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首頁-技(ji)術(shu)文(wen)章(zhang)-人腎透(tou)明(ming)細胞腺(xian)癌(ai)細胞
迷人的實驗(yan),放心(xin)的選(xuan)擇
我(wo)司(si)細胞近(jin)3000種(zhong),來源於(yu)美國(guo)ATCC,細胞都(dou)是(shi)經(jing)過嚴(yan)格(ge)質量控制,在(zai)中國大(da)陸(lu)努力搭建正(zheng)牌(pai)細胞與(yu)國(guo)內(nei)廣大科(ke)研人員之間的溝(gou)通(tong)橋梁。為(wei)您(nin)提(ti)供人腎透(tou)明(ming)細胞腺(xian)癌(ai)細胞外(wai),還有(you)更(geng)多相(xiang)關(guan)實驗(yan)產(chan)品(pin),標準(zhun)品(pin),細胞株(zhu)和實驗(yan)技(ji)術(shu)服務(wu)等(deng)等(deng)前(qian)期後續服務(wu)。
人腎透(tou)明(ming)細胞腺(xian)癌(ai)細胞的產(chan)品(pin)介紹
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細(xi)胞株(zhu)
Q1. 液體培(pei)養(yang)基(ji)的保(bao)存是(shi)冷藏好(hao)?還(hai)是冷凍(dong)好(hao)?
要(yao)冷藏!!因為液體培(pei)養(yang)基(ji)經(jing)冷凍(dong)後再經(jing)溶化(hua)時(shi),其溶液的pH值(zhi)會(hui)發生改(gai)變(bian),溶液往往變堿(jian),某些(xie)成分溶解(jie)也(ye)會受到影(ying)響(xiang)對細胞生(sheng)長(chang)不利。故液體培(pei)養(yang)基(ji)壹(yi)定要(yao)存放在(zai)冷藏箱中,通(tong)常(chang)液體培(pei)養(yang)基(ji)在冷藏條(tiao)件(jian)下(xia)可存放6個(ge)月(yue) ~ 壹(yi)年(nian)。
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Q2. 液體培(pei)養(yang)基(ji)中谷氨酰(xian)胺的作(zuo)用(yong),及使(shi)用(yong)方法(fa)。
幾(ji)乎所有(you)的細(xi)胞對(dui)谷氨酰(xian)胺有(you)較高(gao)的要(yao)求,細(xi)胞需(xu)要(yao)谷氨酰(xian)胺合成蛋(dan)白(bai)質,在缺少谷氨酰(xian)胺時(shi),細(xi)胞生(sheng)長(chang)不良而死亡。所以(yi),各(ge)種(zhong)培(pei)養(yang)液中都含有(you)較大(da)量的谷氨酰(xian)胺。谷氨酰(xian)胺在溶(rong)液中很不穩定,應(ying)置-20 ?C冰(bing)凍(dong)保存(cun),用(yong)前加入培(pei)養(yang)基(ji)中。加有(you)谷氨酰(xian)胺的液體培(pei)養(yang)基(ji)4 ?C 冰箱儲(chu)存兩(liang)周(zhou)以(yi)上(shang)時(shi),應(ying)重新加入原來量的谷氨酰(xian)胺。基(ji)礎(chu)醫學細胞中心(xin)在其服務(wu)項(xiang)目中配制分裝(zhuang)了(le)高(gao)濃(nong)度(du)(100倍(bei))的谷氨酰(xian)胺溶液(1ml/支)。每支(zhi)1ml的谷氨酰(xian)胺加到99ml*培(pei)養(yang)基(ji)中,其終濃(nong)度(du)為(wei)2mM/ml培(pei)養(yang)基(ji)。包裝(zhuang)為(wei)粉(fen)紅色,-24?C保存(cun)。
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Q3.細(xi)胞計數(shu)及(ji)存活測(ce)試(shi)
1、原理:
(1)計算(suan)細(xi)胞數(shu)目可用(yong)血球計數(shu)盤或(huo)是Coultercounter粒子(zi)計數(shu)器(qi)自動計數(shu)。
(2)血球計數(shu)盤壹(yi)般有(you)二個(ge)chambers,每(mei)個(ge)chamber中細刻9個1mm2大正方形(xing),其中4個角(jiao)落(luo)之正(zheng)方形(xing)再細(xi)刻16個小格,深(shen)度均(jun)為(wei)0.1mm。當chamber上方蓋(gai)上蓋(gai)玻片(pian)後(hou),每個(ge)大(da)正方形(xing)之體(ti)積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時(shi),計數(shu)每(mei)個大正方形(xing)內之細(xi)胞數(shu)目,乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu),再乘(cheng)以(yi)104,即為每(mei)ml中之細(xi)胞數(shu)目。
(3)存活(huo)測(ce)試(shi)之步(bu)驟為(wei)dyeexclusion,利用(yong)染料會滲(shen)入死細胞中而呈(cheng)色,而活(huo)細(xi)胞因細胞膜完(wan)整(zheng),染料無法滲(shen)入而(er)不會(hui)呈色。壹(yi)般使(shi)用(yong)藍色之trypan blue染料,如果細(xi)胞不易吸(xi)收(shou)trypan blue,則用(yong)紅色之Erythrosin bluish。計算(suan)細(xi)胞活(huo)率(lv):活細胞數(shu)/(活(huo)細(xi)胞數(shu)+死細胞數(shu))×100%。計數(shu)應(ying)在臺(tai)盼(pan)蘭(lan)染色後數(shu)分鐘內(nei)完成,隨時(shi)間延(yan)長(chang),部(bu)分活細(xi)胞也(ye)開(kai)始(shi)攝取(qu)染料;因為臺盼(pan)蘭(lan)對(dui)蛋(dan)白(bai)質有(you)很強(qiang)的親(qin)和力,用(yong)不含血清的稀(xi)釋(shi)液,可以(yi)使(shi)染色計數(shu)更(geng)為準(zhun)確(que)。
