人(ren)卵(luan)巢癌細胞(bao)

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由(you)我司*銷售。

細胞(bao)株(zhu)

　　Q1. 液體培養(yang)基的(de)保存是(shi)冷(leng)藏好？還(hai)是(shi)冷(leng)凍(dong)好？

　　要冷藏(zang)！！因(yin)為液(ye)體培養(yang)基經(jing)冷(leng)凍(dong)後(hou)再經(jing)溶化時(shi)，其(qi)溶液的(de)pH值(zhi)會(hui)發生改變(bian)，溶液往(wang)往(wang)變(bian)堿(jian)，某(mou)些成分溶解(jie)也(ye)會(hui)受(shou)到影(ying)響(xiang)對(dui)細胞(bao)生(sheng)長不(bu)利。故液(ye)體培養(yang)基壹定要存放(fang)在冷(leng)藏箱(xiang)中，通(tong)常液體培養(yang)基在冷(leng)藏條(tiao)件下可(ke)存放(fang)6個(ge)月(yue) ~ 壹年。

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　　Q2. 液體培養(yang)基中谷氨(an)酰胺的作(zuo)用(yong)，及使(shi)用(yong)方(fang)法。

　　幾(ji)乎(hu)所(suo)有(you)的細(xi)胞(bao)對(dui)谷(gu)氨(an)酰胺有(you)較高(gao)的要求(qiu)，細胞(bao)需(xu)要谷氨(an)酰胺合成(cheng)蛋白(bai)質，在缺少(shao)谷(gu)氨(an)酰胺時(shi)，細胞(bao)生(sheng)長不(bu)良(liang)而死(si)亡(wang)。所以，各(ge)種(zhong)培(pei)養(yang)液中都含有(you)較大(da)量的(de)谷氨(an)酰胺。谷氨(an)酰胺在溶液中很(hen)不(bu)穩(wen)定(ding)，應(ying)置-20 ?C冰(bing)凍(dong)保存，用(yong)前加(jia)入培養(yang)基中。加有(you)谷氨(an)酰胺的液(ye)體培養(yang)基4 ?C 冰(bing)箱(xiang)儲存兩(liang)周(zhou)以上時(shi)，應(ying)重(zhong)新加(jia)入(ru)原來(lai)量的(de)谷氨(an)酰胺。基礎(chu)醫(yi)學細(xi)胞(bao)中心(xin)在其(qi)服務(wu)項(xiang)目中配(pei)制(zhi)分裝了高(gao)濃(nong)度(du)（100倍(bei)）的谷氨(an)酰胺溶液（1ml/支(zhi)）。每支(zhi)1ml的谷(gu)氨(an)酰胺加到(dao)99ml*培養(yang)基中，其(qi)終濃(nong)度(du)為2mM/ml培(pei)養(yang)基。包(bao)裝為粉(fen)紅(hong)色，-24?C保存。

　　Q3.細胞(bao)計數及存活(huo)測(ce)試(shi)
1、原理(li)：
(1)計算細(xi)胞(bao)數(shu)目可用(yong)血(xue)球計數盤(pan)或是(shi)Coultercounter粒(li)子(zi)計數器(qi)自動計數。
(2)血(xue)球計數盤(pan)壹般有(you)二個(ge)chambers，每(mei)個(ge)chamber中細刻9個(ge)1mm2大(da)正(zheng)方(fang)形，其(qi)中4個(ge)角(jiao)落之(zhi)正(zheng)方(fang)形再細(xi)刻16個(ge)小(xiao)格(ge)，深度(du)均為(wei)0.1mm。當chamber上方(fang)蓋上蓋玻(bo)片(pian)後，每(mei)個(ge)大(da)正(zheng)方(fang)形之體積(ji)為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時(shi)，計數每(mei)個(ge)大(da)正(zheng)方(fang)形內之細(xi)胞(bao)數(shu)目，乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數，再乘以104，即(ji)為每(mei)ml中之細胞(bao)數(shu)目。
(3)存活(huo)測(ce)試(shi)之(zhi)步(bu)驟(zhou)為dyeexclusion，利用(yong)染料(liao)會(hui)滲(shen)入死(si)細胞(bao)中而呈色，而(er)活(huo)細(xi)胞(bao)因(yin)細胞(bao)膜(mo)完(wan)整，染料(liao)無法滲(shen)入而(er)不會(hui)呈色。壹般使(shi)用(yong)藍色之(zhi)trypan blue染料(liao)，如果(guo)細胞(bao)不(bu)易(yi)吸(xi)收(shou)trypan blue，則用(yong)紅(hong)色之(zhi)Erythrosin bluish。計算細(xi)胞(bao)活(huo)率(lv)：活(huo)細胞(bao)數(shu)/(活(huo)細(xi)胞(bao)數(shu)+死(si)細(xi)胞(bao)數(shu))×100%。計數應(ying)在臺(tai)盼(pan)蘭(lan)染色後(hou)數(shu)分鐘內完成(cheng)，隨(sui)時(shi)間延(yan)長，部分活細(xi)胞(bao)也(ye)開(kai)始攝(she)取(qu)染料(liao);因(yin)為臺(tai)盼(pan)蘭(lan)對(dui)蛋白(bai)質有(you)很(hen)強(qiang)的親和力(li)，用(yong)不含(han)血(xue)清(qing)的(de)稀(xi)釋(shi)液(ye)，可(ke)以使(shi)染色計數更為(wei)準(zhun)確。

