綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白（α Actin）ELISA

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產(chan)品名(ming)稱:綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA。

類別 :ELISA
貨(huo)期 :7-10天(tian)
綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA。註(zhu)意(yi)事項(xiang)：
收集(ji)標本(ben)前必(bi)須(xu)清(qing)楚要檢(jian)測的(de)成份(fen)是(shi)否足夠(gou)穩定。對收集(ji)後當(dang)天(tian)進行檢(jian)測的(de)標本(ben)，儲(chu)存(cun)在(zai)4℃備用，如有特(te)殊原因需(xu)要周期收集(ji)標本(ben)，將標(biao)本及(ji)時(shi)分(fen)裝後放在(zai)-20℃或(huo)-70℃條件下(xia)保存(cun)。避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)。標本(ben)2-8℃可保存(cun)48小(xiao)時(shi)，-20℃可保存(cun)1個(ge)月。-70度(du)可保存(cun)6個(ge)月。部分(fen)標(biao)本(ben)需添(tian)加(jia)抑肽酶。
1.  試劑準(zhun)備：所有試劑都(dou)必(bi)須(xu)在(zai)使(shi)用前達(da)到室(shi)溫(wen)，使(shi)用後請(qing)立即按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書要求保(bao)存(cun)試劑。  實(shi)驗(yan)操(cao)作中請(qing)使(shi)用壹(yi)次(ci)性的(de)吸頭，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙染。
2.   加(jia)樣：加(jia)樣或(huo)加(jia)試劑時(shi)，請(qing)註(zhu)意(yi)在吸取標本 / 標準(zhun)品，酶結合物或(huo)底(di)物時(shi)，前壹(yi)個(ge)孔(kong)與後(hou)壹(yi)個(ge)孔(kong)加(jia)樣之間的(de)時(shi)間間隔(ge)如果(guo)太大(da)，將會(hui)導(dao)致(zhi)不(bu)同的 “預(yu)孵育"時間，從(cong)而(er)明(ming)顯地(di)影響(xiang)到測(ce)量(liang)值的準(zhun)確性及(ji)重(zhong)復性。壹(yi)次(ci)加(jia)樣時間(包(bao)括(kuo)標(biao)準(zhun)品及(ji)所有樣(yang)品(pin))好(hao)控(kong)制(zhi)在(zai)10分(fen)鐘(zhong)內，如標本數量(liang)多，推薦(jian)使(shi)用多道移液器加(jia)樣。
3.   孵育：為(wei)防(fang)止樣(yang)品蒸(zheng)發，試驗時(shi)將(jiang)反(fan)應板(ban)放於(yu)鋪有濕(shi)布的密閉盒內，酶標板加(jia)上蓋(gai)或(huo)覆膜，以避免(mian)液體蒸(zheng)發；洗板(ban)後應盡(jin)快進行下(xia)步(bu)操(cao)作，任(ren)何時侯(hou)都(dou)應避免(mian)酶標板處於(yu)幹(gan)燥狀態;同時應嚴(yan)格(ge)遵(zun)守給定的(de)孵育時間和溫(wen)度(du)。
4.   洗滌(di)：洗滌(di)過(guo)程(cheng)中反(fan)應孔(kong)中殘留的洗滌(di)液應在(zai)濾紙上充分拍幹(gan)，勿將濾紙直接放入(ru)反(fan)應孔(kong)中吸水，同時要消除(chu)板底(di)殘留的液體和手(shou)指印(yin)，避(bi)免(mian)影(ying)響後的讀(du)數。
5.  試劑配(pei)制(zhi)：Detection A及(ji)Detection B在(zai)使(shi)用前請(qing)手(shou)甩(shuai)幾(ji)下(xia)或(huo)少(shao)時(shi)離(li)心(xin)處理，以使(shi)管(guan)壁(bi)或(huo)瓶(ping)蓋(gai)的液體沈積到管(guan)底。標(biao)準(zhun)品、檢(jian)測溶(rong)液A工作液、檢(jian)測溶(rong)液B工作液請(qing)依據所需(xu)的(de)量(liang)配(pei)置(zhi)使(shi)用，並使(shi)用相(xiang)應的(de)稀(xi)釋(shi)液配(pei)制(zhi)，不(bu)能(neng)混(hun)淆(xiao)。請(qing)確配(pei)置(zhi)標(biao)準(zhun)品及(ji)工(gong)作液，盡(jin)量不(bu)要微(wei)量(liang)配(pei)置(zhi)(如吸取檢(jian)測溶(rong)液A時，壹(yi)次(ci)不(bu)要小於(yu)10μl)，以避免(mian)由(you)於(yu)不(bu)準(zhun)確稀(xi)釋(shi)而(er)造(zao)成的(de)濃(nong)度(du)誤(wu)差；請(qing)勿重復使(shi)用已稀(xi)釋(shi)過(guo)的(de)標(biao)準(zhun)品、檢(jian)測溶(rong)液A工作液或(huo)檢(jian)測溶(rong)液B工作液。
6.  反(fan)應時(shi)間的(de)控(kong)制(zhi)：加(jia)入(ru)底(di)物後(hou)請(qing)定時觀察反(fan)應孔(kong)的顏色變化(比(bi)如，每隔10分鐘(zhong))，如顏色較深，請(qing)提(ti)前加(jia)入(ru)終(zhong)止液終止(zhi)反(fan)應，避(bi)免(mian)反(fan)應過(guo)強(qiang)從(cong)而(er)影(ying)響(xiang)光密度(du)讀(du)數。
