綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1（KIM-1）ELISA

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產品名(ming)稱:綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA。

類別 :ELISA
貨期 :7-10天(tian)
綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA。註(zhu)意事(shi)項：
收(shou)集標本前(qian)必(bi)須(xu)清楚(chu)要檢(jian)測的(de)成(cheng)份(fen)是(shi)否(fou)足夠穩定。對(dui)收集(ji)後(hou)當(dang)天(tian)進(jin)行檢(jian)測的(de)標本，儲(chu)存(cun)在(zai)4℃備用(yong)，如有(you)特殊原因需要周(zhou)期收集(ji)標本，將標本及(ji)時分裝(zhuang)後放(fang)在(zai)-20℃或(huo)-70℃條件(jian)下(xia)保存。避(bi)免反(fan)復凍融。標本2-8℃可(ke)保存48小(xiao)時(shi)，-20℃可(ke)保存1個月(yue)。-70度(du)可(ke)保存6個月(yue)。部分標本需添(tian)加抑(yi)肽酶。
1.  試(shi)劑(ji)準備：所有(you)試劑(ji)都必(bi)須(xu)在(zai)使(shi)用(yong)前達(da)到(dao)室溫，使用(yong)後請(qing)立即(ji)按照(zhao)說明書(shu)要求(qiu)保存試(shi)劑(ji)。  實(shi)驗操(cao)作中請(qing)使用(yong)壹次(ci)性的(de)吸(xi)頭，避(bi)免交叉汙染。
2.   加(jia)樣：加(jia)樣或(huo)加試(shi)劑時，請註(zhu)意在(zai)吸(xi)取(qu)標本 / 標準品，酶結合物或(huo)底(di)物時(shi)，前壹個孔與(yu)後(hou)壹個孔加(jia)樣之(zhi)間(jian)的(de)時(shi)間(jian)間隔(ge)如(ru)果(guo)太大，將會導(dao)致不(bu)同(tong)的(de) “預(yu)孵育(yu)"時間，從而(er)明(ming)顯地(di)影響到(dao)測量(liang)值的(de)準確性(xing)及(ji)重(zhong)復(fu)性(xing)。壹次(ci)加樣時(shi)間(jian)(包(bao)括標準品及所有(you)樣品)好控制(zhi)在(zai)10分(fen)鐘內，如標本數(shu)量(liang)多(duo)，推(tui)薦(jian)使用(yong)多道移液(ye)器(qi)加(jia)樣。
3.   孵育(yu)：為(wei)防止(zhi)樣品蒸發，試驗時將反(fan)應板(ban)放於鋪有(you)濕(shi)布的(de)密(mi)閉盒內，酶標板加上(shang)蓋或(huo)覆(fu)膜，以(yi)避(bi)免液(ye)體(ti)蒸發；洗(xi)板(ban)後應盡(jin)快進行下(xia)步(bu)操(cao)作，任何(he)時(shi)侯都應避(bi)免酶(mei)標板處於幹(gan)燥(zao)狀(zhuang)態(tai);同(tong)時應嚴(yan)格遵守給定(ding)的(de)孵育(yu)時間和溫度(du)。
4.   洗(xi)滌(di)：洗(xi)滌(di)過(guo)程(cheng)中反(fan)應孔(kong)中殘(can)留的(de)洗(xi)滌(di)液(ye)應在(zai)濾紙上(shang)充分拍幹，勿(wu)將濾紙直(zhi)接放入(ru)反(fan)應孔(kong)中吸(xi)水，同(tong)時要消(xiao)除(chu)板底(di)殘(can)留的(de)液(ye)體(ti)和手指印，避(bi)免影響後(hou)的(de)讀(du)數(shu)。
5.  試劑配制(zhi)：Detection A及(ji)Detection B在(zai)使(shi)用(yong)前請(qing)手甩(shuai)幾(ji)下(xia)或(huo)少時(shi)離(li)心(xin)處理(li)，以使管(guan)壁(bi)或(huo)瓶蓋(gai)的(de)液(ye)體(ti)沈(chen)積到(dao)管底(di)。標準品、檢(jian)測溶液(ye)A工作液、檢(jian)測溶液(ye)B工作液請依據(ju)所需的(de)量(liang)配(pei)置(zhi)使(shi)用(yong)，並使(shi)用(yong)相應的(de)稀釋(shi)液(ye)配(pei)制(zhi)，不(bu)能(neng)混(hun)淆(xiao)。請確配(pei)置(zhi)標準品及工作液，盡量(liang)不(bu)要微量(liang)配(pei)置(zhi)(如(ru)吸取(qu)檢(jian)測溶液(ye)A時，壹(yi)次不(bu)要小於(yu)10μl)，以避(bi)免由於不(bu)準確稀釋(shi)而(er)造成的(de)濃(nong)度(du)誤(wu)差(cha)；請(qing)勿(wu)重復(fu)使(shi)用(yong)已稀釋(shi)過(guo)的(de)標準品、檢(jian)測溶液(ye)A工作液或(huo)檢(jian)測溶液(ye)B工作液。
6.  反(fan)應時(shi)間的(de)控(kong)制(zhi)：加(jia)入底(di)物後(hou)請定時(shi)觀(guan)察(cha)反(fan)應孔(kong)的(de)顏色變(bian)化(比如(ru)，每隔(ge)10分(fen)鐘)，如顏色較(jiao)深，請(qing)提前(qian)加(jia)入終止液終止反(fan)應，避(bi)免反(fan)應過(guo)強從而(er)影響光(guang)密(mi)度(du)讀數(shu)。
7.  底(di)物：底(di)物請(qing)避(bi)光保存，在(zai)儲(chu)存(cun)和溫育(yu)時避(bi)免強(qiang)光(guang)直(zhi)接照(zhao)射(she)。