Q4.細(xi)胞特(te)性(xing)
在(zai)細胞培(pei)養(yang)之前(qian),我們(men)要(yao)了解(jie)壹(yi)下(xia)妳(ni)所要(yao)養(yang)細(xi)胞的基(ji)本(ben)特(te)性(xing),這(zhe)點可(ke)以(yi)從(cong)細(xi)胞的產(chan)品(pin)說明(ming)書或者從(cong)ATCC細(xi)胞庫(ku)查(zha)詢。除(chu)此(ci)之外(wai)我們(men)還要(yao)知道(dao)每(mei)管細胞的數(shu)量,建議分裂(lie)或傳(chuan)代(dai)的比例,和已(yi)知(zhi)細(xi)胞的傳(chuan)代(dai)代次(ci)等信(xin)息。
Q5.準(zhun)備培(pei)養(yang)基(ji)
復(fu)蘇(su)細(xi)胞時(shi)需(xu)要(yao)準(zhun)備合適的培(pei)養(yang)基(ji),血清和(he)細(xi)胞生(sheng)長(chang)所需(xu)的添(tian)加劑。大(da)部(bu)分培(pei)養(yang)細(xi)胞所用(yong)的培(pei)養(yang)體(ti)系(xi),可以(yi)在(zai)訂(ding)購(gou)細胞系(xi)時(shi)獲(huo)得(de)。
雖(sui)然(ran)大多數細(xi)胞系(xi)可以(yi)在(zai)不止(zhi)壹(yi)種培(pei)養(yang)基(ji)中生長(chang),但(dan)是當培(pei)養(yang)基(ji)改變(bian)時(shi),細(xi)胞的性(xing)質也會(hui)變(bian)化。因此(ci),使(shi)用(yong)細胞庫(ku)推薦(jian)的培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞會(hui)獲(huo)得(de)的效(xiao)果。
Q6.開(kai)啟凍(dong)存管(guan)
1.準(zhun)備壹(yi)個培(pei)養(yang)瓶(ping),加入適宜(yi)細(xi)胞培(pei)養(yang)的培(pei)養(yang)基(ji),液體體積(ji)按(an)照說明(ming)書的推薦(jian)配置(zhi),並平衡培(pei)養(yang)基(ji)的溫度和(he)pH(CO2)。
2.在(zai)37℃水(shui)浴(yu)中或細(xi)胞的正(zheng)常(chang)生(sheng)長溫度下(xia)將凍(dong)存管(guan)輕輕(qing)搖(yao)動(dong)。解(jie)凍(dong)要(yao)快(kuai),約(yue)2分鐘或(huo)直到(dao)冰(bing)晶(jing)融化(hua)即可。
3.從(cong)水(shui)浴(yu)中取出凍(dong)存管(guan)並用(yong)浸(jin)泡(pao)或噴(pen)灑70%乙醇(chun)的方式來消(xiao)毒。進(jin)壹(yi)步(bu)的操(cao)作(zuo)均需在無(wu)菌操(cao)作(zuo)臺中嚴格(ge)無(wu)菌條件(jian)下(xia)進(jin)行。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存管(guan)的管(guan)帽並將內容物轉(zhuan)移到壹(yi)個含有(you)9 ml推薦(jian)培(pei)養(yang)基(ji)的無(wu)菌離心(xin)管中。通(tong)過(guo)溫和離(li)心(xin)(125×g 10 min)除去冷凍(dong)保護(hu)劑(ji)(DMSO)。棄去上清,並用(yong)1或2 ml*培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan)細(xi)胞。將這些(xie)細胞懸(xuan)液轉移到(dao)含有(you)*培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中並輕(qing)輕(qing)搖(yao)動(dong)以(yi)*混(hun)勻。
5.培(pei)養(yang)24小時(shi)後(hou)檢(jian)查(zha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)並(bing)在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)進(jin)行傳(chuan)代(dai)。
Q7. 培(pei)養(yang)用(yong)液pH對細胞生(sheng)長(chang)的影(ying)響(xiang)
由(you)於(yu),大多數細(xi)胞適宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4,偏離此(ci)範(fan)圍(wei)對(dui)細胞將產(chan)生有(you)害的影(ying)響(xiang)。各種細(xi)胞對(dui)pH的要(yao)求也(ye)不*相(xiang)同(tong),原代培(pei)養(yang)細(xi)胞壹(yi)般對(dui)pH變(bian)動(dong)耐受差(cha),無(wu)限細(xi)胞系(xi)耐受力強(qiang)。
但(dan)總體來說,細胞耐(nai)酸(suan)性(xing)比耐堿性(xing)強(qiang)壹(yi)些(xie),偏酸環境(jing)中更(geng)利於(yu)細胞生(sheng)長(chang)。因此(ci),我(wo)們(men)在配(pei)制培(pei)養(yang)用(yong)液時(shi),可(ke)把(ba)液體的pH稍(shao)微調(tiao)得(de)偏酸壹(yi)些(xie)。液體在經(jing)過0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜過(guo)濾(lv)時(shi),溶(rong)液的pH還(hai)會向上浮動0.2左右(you)。
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