang)方蓋(gai)上(shang)蓋玻(bo)片(pian)後，每(mei)個大正方形之體(ti)積(ji)為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時，計(ji)數(shu)每(mei)個大正方形內之細胞數(shu)目(mu)，乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)，再乘以(yi)104，即為每(mei)ml中之細胞數(shu)目(mu)。
(3)存活(huo)測試(shi)之步驟(zhou)為dyeexclusion，利用(yong)染(ran)料會(hui)滲(shen)入(ru)死細(xi)胞中(zhong)而呈(cheng)色，而活(huo)細胞因細(xi)胞(bao)膜(mo)完(wan)整，染料無(wu)法滲(shen)入(ru)而不(bu)會(hui)呈(cheng)色。壹般使(shi)用(yong)藍(lan)色之trypan blue染料，如(ru)果細(xi)胞(bao)不(bu)易(yi)吸收(shou)trypan blue，則用紅(hong)色之Erythrosin bluish。計(ji)算(suan)細胞(bao)活(huo)率：活(huo)細胞數(shu)/(活(huo)細胞數(shu)+死細(xi)胞數(shu))×100%。計(ji)數(shu)應在(zai)臺(tai)盼(pan)蘭(lan)染色後數(shu)分鐘(zhong)內完(wan)成(cheng)，隨(sui)時(shi)間延(yan)長，部分活(huo)細胞也開(kai)始(shi)攝(she)取染料;因為臺(tai)盼(pan)蘭(lan)對蛋白質有(you)很強(qiang)的(de)親和力(li)，用(yong)不(bu)含(han)血(xue)清(qing)的(de)稀(xi)釋(shi)液(ye)，可(ke)以使(shi)染(ran)色計(ji)數(shu)更為準(zhun)確(que)。

　　Q4.細胞(bao)特性(xing)
在(zai)細(xi)胞(bao)培養之前，我(wo)們(men)要了解(jie)壹下妳(ni)所要養細(xi)胞(bao)的(de)基本(ben)特(te)性(xing)，這點(dian)可(ke)以從(cong)細胞(bao)的(de)產品(pin)說(shuo)明書(shu)或(huo)者從(cong)ATCC細胞(bao)庫查(zha)詢。除(chu)此(ci)之外(wai)我(wo)們(men)還要知道每(mei)管細胞(bao)的(de)數(shu)量(liang)，建(jian)議分裂(lie)或(huo)傳(chuan)代的(de)比(bi)例(li)，和已知細胞(bao)的(de)傳(chuan)代代(dai)次等信息。

　　Q5.準(zhun)備(bei)培養基
復蘇(su)細胞(bao)時需要準(zhun)備(bei)合(he)適(shi)的(de)培養基，血(xue)清(qing)和細(xi)胞(bao)生(sheng)長所需的(de)添(tian)加劑(ji)。大部分培養細(xi)胞(bao)所用的(de)培養體(ti)系(xi)，可(ke)以在(zai)訂購細胞系(xi)時獲(huo)得(de)。
雖(sui)然(ran)大多(duo)數(shu)細胞(bao)系可(ke)以在(zai)不(bu)止壹種培養基中(zhong)生(sheng)長，但是(shi)當培養基改(gai)變(bian)時，細(xi)胞的(de)性質也會(hui)變(bian)化。因此(ci)，使(shi)用(yong)細胞庫(ku)推(tui)薦(jian)的(de)培養基來(lai)培養細(xi)胞(bao)會獲(huo)得(de)的(de)效果。

　　Q6.開(kai)啟凍(dong)存管
1.準(zhun)備(bei)壹個培養瓶(ping)，加(jia)入(ru)適(shi)宜(yi)細(xi)胞培養的(de)培養基，液(ye)體(ti)體(ti)積(ji)按照說(shuo)明書(shu)的(de)推(tui)薦(jian)配(pei)置(zhi)，並平衡(heng)培養基的(de)溫度和pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)或(huo)細胞(bao)的(de)正常(chang)生(sheng)長溫度下將凍(dong)存管輕輕搖(yao)動。解(jie)凍(dong)要快(kuai)，約(yue)2分鐘(zhong)或(huo)直到冰晶融(rong)化即(ji)可(ke)。
3.從(cong)水浴(yu)中(zhong)取(qu)出(chu)凍(dong)存管並用浸泡或(huo)噴(pen)灑(sa)70%乙醇(chun)的(de)方式(shi)來(lai)消(xiao)毒。進壹步的(de)操作均(jun)需在(zai)無(wu)菌(jun)操(cao)作臺(tai)中(zhong)嚴格無菌(jun)條件(jian)下進行。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存管的(de)管帽並將內容(rong)物轉(zhuan)移(yi)到壹個含(han)有(you)9 ml推(tui)薦(jian)培養基的(de)無菌(jun)離(li)心管中。通(tong)過溫和離(li)心（125×g 10 min）除去(qu)冷凍(dong)保(bao)護(hu)劑（DMSO）。棄去(qu)上(shang)清(qing)，並用1或(huo)2 ml*培養基重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)。將這些細胞懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)到含(han)有(you)*培養基的(de)培養瓶(ping)中(zhong)並輕輕搖(yao)動以(yi)*混勻。
5.培養24小(xiao)時(shi)後檢(jian)查(zha)細胞(bao)狀態並在(zai)需(xu)要時(shi)進行傳(chuan)代。

　　Q7. 人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao) 培養用(yong)液(ye)pH對細胞(bao)生(sheng)長的(de)影響(xiang)

　　由(you)於(yu)，大多(duo)數(shu)細胞(bao)適(shi)宜(yi)pH為7.2~7.4，偏(pian)離(li)此(ci)範圍對細(xi)胞(bao)將產生(sheng)有(you)害的(de)影響(xiang)。各(ge)種(zhong)細(xi)胞對(dui)pH的(de)要求(qiu)也(ye)不*相同，原代培養細(xi)胞(bao)壹般對(dui)pH變(bian)動耐(nai)受(shou)差，無限細胞(bao)系(xi)耐(nai)受(shou)力(li)強(qiang)。

　　但(dan)總體(ti)來(lai)說(shuo)，細胞(bao)耐(nai)酸性比(bi)耐(nai)堿性強(qiang)壹些，偏(pian)酸環境中(zhong)更(geng)利於(yu)細胞(bao)生(sheng)長。因此(ci)，我(wo)們(men)在(zai)配(pei)制(zhi)培養用(yong)液(ye)時，可(ke)把液(ye)體(ti)的(de)pH稍(shao)微調得(de)偏(pian)酸壹些。液體(ti)在(zai)經過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾膜(mo)過(guo)濾時(shi)，溶液的(de)pH還會(hui)向上(shang)浮動0.2左右。

　　人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao)質量(liang)可(ke)靠，售(shou)後有(you)保(bao)障(zhang)（編(bian)輯(ji)：tanxi）