    建(jian)議檢(jian)測樣品時均設(she)雙(shuang)孔測定，以(yi)保證檢(jian)測結果(guo)的(de)準確性(xing)。
    如(ru)標本中待測物質(zhi)含量(liang)過(guo)高(gao)，請(qing)先(xian)稀釋(shi)後(hou)再(zai)測定，計(ji)算(suan)時(shi)請(qing)後(hou)乘以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)。
洗(xi)板(ban)方法
1.  手(shou)工洗(xi)板(ban)方法：吸(xi)去(不(bu)可(ke)觸(chu)及(ji)板(ban)壁(bi))或(huo)甩(shuai)掉(diao)酶(mei)標板內的(de)液(ye)體(ti)；在(zai)實(shi)驗臺上(shang)鋪墊(dian)幾(ji)層(ceng)吸水紙(zhi)，酶(mei)標板朝下(xia)用(yong)力拍幾(ji)次(ci)；將推薦(jian)的(de)洗(xi)滌(di)緩沖液(ye)至(zhi)少0.3ml註(zhu)入孔(kong)內，浸泡1-2分鐘，根據(ju)需要，重復(fu)此過程(cheng)數(shu)次(ci)。
2.  自動洗(xi)板(ban)：如果(guo)有(you)自動，應在(zai)熟(shu)練使(shi)用(yong)後再(zai)用(yong)到正(zheng)式(shi)實(shi)驗過程(cheng)中。
液(ye)體類(lei)標本：
標本必(bi)須(xu)為(wei)液體(ti)，不(bu)含(han)沈(chen)澱。包(bao)括、、尿液(ye)、胸(xiong)腹水、腦脊(ji)液、細(xi)胞(bao)培(pei)養上(shang)清、組織勻(yun)漿等(deng)。1ml的(de)全(quan)血可(ke)得到0.5ml的(de)或(huo)。每個標本量(liang)收(shou)集(ji)體(ti)積＝100ul×檢(jian)測種類(lei)。
◇      ：
室溫血液(ye)自然凝(ning)固10-20分(fen)鐘後，離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集(ji)上(shang)清。如有(you)沈(chen)澱形(xing)成(cheng)，應再(zai)次離(li)心(xin)。
◇      ：
應根(gen)據(ju)的(de)要求(qiu)選(xuan)擇(ze)EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鈉(na)或(huo)肝(gan)素(su)作為(wei)抗凝(ning)劑，加(jia)入(ru)10％(v/v)抗凝(ning)劑(0.1M檸(ning)檬(meng)酸鈉(na)或(huo)1% heparin 或(huo)2.0%EDTA.Na2)混(hun)合10-20分(fen)鐘後，離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清。如有(you)沈(chen)澱形(xing)成(cheng)，應再(zai)次離(li)心(xin)。
◇      尿液(ye)、胸(xiong)腹水、腦脊(ji)液：
用(yong)無菌(jun)管收(shou)集。離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清。如有(you)沈(chen)澱形(xing)成(cheng)，應再(zai)次離(li)心(xin)。
◇      細(xi)胞(bao)培(pei)養上(shang)清：
檢(jian)測分泌(mi)性的(de)成(cheng)份(fen)時(shi)，用(yong)無菌(jun)管收(shou)集。離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清。檢(jian)測細(xi)胞(bao)內的(de)成(cheng)份(fen)時(shi)，用(yong)PBS(PH7.2-7.4)稀釋(shi)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，細(xi)胞(bao)濃(nong)度(du)達(da)到(dao)100萬/ml左(zuo)右。通過反(fan)復凍融，以(yi)使(shi)細(xi)胞(bao)破(po)壞(huai)並放(fang)出細(xi)胞(bao)內成份(fen)。離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清。保存過(guo)程(cheng)中如(ru)有(you)沈(chen)澱形(xing)成(cheng)，應再(zai)次離(li)心(xin)。
◇      組織標本：
切割(ge)標本後(hou)，稱取(qu)重量(liang)。加(jia)入(ru)壹(yi)定量(liang)的(de)PBS，緩沖液(ye)中可(ke)加(jia)入(ru)1μg/L蛋(dan)白酶抑制(zhi)劑(ji)或(huo)50U/ml的(de)Aprotinin(抑(yi)肽酶)。用(yong)手工或(huo)勻(yun)漿器(qi)將標本勻(yun)漿充(chong)分(fen)。離(li)心(xin)20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清置於-20度(du)或(huo)- 70度(du)保存，如(ru)有(you)必(bi)要，可(ke)以(yi)將樣品濃縮幹燥(zao)。分裝(zhuang)後壹份(fen)待檢(jian)測，其余(yu)冷凍備用(yong)。
寄標本時(shi)需註(zhu)明以(yi)下(xia)情(qing)況：
1、標本編(bian)號(hao)；2、所測項目(mu)；3、是(shi)否(fou)做復(fu)孔；4、實驗後標本是(shi)否(fou)寄回(hui)

綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA 安全性(xing)
1）避(bi)免直(zhi)接接觸(chu)終止液和底(di)物A、B。壹(yi)旦接觸(chu)到(dao)這(zhe)些(xie)液體(ti)，請(qing)盡(jin)快用(yong)水沖洗(xi)。
2）實(shi)驗中不(bu)要吃喝(he)、抽煙或(huo)使用(yong)化妝(zhuang)品。
3）不(bu)要用(yong)嘴吸(xi)取(qu)裏的(de)任何(he)成(cheng)份(fen)。

綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA 操(cao)作註(zhu)意事(shi)項
1）試(shi)劑應按標簽說明書(shu)儲(chu)存(cun)，使(shi)用(yong)前恢(hui)復到(dao)室溫。稀稀過後(hou)的(de)標準品應丟(diu)棄(qi)，不(bu)可(ke)保存。
2）實(shi)驗中不(bu)用(yong)的(de)板(ban)條(tiao)應立即(ji)放回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋中，密(mi)封保存，以(yi)免變(bian)質。
3）不(bu)用(yong)的(de)其(qi)它(ta)試劑應包(bao)裝(zhuang)好或(huo)蓋好。不(bu)同(tong)批號(hao)的(de)試(shi)劑(ji)不(bu)要混(hun)用(yong)。保質前(qian)使(shi)用(yong)。
4）使用(yong)壹次(ci)性的(de)吸(xi)頭以免交叉汙染，吸(xi)取(qu)終止液和底(di)物A、B液(ye)時，避(bi)免使(shi)用(yong)帶金(jin)屬部分(fen)的(de)加(jia)樣器(qi)。
5）使(shi)用(yong)幹凈的(de)塑(su)料(liao)容器(qi)配(pei)置(zhi)洗(xi)滌(di)液(ye)。使(shi)用(yong)前充(chong)分混(hun)勻(yun)裏的(de)各(ge)種(zhong)成份(fen)及(ji)樣品。
6）洗(xi)滌(di)酶(mei)標板時應充(chong)分拍幹，不(bu)要將吸水紙(zhi)直(zhi)接放入(ru)酶標反(fan)應孔(kong)中吸(xi)水。
7）底(di)物A應揮(hui)發，避(bi)免長時間(jian)打(da)開(kai)蓋(gai)子。底(di)物B對(dui)光敏(min)感(gan)，避(bi)免長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)光(guang)下(xia)。避(bi)免用(yong)手接(jie)觸，有(you)毒。實驗完成後(hou)應立即(ji)讀取(qu)OD值。
8）加(jia)入試劑的(de)順(shun)序(xu)應壹(yi)致，以保證所有(you)反(fan)應板(ban)孔溫育(yu)的(de)時(shi)間(jian)壹樣。
9）按照(zhao)說明書(shu)中標明的(de)時(shi)間(jian)、加液的(de)量(liang)及(ji)順(shun)序(xu)進行溫育(yu)操(cao)作。

綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA 樣品收集、處理(li)及保存方(fang)法
1）-----操(cao)作過程(cheng)中避(bi)免任何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激。使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原和內的(de)試(shi)管(guan)。收集血液(ye)後，1000×g離(li)心(xin)10分鐘將和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離(li)。
2）-----EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽、肝(gan)素(su)可(ke)用(yong)於檢(jian)測。1000×g離(li)心(xin)30分鐘去除(chu)顆(ke)粒。
3）細(xi)胞(bao)上(shang)清液---1000×g離(li)心(xin)10分鐘去除(chu)顆(ke)粒和聚合物。
4）組織勻(yun)漿-----將組織加入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水搗碎。1000×g離(li)心(xin)10分鐘，取(qu)上(shang)清液
5）保存------如(ru)果(guo)樣品不(bu)立即(ji)使用(yong)，應將其分(fen)成小(xiao)部(bu)分(fen)-70 ℃保存，避(bi)免反(fan)復冷凍。盡可(ke)能(neng)的(de)不(bu)要使用(yong)溶血或(huo)高血脂(zhi)血。如(ru)果(guo)中大量(liang)顆(ke)粒，檢(jian)測前先(xian)離(li)心(xin)或(huo)過濾。不(bu)要在(zai)37℃或(huo)更高(gao)的(de)溫(wen)度(du)加熱(re)解凍。應在(zai)室溫下(xia)解凍並確保樣品均勻(yun)地充(chong)分(fen)解凍。

綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA 試劑(ji)的(de)準備
1）標準品：標準品的(de)系(xi)列(lie)稀釋(shi)應在(zai)實(shi)驗時準備，不(bu)能(neng)儲(chu)存(cun)。稀釋(shi)前(qian)將標準品振蕩(dang)混(hun)勻(yun)。
2）洗(xi)滌(di)緩沖液(ye)（50×）的(de)稀釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水50倍(bei)稀釋(shi)。

綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA 操(cao)作步驟
1）使(shi)用(yong)前，將所有(you)試劑(ji)充分混(hun)勻(yun)。不(bu)要使液(ye)體產生(sheng)大量(liang)的(de)泡(pao)沫，以免加(jia)樣時(shi)加(jia)入大量(liang)的(de)氣(qi)泡，產生(sheng)加樣上(shang)的(de)誤(wu)差(cha)。
2）根(gen)據(ju)待測樣品數量(liang)加(jia)上(shang)標準品的(de)數(shu)量(liang)決定所需的(de)板(ban)條(tiao)數。每個標準品和空白孔(kong)建(jian)議做復(fu)孔。每個樣品根據(ju)自己(ji)的(de)數(shu)量(liang)來(lai)定，能(neng)使用(yong)復孔(kong)的(de)盡(jin)量(liang)做復(fu)孔。標本用(yong)標本稀釋(shi)液(ye)1：1稀釋(shi)後(hou)加(jia)入(ru)50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)內。
3）加入(ru)稀釋(shi)好後的(de)標準品50ul於反(fan)應孔(kong)、加入待測樣品50ul於反(fan)應孔(kong)內。立即(ji)加入(ru)50ul的(de)生(sheng)物素(su)標記(ji)的(de)。蓋(gai)上(shang)膜板，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育(yu)1小時。
4）甩(shuai)去孔內液體(ti)，每孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液(ye)，用(yong)吸水紙(zhi)拍幹。重復(fu)此(ci)操(cao)作3次。如果(guo)用(yong)洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增加壹(yi)次(ci)。
5）每孔加(jia)入80ul的(de)親(qin)和鏈酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育(yu)30分鐘。
6）甩(shuai)去孔內液體(ti)，每孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液(ye)，用(yong)吸水紙(zhi)拍幹。重復(fu)此(ci)操(cao)作3次。如果(guo)用(yong)洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增加壹(yi)次(ci)。
7）每孔加(jia)入底(di)物A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育(yu)10分鐘。避(bi)免光(guang)照(zhao)。
8）取(qu)出酶標板，迅(xun)速(su)加(jia)入(ru)50ul終止液，加(jia)入(ru)終止液後(hou)應立即(ji)測定結(jie)果(guo)。
9）在(zai)450nm波長處測定各(ge)孔(kong)的(de)OD值。
壹(yi)些(xie)好評
辦(ban)事效(xiao)率(lv)蠻高(gao)，幾(ji)天(tian)，就(jiu)幫我搞定(ding)了這(zhe)個，謝謝(xie)！盒子(zi)蠻不(bu)錯(cuo)，包(bao)含(han)所需試劑，並(bing)提供(gong)了(le)中英(ying)文雙(shuang)版說明(ming)書(shu)及(ji)增值稅(shui)，很，銷售人(ren)員的(de)態(tai)度(du)也謙(qian)和。靈敏(min)度(du)不(bu)錯(cuo)，重復(fu)性(xing)也(ye)行，在(zai)我做的(de)這(zhe)些(xie)實驗中，與(yu)國內同(tong)行的(de)盒子(zi)相比來(lai)說，性(xing)價比挺高(gao)的(de)，尤(you)其(qi)是價格占(zhan)有(you)不(bu)錯(cuo)的(de)優(you)勢(shi)，贊壹個！操(cao)作挺方(fang)便的(de)，也(ye)簡單(dan)，當(dang)然，這(zhe)也(ye)多虧了公司(si)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員詳(xiang)細(xi)的(de)實(shi)驗指導(dao)，很好，謝謝(xie)，實驗也相當(dang)成(cheng)功(gong)。實驗出來(lai)的(de)標準曲(qu)線很不(bu)錯(cuo)（很優美），而(er)且(qie)價(jia)格(ge)相對(dui)合理(li)，技術(shu)指導(dao)很到位......我購買(mai)了兩(liang)盒，批(pi)次新，保質期內，實驗結果(guo)做出來(lai)了，貨到(dao)的(de)挺快(kuai)，那(na)麽遠，幾(ji)天(tian)就(jiu)到(dao)了，加上(shang)我做實(shi)驗，壹共(gong)五(wu)天(tian)就(jiu)搞(gao)定了。經朋(peng)友(you)介(jie)紹，購買了此(ci)公司(si)的(de)ELISA，用(yong)過，還(hai)不(bu)錯(cuo)，實驗效(xiao)果(guo)很好，基(ji)本達(da)到(dao)實(shi)驗參(can)數(shu)要求(qiu)，如果(guo)，下(xia)次(ci)還做實(shi)驗的(de)話(hua)，我還買(mai)這(zhe)家(jia)的(de)，朋(peng)友(you)這(zhe)幾(ji)年都(dou)在(zai)用(yong)這(zhe)家(jia)的(de)（長期訂貨）。
綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA 局限(xian)
6號(hao)標準品以上(shang)的(de)結(jie)果(guo)為(wei)非線性的(de)，根(gen)據(ju)此標準曲(qu)線無法得到的(de)結(jie)果(guo)。
綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA 性能(neng)
1. 靈(ling)敏(min)度(du)：小的(de)檢(jian)測濃度(du)小於(yu)1號(hao)標準品。稀釋(shi)度(du)的(de)線(xian)性(xing)。樣品線性回(hui)歸與(yu)預(yu)期濃度(du)相關系(xi)數(shu)R值為(wei)0.990。
2. 特異性(xing)：不(bu)與(yu)其(qi)它(ta)細(xi)胞(bao)因子反(fan)應。
3. 重(zhong)復性：板(ban)內、板間(jian)變(bian)異系(xi)數(shu)均小於10%。

綿(mian)羊腎損(sun)傷分子(zi)1(KIM-1)ELISA  結果(guo)判(pan)斷與(yu)分(fen)析
1、儀器(qi)值：於(yu)波長450nm的(de)上(shang)讀取(qu)各(ge)孔(kong)的(de)OD值
2、以(yi)吸光度(du)OD值為(wei)縱坐標（Y），相應的(de)待測物質(zhi)標準品濃度(du)為(wei)橫坐(zuo)標（X），做得相應的(de)曲(qu)線，樣品的(de)待測物質(zhi)含量(liang)可(ke)根(gen)據(ju)其OD值由標準曲(qu)線換算(suan)出相應的(de)濃(nong)度(du)。

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