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我(wo)司(si)細胞(bao)近3000種，來源於(yu)美國ATCC,細胞(bao)都是經(jing)過嚴格(ge)質(zhi)量(liang)控制(zhi)，在中(zhong)國大陸(lu)努(nu)力(li)搭建(jian)正(zheng)牌細(xi)胞(bao)與國內廣大科研(yan)人員之(zhi)間(jian)的(de)溝(gou)通(tong)橋(qiao)梁。為您(nin)提(ti)供(gong)人腎(shen)小(xiao)球微(wei)血(xue)管內皮細(xi)胞(bao)外(wai)，還(hai)有(you)更(geng)多(duo)相(xiang)關(guan)實(shi)驗(yan)產(chan)品(pin)，標(biao)準(zhun)品(pin)，細(xi)胞(bao)株(zhu)和(he)實(shi)驗(yan)技(ji)術服(fu)務(wu)等(deng)等(deng)前(qian)期(qi)後(hou)續(xu)服(fu)務(wu)。 

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細胞(bao)株(zhu)

　　Q1. 液(ye)體培養(yang)基(ji)的(de)保(bao)存是冷(leng)藏(zang)好(hao)？還(hai)是冷(leng)凍好(hao)？

　　要(yao)冷(leng)藏(zang)！！因為液(ye)體培養(yang)基(ji)經(jing)冷(leng)凍後再(zai)經(jing)溶化(hua)時，其(qi)溶液(ye)的(de)pH值會(hui)發(fa)生(sheng)改(gai)變(bian)，溶液(ye)往往變(bian)堿，某(mou)些(xie)成(cheng)分(fen)溶解也會受到(dao)影(ying)響(xiang)對(dui)細(xi)胞(bao)生(sheng)長不利。故(gu)液(ye)體培養(yang)基(ji)壹定要(yao)存放在(zai)冷(leng)藏(zang)箱中(zhong)，通(tong)常液(ye)體培養(yang)基(ji)在冷(leng)藏(zang)條件下可(ke)存放6個(ge)月 ~ 壹年。

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　　Q2. 液(ye)體培養(yang)基(ji)中(zhong)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)的(de)作(zuo)用(yong)，及(ji)使(shi)用(yong)方法。

　　幾乎(hu)所(suo)有(you)的(de)細(xi)胞(bao)對谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)有(you)較高的(de)要(yao)求，細胞(bao)需(xu)要(yao)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)合成(cheng)蛋(dan)白質(zhi)，在(zai)缺少(shao)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)時，細(xi)胞(bao)生(sheng)長不良(liang)而(er)死亡(wang)。所(suo)以，各種培養液(ye)中(zhong)都含有(you)較大量(liang)的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)。谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)在溶液(ye)中(zhong)很(hen)不(bu)穩(wen)定(ding)，應(ying)置-20 ?C冰凍保(bao)存，用前(qian)加入培(pei)養基中(zhong)。加有(you)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)的(de)液(ye)體培養(yang)基(ji)4 ?C 冰箱儲(chu)存兩周(zhou)以上時，應重(zhong)新加入原(yuan)來量(liang)的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)。基礎(chu)醫學(xue)細胞(bao)中(zhong)心(xin)在其(qi)服(fu)務(wu)項目(mu)中(zhong)配(pei)制分(fen)裝(zhuang)了高濃度(du)（100倍(bei)）的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)溶液(ye)（1ml/支）。每(mei)支1ml的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)加到(dao)99ml*培(pei)養基(ji)中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃度(du)為2mM/ml培(pei)養(yang)基(ji)。包裝(zhuang)為粉紅色(se)，-24?C保(bao)存。

