雞蛋白(bai)酶受體4（PAR4）ELISA

上(shang)海乾(qian)思(si)生物(wu)科(ke)技(ji)中(zhong)心(xin)，為(wei)您精(jing)心(xin)研發(fa)、細(xi)胞株(zhu)產品。我(wo)們就(jiu)是要做(zuo)壹(yi)件(jian)事(shi)，服(fu)務(wu)好廣(guang)大(da)的(de)科研大(da)眾。
產品名稱(cheng):雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA。

類別(bie) :ELISA
貨期(qi) :7-10天
雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA。註意(yi)事(shi)項(xiang)：
收(shou)集標本前(qian)必須(xu)清(qing)楚(chu)要(yao)檢(jian)測的(de)成份(fen)是否(fou)足夠穩定。對(dui)收(shou)集後當天進行檢(jian)測的(de)標本，儲存在(zai)4℃備用(yong)，如有特(te)殊(shu)原(yuan)因需(xu)要(yao)周(zhou)期(qi)收(shou)集標本，將標本及(ji)時分裝(zhuang)後放在-20℃或(huo)-70℃條(tiao)件(jian)下保(bao)存。避(bi)免反(fan)復(fu)凍融。標本2-8℃可保(bao)存48小時，-20℃可(ke)保(bao)存1個月。-70度(du)可保(bao)存6個月。部分標本需(xu)添(tian)加抑肽酶。
1.  試劑準(zhun)備：所有試劑都(dou)必須(xu)在(zai)使(shi)用(yong)前(qian)達(da)到室(shi)溫(wen)，使用(yong)後請立即(ji)按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)保(bao)存試劑。  實(shi)驗操作(zuo)中(zhong)請(qing)使用(yong)壹(yi)次性(xing)的(de)吸頭(tou)，避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。
2.   加樣(yang)：加樣(yang)或(huo)加試劑時，請(qing)註意(yi)在吸取標本 / 標準品，酶結(jie)合(he)物(wu)或(huo)底(di)物(wu)時，前(qian)壹(yi)個孔與後壹(yi)個孔加樣(yang)之(zhi)間的(de)時間(jian)間隔(ge)如果(guo)太(tai)大(da)，將(jiang)會導(dao)致(zhi)不同的(de) “預(yu)孵育"時間(jian)，從而(er)明(ming)顯(xian)地(di)影響(xiang)到測量值的(de)準確(que)性及(ji)重(zhong)復(fu)性(xing)。壹(yi)次加樣(yang)時間(jian)(包括(kuo)標準品及(ji)所有樣(yang)品)好(hao)控(kong)制在(zai)10分鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標本數量多，推(tui)薦(jian)使用(yong)多道移(yi)液器加樣(yang)。
3.   孵(fu)育：為(wei)防(fang)止樣(yang)品蒸(zheng)發(fa)，試驗時將(jiang)反(fan)應(ying)板放於鋪(pu)有濕布的(de)密閉(bi)盒內(nei)，酶標板加上(shang)蓋或(huo)覆膜(mo)，以避(bi)免液(ye)體蒸發(fa)；洗板後應(ying)盡快(kuai)進行下步操作(zuo)，任(ren)何(he)時侯(hou)都應(ying)避(bi)免酶標板處(chu)於幹(gan)燥(zao)狀態(tai);同時應(ying)嚴格遵(zun)守給(gei)定(ding)的(de)孵育時間(jian)和溫(wen)度(du)。
4.   洗滌(di)：洗滌(di)過(guo)程(cheng)中(zhong)反(fan)應(ying)孔中(zhong)殘(can)留的(de)洗滌(di)液(ye)應(ying)在濾(lv)紙(zhi)上(shang)充分拍(pai)幹(gan)，勿(wu)將濾(lv)紙(zhi)直(zhi)接(jie)放入(ru)反(fan)應(ying)孔中(zhong)吸(xi)水(shui)，同時要(yao)消除(chu)板底殘留(liu)的(de)液體和手指(zhi)印，避(bi)免影(ying)響後的(de)讀數。
5.  試劑配(pei)制：Detection A及(ji)Detection B在(zai)使(shi)用(yong)前(qian)請(qing)手甩幾下或(huo)少(shao)時離心(xin)處(chu)理，以(yi)使(shi)管(guan)壁(bi)或(huo)瓶蓋(gai)的(de)液體沈(chen)積(ji)到管(guan)底(di)。標準品、檢(jian)測溶液(ye)A工(gong)作(zuo)液、檢(jian)測溶液(ye)B工(gong)作(zuo)液請(qing)依據所需(xu)的(de)量配(pei)置使用(yong)，並使用(yong)相應(ying)的(de)稀釋(shi)液配制，不能混(hun)淆。請(qing)確配置標準品及(ji)工(gong)作(zuo)液，盡量(liang)不要微(wei)量配置(如吸(xi)取檢(jian)測溶液(ye)A時，壹(yi)次不要小於10μl)，以(yi)避(bi)免由於不準確(que)稀釋(shi)而(er)造(zao)成(cheng)的(de)濃度(du)誤差；請(qing)勿(wu)重復(fu)使用(yong)已稀(xi)釋(shi)過的(de)標準品、檢(jian)測溶液(ye)A工(gong)作(zuo)液或(huo)檢(jian)測溶液(ye)B工(gong)作(zuo)液。
6.  反(fan)應(ying)時間(jian)的(de)控制(zhi)：加入(ru)底(di)物(wu)後請定時觀(guan)察反(fan)應(ying)孔的(de)顏色(se)變化(比如，每(mei)隔(ge)10分鐘(zhong))，如(ru)顏色(se)較(jiao)深(shen)，請提前(qian)加入(ru)終(zhong)止(zhi)液終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)，避(bi)免反(fan)應(ying)過強(qiang)從(cong)而(er)影(ying)響(xiang)光(guang)密度(du)讀數。