　　Q4.細胞(bao)特(te)性(xing)
在細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)之前(qian)，我們(men)要了解(jie)壹下妳所要養(yang)細胞(bao)的(de)基(ji)本(ben)特(te)性(xing)，這點(dian)可(ke)以從(cong)細胞(bao)的(de)產(chan)品說明(ming)書(shu)或者從(cong)ATCC細胞(bao)庫查詢。除(chu)此之(zhi)外(wai)我(wo)們還要知道(dao)每(mei)管(guan)細(xi)胞(bao)的(de)數(shu)量，建(jian)議(yi)分裂(lie)或(huo)傳(chuan)代(dai)的比(bi)例(li)，和已(yi)知細(xi)胞(bao)的(de)傳(chuan)代(dai)代(dai)次(ci)等(deng)信息(xi)。

　　Q5.準(zhun)備(bei)培(pei)養(yang)基
復(fu)蘇細(xi)胞(bao)時(shi)需(xu)要準(zhun)備(bei)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基，血(xue)清(qing)和(he)細(xi)胞(bao)生(sheng)長所(suo)需(xu)的添(tian)加劑(ji)。大(da)部分培養(yang)細胞(bao)所(suo)用(yong)的培(pei)養(yang)體系，可以在訂購細(xi)胞(bao)系時(shi)獲得。
雖然(ran)大(da)多數細(xi)胞(bao)系可以在不(bu)止壹種(zhong)培(pei)養(yang)基中生長，但(dan)是(shi)當培(pei)養(yang)基改(gai)變(bian)時(shi)，細胞(bao)的(de)性(xing)質也(ye)會(hui)變(bian)化。因(yin)此，使(shi)用(yong)細胞(bao)庫推薦的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培養(yang)細胞(bao)會(hui)獲得的效(xiao)果(guo)。

　　Q6.開(kai)啟凍(dong)存管(guan)
1.準(zhun)備(bei)壹個(ge)培(pei)養(yang)瓶，加入適宜細胞(bao)培(pei)養(yang)的培(pei)養(yang)基，液(ye)體體積(ji)按照說明(ming)書(shu)的推薦配(pei)置(zhi)，並平(ping)衡(heng)培養(yang)基的(de)溫度(du)和pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴(yu)中或細胞(bao)的(de)正(zheng)常生長溫(wen)度(du)下將凍(dong)存管(guan)輕(qing)輕(qing)搖(yao)動。解(jie)凍(dong)要快，約(yue)2分鐘或(huo)直(zhi)到(dao)冰(bing)晶(jing)融化即可。
3.從(cong)水(shui)浴(yu)中取(qu)出(chu)凍(dong)存管(guan)並(bing)用(yong)浸泡(pao)或(huo)噴(pen)灑70%乙(yi)醇的方(fang)式來消(xiao)毒(du)。進(jin)壹步(bu)的(de)操(cao)作均需(xu)在無菌(jun)操(cao)作臺(tai)中嚴格(ge)無菌(jun)條(tiao)件下進(jin)行(xing)。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存管(guan)的(de)管(guan)帽(mao)並(bing)將內容物(wu)轉(zhuan)移(yi)到(dao)壹個(ge)含(han)有(you)9 ml推薦培(pei)養(yang)基的(de)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中。通(tong)過溫和(he)離心(xin)（125×g 10 min）除(chu)去冷(leng)凍(dong)保護(hu)劑（DMSO）。棄去上清(qing)，並(bing)用(yong)1或2 ml*培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)。將這些細胞(bao)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)到(dao)含(han)有(you)*培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中並輕輕搖(yao)動以*混勻。
5.培(pei)養(yang)24小時(shi)後檢查細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)並(bing)在需(xu)要時(shi)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)。

　　Q7. 培養(yang)用(yong)液pH對(dui)細胞(bao)生(sheng)長的(de)影響(xiang)

　　由(you)於(yu)，大(da)多數細(xi)胞(bao)適(shi)宜pH為7.2~7.4，偏離此(ci)範圍(wei)對(dui)細胞(bao)將產(chan)生有(you)害的(de)影響。各(ge)種(zhong)細(xi)胞(bao)對(dui)pH的(de)要求(qiu)也不(bu)*相(xiang)同，原代(dai)培養(yang)細胞(bao)壹般對pH變(bian)動耐(nai)受(shou)差，無限(xian)細胞(bao)系耐(nai)受(shou)力強(qiang)。

　　但(dan)總(zong)體來說，細(xi)胞(bao)耐(nai)酸(suan)性(xing)比耐(nai)堿(jian)性(xing)強(qiang)壹些，偏酸(suan)環境(jing)中更利於(yu)細胞(bao)生(sheng)長。因(yin)此，我(wo)們(men)在配(pei)制(zhi)培養(yang)用(yong)液時(shi)，可把液(ye)體的pH稍(shao)微調得偏酸(suan)壹些。液體在經(jing)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shi)，溶液的(de)pH還(hai)會(hui)向(xiang)上浮動(dong)0.2左右(you)。

　　質量可(ke)靠，售後有(you)保障（編輯：tanxi）