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　　Q3.細胞(bao)計(ji)數(shu)及(ji)存活測(ce)試
1、原(yuan)理：
(1)計(ji)算細胞(bao)數目(mu)可(ke)用(yong)血(xue)球計(ji)數(shu)盤或(huo)是(shi)Coultercounter粒子(zi)計(ji)數(shu)器(qi)自(zi)動計(ji)數(shu)。
(2)血(xue)球計(ji)數(shu)盤壹般有(you)二(er)個(ge)chambers，每個(ge)chamber中(zhong)細(xi)刻(ke)9個(ge)1mm2大正方形，其中(zhong)4個(ge)角(jiao)落之(zhi)正方形再細(xi)刻(ke)16個(ge)小格(ge)，深(shen)度(du)均為(wei)0.1mm。當(dang)chamber上方蓋上蓋玻片(pian)後(hou)，每個(ge)大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用時，計(ji)數(shu)每(mei)個(ge)大正方形內之細(xi)胞(bao)數目(mu)，乘(cheng)以稀釋倍(bei)數(shu)，再(zai)乘(cheng)以104，即為(wei)每(mei)ml中(zhong)之(zhi)細(xi)胞(bao)數目(mu)。
(3)存活測(ce)試之(zhi)步驟(zhou)為dyeexclusion，利用(yong)染(ran)料會滲(shen)入死細胞(bao)中(zhong)而(er)呈色(se)，而(er)活細(xi)胞(bao)因細胞(bao)膜(mo)完整，染料無法滲(shen)入而(er)不會(hui)呈色(se)。壹般使用(yong)藍(lan)色(se)之trypan blue染(ran)料，如果細(xi)胞(bao)不易(yi)吸(xi)收(shou)trypan blue，則用(yong)紅色(se)之Erythrosin bluish。計(ji)算細胞(bao)活率(lv)：活細(xi)胞(bao)數/(活細(xi)胞(bao)數+死細胞(bao)數)×100%。計(ji)數(shu)應(ying)在(zai)臺盼蘭染(ran)色(se)後數(shu)分鐘(zhong)內完成(cheng)，隨(sui)時(shi)間(jian)延(yan)長(chang)，部(bu)分(fen)活細(xi)胞(bao)也開始攝(she)取染(ran)料;因為臺盼蘭對(dui)蛋(dan)白質(zhi)有(you)很(hen)強(qiang)的(de)親(qin)和(he)力，用(yong)不(bu)含(han)血(xue)清的(de)稀(xi)釋液(ye)，可(ke)以使染色(se)計(ji)數(shu)更(geng)為(wei)準(zhun)確。

人胚(pei)腎(shen)細胞(bao)（Sars結構蛋白基因修(xiu)飾）

　　Q4.細胞(bao)特性
在細胞(bao)培養之前，我(wo)們(men)要(yao)了解壹下妳所(suo)要(yao)養細胞(bao)的(de)基(ji)本特性，這(zhe)點可(ke)以從(cong)細(xi)胞(bao)的(de)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)或者從(cong)ATCC細(xi)胞(bao)庫(ku)查(zha)詢(xun)。除此之(zhi)外(wai)我(wo)們(men)還(hai)要(yao)知(zhi)道(dao)每(mei)管(guan)細(xi)胞(bao)的(de)數(shu)量(liang)，建議(yi)分裂或(huo)傳(chuan)代(dai)的(de)比例(li)，和(he)已知(zhi)細(xi)胞(bao)的(de)傳(chuan)代(dai)代(dai)次等(deng)信(xin)息(xi)。

　　Q5.準(zhun)備(bei)培養(yang)基
復蘇(su)細胞(bao)時需(xu)要(yao)準(zhun)備(bei)合適(shi)的(de)培(pei)養基，血(xue)清和(he)細胞(bao)生(sheng)長所需(xu)的(de)添加劑。大部(bu)分(fen)培(pei)養細胞(bao)所用的(de)培(pei)養體系(xi)，可(ke)以在訂購細胞(bao)系(xi)時(shi)獲得。
雖(sui)然大多(duo)數(shu)細胞(bao)系(xi)可(ke)以在不止壹種培養基中(zhong)生(sheng)長，但是(shi)當(dang)培養基(ji)改(gai)變(bian)時，細(xi)胞(bao)的(de)性(xing)質(zhi)也會變(bian)化(hua)。因此，使(shi)用細(xi)胞(bao)庫(ku)推(tui)薦(jian)的(de)培(pei)養基來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)會獲得的(de)效果。