7.  底物：底(di)物請(qing)避光保存(cun)，在(zai)儲(chu)存(cun)和溫(wen)育時避(bi)免(mian)強(qiang)光直接照(zhao)射(she)。
    建(jian)議(yi)檢(jian)測樣(yang)品時(shi)均設雙孔(kong)測(ce)定，以保證檢(jian)測結果(guo)的準(zhun)確性。
    如標本中待(dai)測物質(zhi)含(han)量過(guo)高(gao)，請(qing)先稀(xi)釋(shi)後(hou)再(zai)測定，計(ji)算(suan)時請(qing)後乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。
洗板(ban)方法
1.  手(shou)工洗板(ban)方法：吸(xi)去(qu)(不(bu)可觸及(ji)板(ban)壁(bi))或(huo)甩(shuai)掉酶標板內的(de)液體；在(zai)實驗(yan)臺(tai)上鋪(pu)墊幾層吸水紙，酶標板朝下(xia)用力(li)拍幾(ji)次(ci)；將推(tui)薦的(de)洗滌(di)緩沖(chong)液至少(shao)0.3ml註(zhu)入(ru)孔(kong)內，浸泡1-2分鐘(zhong)，根(gen)據(ju)需要，重復此(ci)過(guo)程(cheng)數次(ci)。
2.  自動(dong)洗板(ban)：如果(guo)有自(zi)動(dong)，應在(zai)熟練(lian)使(shi)用後再(zai)用到正(zheng)式(shi)實驗(yan)過(guo)程(cheng)中。
液體類標(biao)本(ben)：
標本(ben)必(bi)須(xu)為(wei)液體，不(bu)含(han)沈澱。包括(kuo)、、尿(niao)液、胸(xiong)腹(fu)水、腦(nao)脊液、細胞(bao)培養(yang)上(shang)清(qing)、組織勻(yun)漿(jiang)等(deng)。1ml的(de)全(quan)血(xue)可得到0.5ml的(de)或(huo)。每(mei)個(ge)標(biao)本(ben)量收集(ji)體積＝100ul×檢(jian)測種(zhong)類。
◇      ：
室(shi)溫(wen)血液自然(ran)凝固(gu)10-20分(fen)鐘(zhong)後(hou)，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuan)/分)。收集(ji)上清(qing)。如有沈澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離心(xin)。
◇      ：
應根(gen)據(ju)的要求選(xuan)擇(ze)EDTA、檸(ning)檬酸鈉(na)或(huo)肝(gan)素(su)作為(wei)抗凝(ning)劑，加(jia)入(ru)10％(v/v)抗凝(ning)劑(0.1M檸(ning)檬酸鈉(na)或(huo)1% heparin 或(huo)2.0%EDTA.Na2)混(hun)合10-20分(fen)鐘(zhong)後(hou)，離心(xin)20分(fen)鐘左(zuo)右(2000-3000轉/分(fen))。仔(zai)細收集(ji)上清(qing)。如有沈澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離心(xin)。
◇      尿液、胸(xiong)腹(fu)水、腦(nao)脊液：
用無菌(jun)管(guan)收集(ji)。離心(xin)20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分)。仔(zai)細收集(ji)上清(qing)。如有沈澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離心(xin)。
◇      細胞(bao)培養(yang)上(shang)清(qing)：
檢(jian)測分(fen)泌性(xing)的成份(fen)時(shi)，用無菌(jun)管(guan)收集(ji)。離心(xin)20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分)。仔(zai)細收集(ji)上清(qing)。檢(jian)測細胞(bao)內的(de)成份(fen)時(shi)，用PBS(PH7.2-7.4)稀(xi)釋(shi)細胞(bao)懸(xuan)液，細胞(bao)濃(nong)度(du)達(da)到100萬/ml左右(you)。通過(guo)反(fan)復凍融(rong)，以使(shi)細胞(bao)破(po)壞(huai)並(bing)放出細胞(bao)內成份(fen)。離(li)心20分(fen)鐘左右(2000-3000轉/分(fen))。仔(zai)細收集(ji)上清(qing)。保存(cun)過(guo)程(cheng)中如有沈澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離心(xin)。
◇      組織標(biao)本：
切(qie)割(ge)標本(ben)後(hou)，稱取(qu)重量。加(jia)入(ru)壹(yi)定(ding)量(liang)的(de)PBS，緩沖(chong)液中可加(jia)入(ru)1μg/L蛋白酶抑制(zhi)劑(ji)或(huo)50U/ml的(de)Aprotinin(抑(yi)肽(tai)酶)。用手(shou)工或(huo)勻(yun)漿(jiang)器(qi)將標(biao)本(ben)勻(yun)漿(jiang)充(chong)分。離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分)。仔(zai)細收集(ji)上清(qing)置於(yu)-20度(du)或(huo)- 70度(du)保(bao)存(cun)，如有必(bi)要，可以將樣品濃縮幹(gan)燥。分裝後壹(yi)份(fen)待(dai)檢(jian)測，其(qi)余(yu)冷(leng)凍(dong)備用。
寄標(biao)本(ben)時需註(zhu)明(ming)以下(xia)情況(kuang)：
1、標(biao)本(ben)編(bian)號(hao)；2、所測(ce)項(xiang)目；3、是(shi)否做復孔；4、實驗(yan)後(hou)標(biao)本是(shi)否(fou)寄(ji)回(hui)

綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA 安全性(xing)
1）避(bi)免(mian)直接接觸終(zhong)止(zhi)液和底(di)物A、B。壹(yi)旦(dan)接(jie)觸(chu)到這些(xie)液體，請(qing)盡(jin)快用水沖(chong)洗。
2）實(shi)驗中不(bu)要吃喝(he)、抽煙(yan)或(huo)使(shi)用化妝(zhuang)品(pin)。
3）不(bu)要用嘴(zui)吸取(qu)裏的任(ren)何成份(fen)。

綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA 操(cao)作註(zhu)意(yi)事項(xiang)
1）試劑應(ying)按(an)標(biao)簽(qian)說明(ming)書儲(chu)存(cun)，使(shi)用前恢復到室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的(de)標準(zhun)品應丟(diu)棄(qi)，不(bu)可保存(cun)。
2）實(shi)驗(yan)中(zhong)不(bu)用的板(ban)條應立(li)即放回(hui)包(bao)裝袋(dai)中(zhong)，密(mi)封保存(cun)，以免(mian)變(bian)質。
3）不(bu)用的其(qi)它試劑應(ying)包(bao)裝好(hao)或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同批號(hao)的(de)試劑不(bu)要混(hun)用。保質(zhi)前使(shi)用。
4）使(shi)用壹(yi)次(ci)性的(de)吸頭以免(mian)交(jiao)叉汙染，吸取(qu)終(zhong)止(zhi)液和底(di)物A、B液時，避(bi)免(mian)使(shi)用帶金(jin)屬(shu)部分(fen)的加(jia)樣器。
5）使(shi)用幹(gan)凈的塑(su)料容器配(pei)置(zhi)洗滌(di)液。使(shi)用前充分混(hun)勻(yun)裏的各(ge)種(zhong)成份(fen)及(ji)樣(yang)品(pin)。
6）洗滌(di)酶標板時應充分拍幹(gan)，不(bu)要將吸(xi)水紙直接放入(ru)酶標反(fan)應孔(kong)中吸水。
7）底(di)物A應(ying)揮發，避免(mian)長(chang)時(shi)間打(da)開蓋(gai)子。底(di)物B對(dui)光(guang)敏(min)感，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)光下(xia)。避免(mian)用手(shou)接觸(chu)，有毒。實驗(yan)完(wan)成後(hou)應(ying)立即讀(du)取(qu)OD值。
8）加(jia)入(ru)試劑的(de)順(shun)序應(ying)壹(yi)致(zhi)，以保證所有反(fan)應板(ban)孔溫育的時(shi)間壹(yi)樣(yang)。
9）按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書中標(biao)明的(de)時(shi)間、加(jia)液的量(liang)及(ji)順(shun)序進行溫育操(cao)作。

綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA 樣(yang)品收集(ji)、處理(li)及(ji)保(bao)存(cun)方法
1）-----操(cao)作過(guo)程(cheng)中避(bi)免(mian)任(ren)何細胞(bao)刺激。使(shi)用不(bu)含(han)熱原和內的(de)試管(guan)。收集(ji)血液後，1000×g離(li)心10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)和紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速小心地(di)分離(li)。
2）-----EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)、肝(gan)素(su)可用於(yu)檢(jian)測。1000×g離(li)心30分(fen)鐘去除(chu)顆粒。
3）細胞(bao)上(shang)清(qing)液---1000×g離心(xin)10分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒和聚(ju)合物。
4）組織勻(yun)漿(jiang)-----將(jiang)組織加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理鹽水搗(dao)碎(sui)。1000×g離(li)心(xin)10分鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)液
5）保存(cun)------如果(guo)樣品(pin)不(bu)立即使(shi)用，應將(jiang)其(qi)分(fen)成小(xiao)部(bu)分-70 ℃保(bao)存(cun)，避(bi)免(mian)反(fan)復冷(leng)凍(dong)。盡(jin)可能(neng)的(de)不(bu)要使(shi)用溶血(xue)或(huo)高(gao)血脂血。如果(guo)中大(da)量顆粒，檢(jian)測前先離(li)心(xin)或(huo)過(guo)濾。不(bu)要在37℃或(huo)更(geng)高(gao)的溫(wen)度(du)加(jia)熱解凍。應(ying)在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均勻(yun)地(di)充分(fen)解凍。

綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA 試劑的(de)準(zhun)備
1）標(biao)準(zhun)品：標準(zhun)品的系列稀(xi)釋(shi)應(ying)在(zai)實驗時(shi)準(zhun)備，不(bu)能(neng)儲(chu)存(cun)。稀(xi)釋(shi)前將標準(zhun)品振蕩(dang)混(hun)勻(yun)。
2）洗滌(di)緩沖(chong)液（50×）的稀(xi)釋(shi)：蒸(zheng)餾水50倍(bei)稀(xi)釋(shi)。

綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA 操(cao)作步(bu)驟
1）使(shi)用前，將所有試劑充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)。不(bu)要使(shi)液體產(chan)生(sheng)大(da)量的(de)泡沫(mo)，以免(mian)加(jia)樣時加(jia)入(ru)大(da)量的(de)氣泡，產生(sheng)加(jia)樣上的(de)誤(wu)差。
2）根(gen)據(ju)待(dai)測樣(yang)品數(shu)量加(jia)上標準(zhun)品的數(shu)量(liang)決(jue)定所需(xu)的(de)板(ban)條數。每(mei)個標(biao)準(zhun)品和空(kong)白(bai)孔(kong)建議(yi)做復孔。每個(ge)樣(yang)品(pin)根(gen)據(ju)自己的數(shu)量(liang)來(lai)定，能(neng)使(shi)用復孔的盡(jin)量做復孔。標本(ben)用標本(ben)稀(xi)釋(shi)液1：1稀(xi)釋(shi)後(hou)加(jia)入(ru)50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)內。
3）加(jia)入(ru)稀(xi)釋(shi)好(hao)後(hou)的(de)標(biao)準(zhun)品50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)、加(jia)入(ru)待(dai)測樣(yang)品50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)內。立(li)即加(jia)入(ru)50ul的(de)生(sheng)物素(su)標(biao)記(ji)的(de)。蓋(gai)上膜板，輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育1小時(shi)。
4）甩(shuai)去(qu)孔內液體，每(mei)孔加(jia)滿洗滌(di)液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液，用吸水紙拍幹(gan)。重復此(ci)操(cao)作3次(ci)。如果(guo)用洗滌(di)，洗滌(di)次(ci)數增加(jia)壹(yi)次(ci)。
5）每孔(kong)加(jia)入(ru)80ul的(de)親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。
6）甩(shuai)去(qu)孔內液體，每(mei)孔加(jia)滿洗滌(di)液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液，用吸水紙拍幹(gan)。重復此(ci)操(cao)作3次(ci)。如果(guo)用洗滌(di)，洗滌(di)次(ci)數增加(jia)壹(yi)次(ci)。
7）每孔(kong)加(jia)入(ru)底(di)物A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育10分鐘(zhong)。避免(mian)光(guang)照(zhao)。
8）取(qu)出酶標板，迅速加(jia)入(ru)50ul終(zhong)止液，加(jia)入(ru)終(zhong)止液後應(ying)立即測(ce)定(ding)結果(guo)。
9）在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測(ce)定(ding)各(ge)孔(kong)的(de)OD值。
壹(yi)些(xie)好(hao)評(ping)
辦(ban)事效率蠻(man)高(gao)，幾天(tian)，就(jiu)幫我(wo)搞定了這個，謝(xie)謝(xie)！盒子蠻不(bu)錯，包(bao)含(han)所需(xu)試劑，並(bing)提(ti)供(gong)了中英文雙版說明(ming)書及(ji)增值稅，很(hen)，銷(xiao)售人員(yuan)的態(tai)度(du)也謙和。靈(ling)敏(min)度(du)不(bu)錯，重(zhong)復性也行，在我(wo)做的這些(xie)實(shi)驗(yan)中，與國(guo)內同行的盒子相(xiang)比來(lai)說(shuo)，性(xing)價比挺(ting)高(gao)的，尤(you)其(qi)是(shi)價格(ge)占(zhan)有不(bu)錯的(de)優(you)勢，贊壹(yi)個(ge)！操(cao)作挺(ting)方便的(de)，也簡(jian)單(dan)，當然(ran)，這也多虧(kui)了(le)公(gong)司的技(ji)術人員(yuan)詳細的(de)實(shi)驗指導(dao)，很(hen)好(hao)，謝(xie)謝(xie)，實(shi)驗(yan)也相(xiang)當成功(gong)。實(shi)驗出來的(de)標準(zhun)曲線很(hen)不(bu)錯（很(hen)優(you)美(mei)），而(er)且價格(ge)相(xiang)對合理(li)，技(ji)術指導(dao)很(hen)到位(wei)......我(wo)購買了(le)兩盒，批次(ci)新，保(bao)質期內，實(shi)驗結果(guo)做出來了(le)，貨到的(de)挺(ting)快，那(na)麽(me)遠(yuan)，幾天(tian)就(jiu)到了(le)，加(jia)上我(wo)做實驗，壹(yi)共(gong)五(wu)天(tian)就(jiu)搞(gao)定(ding)了(le)。經朋友介紹，購買了(le)此(ci)公(gong)司的ELISA，用過(guo)，還(hai)不(bu)錯，實(shi)驗效果(guo)很(hen)好(hao)，基(ji)本(ben)達(da)到實(shi)驗(yan)參數要求，如果(guo)，下(xia)次(ci)還(hai)做實(shi)驗(yan)的(de)話，我(wo)還(hai)買這家的，朋友這幾年(nian)都(dou)在用這家的（長(chang)期訂貨）。
綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA 局(ju)限
6號(hao)標(biao)準(zhun)品以上的結果(guo)為(wei)非(fei)線性(xing)的(de)，根(gen)據(ju)此(ci)標(biao)準(zhun)曲線無法得(de)到的(de)結果(guo)。
綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA 性(xing)能(neng)
1. 靈(ling)敏度(du)：小(xiao)的檢(jian)測濃(nong)度(du)小(xiao)於(yu)1號(hao)標(biao)準(zhun)品。稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)線性。樣品(pin)線(xian)性(xing)回歸(gui)與預(yu)期濃度(du)相(xiang)關(guan)系數R值為(wei)0.990。
2. 特(te)異(yi)性：不(bu)與其(qi)它細胞(bao)因子(zi)反(fan)應。
3. 重(zhong)復性：板內、板(ban)間變(bian)異(yi)系數均小於(yu)10%。

綿(mian)羊α肌動(dong)蛋白(α Actin)ELISA  結果(guo)判(pan)斷與分(fen)析
1、儀(yi)器值：於(yu)波長(chang)450nm的(de)上(shang)讀(du)取(qu)各(ge)孔(kong)的(de)OD值
2、以吸光度(du)OD值為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)（Y），相(xiang)應的(de)待(dai)測物質(zhi)標(biao)準(zhun)品濃度(du)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)（X），做(zuo)得(de)相(xiang)應的(de)曲(qu)線(xian)，樣品(pin)的(de)待(dai)測物質(zhi)含(han)量可根(gen)據(ju)其(qi)OD值由標準(zhun)曲線換算出相(xiang)應的(de)濃(nong)度(du)。

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