猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白（AAA）ELISA

上(shang)海乾思生物(wu)科技中心(xin)，為(wei)您(nin)精(jing)心研(yan)發、細(xi)胞株產(chan)品(pin)。我們就是(shi)要做(zuo)壹(yi)件(jian)事，服(fu)務好廣大的科研大眾(zhong)。
產(chan)品(pin)名稱(cheng):猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA。

類別(bie) :ELISA
貨期 :7-10天
猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA。註(zhu)意(yi)事項：
收集標本(ben)前(qian)必須(xu)清(qing)楚要(yao)檢測的成份是否(fou)足(zu)夠穩(wen)定。對(dui)收集後(hou)當天進(jin)行檢測的標本(ben)，儲(chu)存在4℃備(bei)用，如有特殊原因需要(yao)周(zhou)期(qi)收(shou)集標本(ben)，將(jiang)標本(ben)及時分裝後(hou)放(fang)在-20℃或-70℃條件(jian)下保存。避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。標本(ben)2-8℃可(ke)保存48小時，-20℃可保存1個月(yue)。-70度(du)可保存6個月(yue)。部(bu)分標本(ben)需添(tian)加抑(yi)肽(tai)酶。
1.  試(shi)劑準(zhun)備(bei)：所有(you)試(shi)劑都(dou)必(bi)須(xu)在使用前(qian)達(da)到室溫(wen)，使用後(hou)請立即(ji)按照說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求保存試劑。  實(shi)驗操(cao)作中請使用壹(yi)次性(xing)的吸(xi)頭，避免(mian)交叉(cha)汙染。
2.   加樣(yang)：加樣(yang)或加試(shi)劑時，請註意(yi)在吸取(qu)標本(ben) / 標準(zhun)品(pin)，酶結(jie)合物(wu)或底(di)物(wu)時，前(qian)壹個孔與(yu)後(hou)壹(yi)個孔加樣(yang)之間的時間間隔(ge)如果太大，將會(hui)導致(zhi)不同(tong)的(de) “預(yu)孵(fu)育(yu)"時間，從(cong)而(er)明(ming)顯地影響到測量值(zhi)的準(zhun)確性(xing)及重復(fu)性(xing)。壹次加樣(yang)時間(包括標準(zhun)品(pin)及所有(you)樣(yang)品(pin))好控制(zhi)在(zai)10分鐘(zhong)內，如標本(ben)數(shu)量(liang)多，推(tui)薦使用多(duo)道(dao)移(yi)液(ye)器加樣(yang)。
3.   孵育(yu)：為(wei)防(fang)止(zhi)樣(yang)品(pin)蒸發(fa)，試驗時將反(fan)應(ying)板(ban)放(fang)於鋪有(you)濕(shi)布的密(mi)閉盒內，酶標板(ban)加上(shang)蓋或覆(fu)膜，以(yi)避(bi)免(mian)液(ye)體(ti)蒸(zheng)發(fa)；洗(xi)板(ban)後(hou)應(ying)盡(jin)快進(jin)行下(xia)步(bu)操(cao)作，任(ren)何時侯都(dou)應(ying)避(bi)免(mian)酶標板(ban)處(chu)於(yu)幹(gan)燥(zao)狀態(tai);同時應嚴格遵守(shou)給(gei)定的(de)孵育(yu)時間和溫度(du)。
4.   洗(xi)滌(di)：洗(xi)滌(di)過程中反(fan)應(ying)孔中殘(can)留的(de)洗(xi)滌(di)液(ye)應在濾紙上充分拍(pai)幹(gan)，勿(wu)將濾紙直接放(fang)入反(fan)應(ying)孔中吸(xi)水(shui)，同時要消(xiao)除(chu)板(ban)底(di)殘(can)留的(de)液(ye)體(ti)和(he)手(shou)指(zhi)印(yin)，避(bi)免(mian)影響後(hou)的(de)讀數(shu)。
5.  試(shi)劑配(pei)制(zhi)：Detection A及Detection B在使用前(qian)請手甩(shuai)幾(ji)下或少(shao)時離(li)心處(chu)理(li)，以(yi)使管壁(bi)或瓶(ping)蓋的液(ye)體(ti)沈積(ji)到(dao)管底。標準(zhun)品(pin)、檢測溶液(ye)A工作液(ye)、檢測溶液(ye)B工作液(ye)請依據所需的(de)量配(pei)置使用，並使用相(xiang)應的稀(xi)釋液(ye)配(pei)制(zhi)，不(bu)能(neng)混淆(xiao)。請確配(pei)置標準(zhun)品(pin)及工作液(ye)，盡(jin)量不(bu)要微(wei)量配(pei)置(如吸取(qu)檢測溶液(ye)A時，壹次不(bu)要(yao)小於10μl)，以(yi)避免(mian)由於不準(zhun)確稀釋而(er)造(zao)成的濃度(du)誤(wu)差(cha)；請勿(wu)重復(fu)使用已(yi)稀釋過的(de)標準(zhun)品(pin)、檢測溶液(ye)A工作液(ye)或檢測溶液(ye)B工作液(ye)。