　　Q6.開啟(qi)凍存管
1.準(zhun)備(bei)壹個(ge)培養(yang)瓶(ping)，加入適(shi)宜細(xi)胞(bao)培養的(de)培(pei)養基，液(ye)體體積按照說明書(shu)的(de)推(tui)薦(jian)配(pei)置，並平衡培(pei)養基(ji)的(de)溫(wen)度(du)和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)或(huo)細(xi)胞(bao)的(de)正(zheng)常生(sheng)長溫(wen)度(du)下將凍存管輕(qing)輕(qing)搖動。解凍要(yao)快，約2分鐘(zhong)或直(zhi)到(dao)冰(bing)晶融(rong)化(hua)即可(ke)。
3.從(cong)水(shui)浴(yu)中(zhong)取出凍存管並(bing)用浸(jin)泡或噴(pen)灑(sa)70%乙(yi)醇(chun)的(de)方式來(lai)消毒。進(jin)壹步的(de)操(cao)作(zuo)均(jun)需(xu)在無菌操作(zuo)臺中(zhong)嚴(yan)格(ge)無(wu)菌條件(jian)下進(jin)行。
4.擰開凍存管的(de)管(guan)帽並將內容物(wu)轉移(yi)到(dao)壹個(ge)含有(you)9 ml推(tui)薦(jian)培養基的(de)無(wu)菌離心(xin)管中(zhong)。通(tong)過溫(wen)和(he)離心(xin)（125×g 10 min）除去(qu)冷(leng)凍保(bao)護劑（DMSO）。棄去(qu)上清，並用(yong)1或(huo)2 ml*培養基(ji)重懸(xuan)細(xi)胞(bao)。將這(zhe)些(xie)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)到(dao)含(han)有(you)*培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)並(bing)輕(qing)輕(qing)搖動以*混勻(yun)。
5.培(pei)養(yang)24小(xiao)時後檢查(zha)細(xi)胞(bao)狀態(tai)並(bing)在需(xu)要(yao)時進(jin)行傳代(dai)。

　　Q7. 培養(yang)用(yong)液(ye)pH對細(xi)胞(bao)生(sheng)長的(de)影(ying)響(xiang)

　　由於(yu)，大多(duo)數(shu)細胞(bao)適宜pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離此範(fan)圍(wei)對(dui)細(xi)胞(bao)將產(chan)生(sheng)有(you)害(hai)的(de)影(ying)響(xiang)。各(ge)種細胞(bao)對pH的(de)要(yao)求也不*相同(tong)，原代(dai)培養(yang)細(xi)胞(bao)壹般對pH變(bian)動耐(nai)受(shou)差，無(wu)限(xian)細胞(bao)系(xi)耐(nai)受(shou)力(li)強(qiang)。

　　但總(zong)體來說(shuo)，細(xi)胞(bao)耐(nai)酸性(xing)比耐(nai)堿(jian)性(xing)強(qiang)壹些(xie)，偏(pian)酸環境(jing)中(zhong)更(geng)利於(yu)細(xi)胞(bao)生(sheng)長。因此，我(wo)們(men)在(zai)配(pei)制培(pei)養用液(ye)時，可(ke)把(ba)液(ye)體的(de)pH稍(shao)微(wei)調得偏酸壹些(xie)。液(ye)體在經(jing)過0.10um或0.22um濾(lv)膜(mo)過濾時(shi)，溶液(ye)的(de)pH還(hai)會向(xiang)上浮動0.2左(zuo)右(you)。

　　質(zhi)量(liang)可(ke)靠(kao)，售(shou)後(hou)有(you)保(bao)障(zhang)（編輯：tanxi）