7.  底物(wu)：底(di)物(wu)請(qing)避(bi)光保(bao)存，在(zai)儲存和溫(wen)育時避(bi)免強(qiang)光直(zhi)接(jie)照(zhao)射。
    建議檢測樣(yang)品時均設雙(shuang)孔(kong)測定，以(yi)保(bao)證檢(jian)測結果(guo)的(de)準確(que)性。
    如標本中(zhong)待(dai)測物(wu)質(zhi)含(han)量(liang)過高(gao)，請(qing)先(xian)稀釋(shi)後再測定，計(ji)算(suan)時請(qing)後乘以稀(xi)釋倍(bei)數。
洗板方(fang)法
1.  手(shou)工(gong)洗板方(fang)法：吸(xi)去(qu)(不可觸及(ji)板壁)或(huo)甩(shuai)掉酶標板內(nei)的(de)液體；在實(shi)驗臺(tai)上(shang)鋪墊幾層吸(xi)水(shui)紙(zhi)，酶標板朝下用(yong)力(li)拍(pai)幾次；將(jiang)推(tui)薦的(de)洗滌(di)緩沖液至少0.3ml註入(ru)孔(kong)內(nei)，浸泡(pao)1-2分鐘(zhong)，根(gen)據需(xu)要(yao)，重(zhong)復此(ci)過(guo)程(cheng)數次。
2.  自動(dong)洗板：如果(guo)有自動(dong)，應(ying)在熟(shu)練使用(yong)後再用(yong)到正式實(shi)驗過程(cheng)中(zhong)。
液(ye)體類標本：
標本必須(xu)為(wei)液體，不含(han)沈(chen)澱(dian)。包(bao)括(kuo)、、尿(niao)液(ye)、胸(xiong)腹(fu)水(shui)、腦脊(ji)液、細(xi)胞培(pei)養(yang)上(shang)清、組(zu)織勻(yun)漿(jiang)等(deng)。1ml的(de)全血(xue)可得到0.5ml的(de)或(huo)。每(mei)個標本量收(shou)集體積＝100ul×檢(jian)測種類。
◇      ：
室(shi)溫(wen)血液自然(ran)凝(ning)固(gu)10-20分鐘(zhong)後，離心(xin)20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。收(shou)集上(shang)清。如(ru)有沈(chen)澱(dian)形(xing)成(cheng)，應(ying)再次離心(xin)。
◇      ：
應(ying)根(gen)據的(de)要求(qiu)選(xuan)擇EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鈉或(huo)肝(gan)素(su)作(zuo)為(wei)抗凝(ning)劑(ji)，加入(ru)10％(v/v)抗(kang)凝(ning)劑(ji)(0.1M檸檬酸(suan)鈉或(huo)1% heparin 或(huo)2.0%EDTA.Na2)混(hun)合10-20分鐘(zhong)後，離心(xin)20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集上(shang)清。如(ru)有沈(chen)澱(dian)形(xing)成(cheng)，應(ying)再次離心(xin)。
◇      尿(niao)液(ye)、胸(xiong)腹(fu)水(shui)、腦脊(ji)液：
用(yong)無(wu)菌(jun)管(guan)收(shou)集。離心(xin)20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集上(shang)清。如(ru)有沈(chen)澱(dian)形(xing)成(cheng)，應(ying)再次離心(xin)。
◇      細(xi)胞培(pei)養(yang)上(shang)清：
檢(jian)測分泌(mi)性的(de)成份(fen)時，用(yong)無(wu)菌(jun)管(guan)收(shou)集。離心(xin)20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集上(shang)清。檢(jian)測細(xi)胞內(nei)的(de)成份(fen)時，用(yong)PBS(PH7.2-7.4)稀釋(shi)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，細(xi)胞濃度(du)達到100萬/ml左右。通(tong)過(guo)反(fan)復(fu)凍融，以使細(xi)胞破(po)壞並放出細(xi)胞內(nei)成(cheng)份(fen)。離心(xin)20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集上(shang)清。保(bao)存過(guo)程(cheng)中(zhong)如(ru)有沈(chen)澱(dian)形(xing)成(cheng)，應(ying)再次離心(xin)。
◇      組織標本：
切割標本後，稱取重(zhong)量。加入(ru)壹(yi)定量(liang)的(de)PBS，緩沖液中(zhong)可(ke)加入(ru)1μg/L蛋白(bai)酶抑制劑(ji)或(huo)50U/ml的(de)Aprotinin(抑肽酶)。用(yong)手工(gong)或(huo)勻(yun)漿器將(jiang)標本勻漿(jiang)充分。離心(xin)20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集上(shang)清置於-20度(du)或(huo)- 70度(du)保(bao)存，如(ru)有必要，可(ke)以將(jiang)樣(yang)品濃縮幹(gan)燥(zao)。分裝(zhuang)後壹(yi)份(fen)待檢(jian)測，其余(yu)冷(leng)凍備用(yong)。
寄標本時需(xu)註明(ming)以下情況：
1、標本編號(hao)；2、所測項目(mu)；3、是否(fou)做(zuo)復孔(kong)；4、實(shi)驗後標本是否(fou)寄(ji)回

雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA 安(an)全性
1）避(bi)免直(zhi)接(jie)接(jie)觸終(zhong)止(zhi)液和底物(wu)A、B。壹(yi)旦(dan)接(jie)觸到這(zhe)些液(ye)體，請盡快(kuai)用(yong)水(shui)沖洗。
2）實(shi)驗中(zhong)不要吃(chi)喝、抽(chou)煙(yan)或(huo)使(shi)用(yong)化妝品。
3）不要用(yong)嘴(zui)吸取裏(li)的(de)任(ren)何(he)成份(fen)。

雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA 操作(zuo)註意(yi)事(shi)項(xiang)
1）試劑應(ying)按(an)標簽(qian)說明書(shu)儲存，使(shi)用(yong)前(qian)恢(hui)復到室(shi)溫(wen)。稀稀過(guo)後的(de)標準品應(ying)丟棄(qi)，不可保(bao)存。
2）實(shi)驗中(zhong)不用(yong)的(de)板條(tiao)應(ying)立即(ji)放回包裝(zhuang)袋(dai)中(zhong)，密(mi)封保(bao)存，以(yi)免變質(zhi)。
3）不用(yong)的(de)其它(ta)試劑應(ying)包裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋(gai)好。不同批(pi)號(hao)的(de)試劑不要混(hun)用(yong)。保(bao)質(zhi)前(qian)使(shi)用(yong)。
4）使用(yong)壹(yi)次性(xing)的(de)吸頭(tou)以免交(jiao)叉汙(wu)染(ran)，吸(xi)取終(zhong)止(zhi)液和底物(wu)A、B液(ye)時，避(bi)免使(shi)用(yong)帶金(jin)屬部(bu)分的(de)加樣(yang)器。
5）使(shi)用(yong)幹(gan)凈的(de)塑料容(rong)器配(pei)置洗滌(di)液(ye)。使用(yong)前(qian)充(chong)分混(hun)勻裏(li)的(de)各種(zhong)成份(fen)及(ji)樣(yang)品。
6）洗滌(di)酶標板時應(ying)充分拍(pai)幹(gan)，不要將(jiang)吸水(shui)紙(zhi)直(zhi)接(jie)放入(ru)酶標反(fan)應(ying)孔中(zhong)吸(xi)水(shui)。
7）底物(wu)A應(ying)揮(hui)發，避(bi)免長(chang)時間(jian)打(da)開(kai)蓋子(zi)。底物(wu)B對(dui)光敏(min)感(gan)，避(bi)免長(chang)時間(jian)暴露於光(guang)下。避(bi)免用(yong)手接(jie)觸，有毒。實(shi)驗完成後應(ying)立即(ji)讀取OD值。
8）加入(ru)試劑的(de)順序(xu)應(ying)壹(yi)致(zhi)，以(yi)保(bao)證所有反(fan)應(ying)板孔溫(wen)育的(de)時間(jian)壹(yi)樣(yang)。
9）按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)中(zhong)標明的(de)時間(jian)、加液的(de)量及(ji)順序(xu)進行溫(wen)育操作(zuo)。

雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA 樣(yang)品收(shou)集、處(chu)理及(ji)保(bao)存方(fang)法
1）-----操作(zuo)過程(cheng)中(zhong)避(bi)免任(ren)何(he)細(xi)胞刺激(ji)。使(shi)用(yong)不含(han)熱(re)原(yuan)和內(nei)的(de)試管(guan)。收(shou)集血(xue)液(ye)後，1000×g離心(xin)10分鐘(zhong)將(jiang)和紅(hong)細(xi)胞迅速(su)小心(xin)地(di)分離。
2）-----EDTA、檸檬酸(suan)鹽(yan)、肝(gan)素(su)可用(yong)於檢(jian)測。1000×g離心(xin)30分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)。
3）細(xi)胞上(shang)清液(ye)---1000×g離心(xin)10分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和聚(ju)合物(wu)。
4）組(zu)織勻(yun)漿(jiang)-----將(jiang)組織加入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎(sui)。1000×g離心(xin)10分鐘(zhong)，取上(shang)清液(ye)
5）保(bao)存------如(ru)果(guo)樣(yang)品不立即(ji)使用(yong)，應(ying)將其分成(cheng)小部(bu)分-70 ℃保(bao)存，避(bi)免反(fan)復(fu)冷(leng)凍。盡可(ke)能的(de)不要使(shi)用(yong)溶血(xue)或(huo)高(gao)血脂血。如(ru)果(guo)中(zhong)大(da)量(liang)顆粒，檢測前(qian)先(xian)離心(xin)或(huo)過(guo)濾。不要在(zai)37℃或(huo)更(geng)高的(de)溫(wen)度(du)加熱解(jie)凍(dong)。應(ying)在室(shi)溫(wen)下解(jie)凍(dong)並確保(bao)樣(yang)品均勻(yun)地(di)充分解(jie)凍(dong)。

雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA 試劑的(de)準備(bei)
1）標準品：標準品的(de)系(xi)列(lie)稀釋(shi)應(ying)在實(shi)驗時準(zhun)備，不能儲存。稀(xi)釋前(qian)將(jiang)標準品振(zhen)蕩混勻(yun)。
2）洗滌(di)緩沖液（50×）的(de)稀釋(shi)：蒸餾水(shui)50倍(bei)稀(xi)釋。

雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA 操作(zuo)步驟
1）使用(yong)前(qian)，將(jiang)所有試劑充(chong)分混(hun)勻。不要使(shi)液體產生大(da)量(liang)的(de)泡沫，以免加樣(yang)時加入(ru)大(da)量(liang)的(de)氣泡，產生加樣(yang)上(shang)的(de)誤差。
2）根(gen)據待(dai)測樣(yang)品數量加上(shang)標準品的(de)數量決定(ding)所需(xu)的(de)板條(tiao)數。每(mei)個標準品和空白(bai)孔(kong)建議做復(fu)孔。每(mei)個樣(yang)品根(gen)據自己(ji)的(de)數量來(lai)定，能(neng)使用(yong)復孔(kong)的(de)盡量(liang)做復孔。標本用(yong)標本稀釋(shi)液1：1稀釋後加入(ru)50ul於反(fan)應(ying)孔內(nei)。
3）加入(ru)稀(xi)釋(shi)好(hao)後的(de)標準品50ul於反(fan)應(ying)孔、加入(ru)待(dai)測樣(yang)品50ul於反(fan)應(ying)孔內(nei)。立(li)即(ji)加入(ru)50ul的(de)生物(wu)素(su)標記的(de)。蓋上(shang)膜板，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育1小時。
4）甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液(ye)體，每(mei)孔加滿洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩30秒，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操作(zuo)3次。如(ru)果(guo)用(yong)洗滌(di)，洗滌(di)次數增加壹(yi)次。
5）每(mei)孔加入(ru)80ul的(de)親和鏈酶素(su)-HRP，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。
6）甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液(ye)體，每(mei)孔加滿洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩30秒，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操作(zuo)3次。如(ru)果(guo)用(yong)洗滌(di)，洗滌(di)次數增加壹(yi)次。
7）每(mei)孔加入(ru)底(di)物(wu)A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育10分鐘(zhong)。避(bi)免光(guang)照(zhao)。
8）取出酶標板，迅速加入(ru)50ul終(zhong)止(zhi)液，加入(ru)終(zhong)止(zhi)液後應(ying)立即(ji)測定結(jie)果(guo)。
9）在(zai)450nm波長處(chu)測定各(ge)孔(kong)的(de)OD值。
壹(yi)些好(hao)評
辦(ban)事(shi)效率(lv)蠻高(gao)，幾天，就(jiu)幫(bang)我(wo)搞定了這(zhe)個，謝謝！盒子(zi)蠻不錯(cuo)，包含(han)所需(xu)試劑，並提供(gong)了中(zhong)英(ying)文雙(shuang)版說(shuo)明書(shu)及(ji)增(zeng)值稅(shui)，很，銷售(shou)人員的(de)態度(du)也謙和。靈(ling)敏(min)度(du)不錯(cuo)，重復(fu)性(xing)也行(xing)，在我(wo)做(zuo)的(de)這(zhe)些實(shi)驗中(zhong)，與國(guo)內(nei)同行的(de)盒子(zi)相比來(lai)說，性(xing)價(jia)比挺(ting)高(gao)的(de)，尤其是價(jia)格占(zhan)有不錯(cuo)的(de)優勢(shi)，贊壹(yi)個！操作(zuo)挺(ting)方(fang)便(bian)的(de)，也簡單，當(dang)然(ran)，這(zhe)也多虧(kui)了公(gong)司(si)的(de)技(ji)術(shu)人員詳(xiang)細(xi)的(de)實(shi)驗指導(dao)，很好(hao)，謝(xie)謝，實(shi)驗也相當成功。實(shi)驗出來(lai)的(de)標準曲線很不錯(cuo)（很優(you)美(mei)），而(er)且(qie)價(jia)格相對合理，技(ji)術(shu)指(zhi)導(dao)很到位(wei)......我(wo)購(gou)買了兩(liang)盒，批(pi)次新(xin)，保(bao)質(zhi)期(qi)內(nei)，實(shi)驗結果(guo)做(zuo)出來(lai)了，貨到的(de)挺(ting)快(kuai)，那麽(me)遠(yuan)，幾天就(jiu)到了，加上(shang)我(wo)做(zuo)實(shi)驗，壹(yi)共(gong)五天就(jiu)搞定了。經(jing)朋友介(jie)紹，購(gou)買了此(ci)公(gong)司(si)的(de)ELISA，用(yong)過，還(hai)不錯(cuo)，實(shi)驗效果(guo)很好(hao)，基(ji)本達(da)到實(shi)驗參數要求(qiu)，如果(guo)，下次還(hai)做(zuo)實(shi)驗的(de)話，我(wo)還(hai)買這(zhe)家的(de)，朋友這(zhe)幾年(nian)都在用(yong)這(zhe)家的(de)（長期(qi)訂(ding)貨）。
雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA 局限(xian)
6號(hao)標準品以(yi)上(shang)的(de)結果(guo)為(wei)非(fei)線性(xing)的(de)，根(gen)據此(ci)標準曲線無(wu)法得(de)到的(de)結果(guo)。
雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA 性能(neng)
1. 靈(ling)敏(min)度(du)：小的(de)檢測濃度(du)小於1號(hao)標準品。稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)線性(xing)。樣(yang)品線性(xing)回(hui)歸(gui)與預(yu)期(qi)濃度(du)相關系(xi)數R值為(wei)0.990。
2. 特(te)異性(xing)：不與其它(ta)細(xi)胞因子(zi)反(fan)應(ying)。
3. 重復(fu)性(xing)：板內(nei)、板間變異系(xi)數均小於10%。

雞蛋白(bai)酶受體4(PAR4)ELISA  結果(guo)判(pan)斷與分析
1、儀(yi)器值：於波(bo)長(chang)450nm的(de)上(shang)讀取各(ge)孔的(de)OD值
2、以吸光度(du)OD值為(wei)縱坐標（Y），相應(ying)的(de)待測物(wu)質(zhi)標準品濃度(du)為(wei)橫(heng)坐標（X），做得相應(ying)的(de)曲線，樣(yang)品的(de)待測物(wu)質(zhi)含(han)量(liang)可根(gen)據其OD值由標準曲線換算(suan)出相應(ying)的(de)濃度(du)。

wyn8024