6.  反(fan)應(ying)時間的控制(zhi)：加入(ru)底(di)物(wu)後(hou)請定時觀察反(fan)應(ying)孔的(de)顏(yan)色(se)變化(比(bi)如，每隔(ge)10分鐘(zhong))，如顏(yan)色(se)較(jiao)深，請提前(qian)加入(ru)終(zhong)止液(ye)終止反(fan)應(ying)，避(bi)免(mian)反(fan)應(ying)過(guo)強從(cong)而(er)影響光密(mi)度(du)讀數(shu)。
7.  底(di)物(wu)：底物(wu)請避光保存，在儲(chu)存和溫(wen)育(yu)時避免(mian)強光直(zhi)接照射(she)。
    建議檢測樣(yang)品(pin)時均(jun)設雙孔測定，以(yi)保證檢測結果(guo)的準(zhun)確性(xing)。
    如標本(ben)中待(dai)測物(wu)質(zhi)含量(liang)過(guo)高，請先(xian)稀釋後(hou)再(zai)測定，計算時請後(hou)乘以稀釋倍數(shu)。
洗(xi)板(ban)方(fang)法
1.  手工洗(xi)板(ban)方(fang)法：吸去(不可觸(chu)及板(ban)壁(bi))或甩(shuai)掉酶標板(ban)內(nei)的液(ye)體(ti)；在(zai)實(shi)驗臺(tai)上鋪墊幾(ji)層吸(xi)水(shui)紙，酶標板(ban)朝(chao)下用力拍(pai)幾(ji)次；將(jiang)推(tui)薦的洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液(ye)至(zhi)少(shao)0.3ml註(zhu)入孔內(nei)，浸(jin)泡(pao)1-2分鐘(zhong)，根據(ju)需要(yao)，重復(fu)此過程數(shu)次。
2.  自(zi)動(dong)洗(xi)板(ban)：如果有自(zi)動(dong)，應(ying)在熟練使用後(hou)再(zai)用到(dao)正式實(shi)驗過程中。
液(ye)體(ti)類標本(ben)：
標本(ben)必(bi)須為(wei)液(ye)體(ti)，不(bu)含沈澱。包括、、尿(niao)液(ye)、胸(xiong)腹水(shui)、腦(nao)脊液(ye)、細(xi)胞培養上(shang)清(qing)、組織勻(yun)漿等。1ml的全(quan)血(xue)可得到0.5ml的(de)或。每個標本(ben)量(liang)收集體(ti)積(ji)＝100ul×檢測種類。
◇      ：
室(shi)溫(wen)血(xue)液(ye)自然(ran)凝固(gu)10-20分鐘(zhong)後(hou)，離(li)心20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。收集上清(qing)。如有沈澱形成，應再次離(li)心。
◇      ：
應(ying)根(gen)據(ju)的要(yao)求(qiu)選擇EDTA、檸檬(meng)酸鈉或肝(gan)素(su)作為(wei)抗(kang)凝(ning)劑，加入(ru)10％(v/v)抗(kang)凝(ning)劑(0.1M檸檬(meng)酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混(hun)合10-20分鐘(zhong)後(hou)，離(li)心20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收集上清(qing)。如有沈澱形成，應再次離(li)心。
◇      尿(niao)液(ye)、胸(xiong)腹水(shui)、腦(nao)脊液(ye)：
用無(wu)菌管收集。離(li)心20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收集上清(qing)。如有沈澱形成，應再次離(li)心。
◇      細(xi)胞培養上(shang)清(qing)：
檢測分泌性(xing)的成份時，用無(wu)菌管收集。離(li)心20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收集上清(qing)。檢測細(xi)胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀(xi)釋細(xi)胞懸液(ye)，細(xi)胞濃度(du)達(da)到100萬/ml左(zuo)右。通過(guo)反(fan)復(fu)凍(dong)融，以使細(xi)胞破壞(huai)並放出細(xi)胞內成份。離(li)心20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收集上清(qing)。保存過程中如有沈澱形成，應再次離(li)心。
◇      組(zu)織標本(ben)：
切(qie)割標本(ben)後(hou)，稱(cheng)取(qu)重量(liang)。加入(ru)壹(yi)定量(liang)的PBS，緩(huan)沖液(ye)中可(ke)加入(ru)1μg/L蛋(dan)白酶抑(yi)制(zhi)劑或50U/ml的(de)Aprotinin(抑肽(tai)酶)。用手(shou)工或勻(yun)漿器將標本(ben)勻(yun)漿充分。離(li)心20分鐘(zhong)左右(2000-3000轉/分)。仔細(xi)收集上清(qing)置於(yu)-20度(du)或- 70度(du)保存，如有必要(yao)，可(ke)以將(jiang)樣(yang)品(pin)濃縮幹(gan)燥(zao)。分裝後(hou)壹(yi)份待檢測，其(qi)余(yu)冷凍備(bei)用。
寄標本(ben)時需註(zhu)明以下情(qing)況(kuang)：
1、標本(ben)編(bian)號；2、所測項目(mu)；3、是否(fou)做(zuo)復(fu)孔；4、實(shi)驗後(hou)標本(ben)是(shi)否(fou)寄回(hui)

猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA 安(an)全(quan)性(xing)
1）避免(mian)直接接觸(chu)終止(zhi)液(ye)和底物(wu)A、B。壹旦(dan)接觸(chu)到這(zhe)些液(ye)體(ti)，請盡(jin)快用水(shui)沖洗(xi)。
2）實(shi)驗中不(bu)要(yao)吃喝、抽(chou)煙(yan)或使用化(hua)妝品(pin)。
3）不要(yao)用嘴吸取(qu)裏(li)的任(ren)何成份。

猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA 操(cao)作註(zhu)意(yi)事項
1）試劑應(ying)按標簽(qian)說(shuo)明書(shu)儲(chu)存，使用前(qian)恢復(fu)到(dao)室(shi)溫。稀稀過後(hou)的(de)標準(zhun)品(pin)應丟(diu)棄(qi)，不可(ke)保存。
2）實驗中不(bu)用的(de)板(ban)條應(ying)立即(ji)放(fang)回(hui)包裝袋中，密(mi)封(feng)保存，以免(mian)變質(zhi)。
3）不(bu)用的(de)其(qi)它(ta)試劑應(ying)包裝好或蓋好。不同(tong)批號的(de)試(shi)劑不(bu)要(yao)混用。保質(zhi)前(qian)使用。
4）使用壹(yi)次性(xing)的吸(xi)頭以免(mian)交叉(cha)汙染，吸取(qu)終止(zhi)液(ye)和底物(wu)A、B液(ye)時，避免(mian)使用帶(dai)金(jin)屬(shu)部(bu)分的加樣(yang)器。
5）使用幹(gan)凈(jing)的塑料(liao)容(rong)器配(pei)置洗(xi)滌(di)液(ye)。使用前(qian)充分混勻裏(li)的各(ge)種成份及樣(yang)品(pin)。
6）洗(xi)滌(di)酶標板(ban)時應充分拍(pai)幹(gan)，不(bu)要將吸水(shui)紙直接放(fang)入酶標反(fan)應(ying)孔中吸(xi)水(shui)。
7）底物(wu)A應揮(hui)發，避(bi)免(mian)長(chang)時間打(da)開蓋子。底(di)物(wu)B對光敏(min)感(gan)，避(bi)免(mian)長(chang)時間暴露於光下(xia)。避免(mian)用手(shou)接觸(chu)，有毒。實驗完成後(hou)應(ying)立即讀取(qu)OD值。
8）加入(ru)試(shi)劑的(de)順(shun)序(xu)應(ying)壹(yi)致(zhi)，以保證所有(you)反(fan)應(ying)板(ban)孔溫(wen)育(yu)的(de)時間壹樣(yang)。
9）按照說(shuo)明(ming)書(shu)中標明(ming)的(de)時間、加液(ye)的量及順(shun)序(xu)進(jin)行溫(wen)育(yu)操(cao)作。

猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA 樣(yang)品(pin)收集、處(chu)理(li)及保存方法
1）-----操(cao)作過(guo)程中避(bi)免(mian)任何細(xi)胞刺激(ji)。使用不(bu)含熱(re)原和內(nei)的試(shi)管。收集血液(ye)後(hou)，1000×g離(li)心10分鐘(zhong)將和(he)紅(hong)細(xi)胞迅速小心地分離(li)。
2）-----EDTA、檸檬(meng)酸鹽、肝素(su)可用於(yu)檢測。1000×g離(li)心30分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)。
3）細(xi)胞上清(qing)液(ye)---1000×g離(li)心10分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚合(he)物(wu)。
4）組織勻(yun)漿-----將組織加入(ru)適(shi)量生理鹽水(shui)搗碎(sui)。1000×g離(li)心10分鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)液(ye)
5）保存------如果樣(yang)品(pin)不立(li)即使用，應(ying)將其(qi)分成小部(bu)分-70 ℃保存，避免(mian)反(fan)復(fu)冷凍。盡(jin)可能(neng)的不(bu)要使用溶(rong)血或高(gao)血脂血。如果中大量顆(ke)粒(li)，檢測前(qian)先(xian)離(li)心或過(guo)濾。不(bu)要(yao)在37℃或更(geng)高的溫(wen)度(du)加熱(re)解(jie)凍。應(ying)在室溫下解(jie)凍並確保樣(yang)品(pin)均(jun)勻地充(chong)分解凍。

猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA 試(shi)劑的(de)準(zhun)備(bei)
1）標準(zhun)品(pin)：標準(zhun)品(pin)的系列稀(xi)釋應在(zai)實(shi)驗時準(zhun)備(bei)，不能(neng)儲(chu)存。稀釋前(qian)將標準(zhun)品(pin)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)。
2）洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液(ye)（50×）的稀釋：蒸餾(liu)水(shui)50倍稀(xi)釋。

猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA 操(cao)作步(bu)驟
1）使用前(qian)，將所有(you)試(shi)劑充(chong)分混勻。不要(yao)使液(ye)體(ti)產(chan)生大量的(de)泡(pao)沫(mo)，以(yi)免(mian)加樣(yang)時加入(ru)大量的(de)氣(qi)泡(pao)，產(chan)生加樣(yang)上的(de)誤(wu)差(cha)。
2）根(gen)據(ju)待(dai)測樣(yang)品(pin)數(shu)量(liang)加上(shang)標準(zhun)品(pin)的數(shu)量(liang)決(jue)定所需的(de)板(ban)條數(shu)。每個標準(zhun)品(pin)和空(kong)白孔建議做(zuo)復(fu)孔。每個樣(yang)品(pin)根據(ju)自己的數(shu)量(liang)來(lai)定，能(neng)使用復(fu)孔的(de)盡(jin)量做(zuo)復(fu)孔。標本(ben)用標本(ben)稀(xi)釋液(ye)1：1稀釋後(hou)加入(ru)50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔內(nei)。
3）加入(ru)稀(xi)釋好後(hou)的(de)標準(zhun)品(pin)50ul於反(fan)應(ying)孔、加入(ru)待(dai)測樣(yang)品(pin)50ul於反(fan)應(ying)孔內(nei)。立即加入(ru)50ul的(de)生物(wu)素(su)標記(ji)的(de)。蓋上膜(mo)板(ban)，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)1小時。
4）甩去孔內(nei)液(ye)體(ti)，每孔加滿洗(xi)滌(di)液(ye)，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液(ye)，用吸(xi)水(shui)紙拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復(fu)此操(cao)作3次。如果用洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數(shu)增加壹(yi)次。
5）每孔加入(ru)80ul的(de)親和(he)鏈(lian)酶素(su)-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。
6）甩去(qu)孔內(nei)液(ye)體(ti)，每孔加滿洗(xi)滌(di)液(ye)，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液(ye)，用吸(xi)水(shui)紙拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復(fu)此操(cao)作3次。如果用洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數(shu)增加壹(yi)次。
7）每孔加入(ru)底(di)物(wu)A、B各50ul，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)10分鐘(zhong)。避免(mian)光照。
8）取(qu)出酶標板(ban)，迅(xun)速加入(ru)50ul終(zhong)止液(ye)，加入(ru)終(zhong)止液(ye)後(hou)應(ying)立即測定結(jie)果。
9）在(zai)450nm波長(chang)處(chu)測定各(ge)孔的(de)OD值。
壹些(xie)好評
辦(ban)事效率(lv)蠻高，幾(ji)天，就幫我搞(gao)定了這(zhe)個，謝(xie)謝(xie)！盒子蠻(man)不(bu)錯，包含所需試(shi)劑，並提供了中英文(wen)雙版(ban)說(shuo)明(ming)書(shu)及增值稅(shui)，很，銷售(shou)人(ren)員(yuan)的(de)態(tai)度(du)也謙(qian)和。靈(ling)敏(min)度(du)不錯，重(zhong)復(fu)性(xing)也行，在(zai)我做(zuo)的(de)這(zhe)些實驗中，與(yu)國(guo)內同(tong)行的(de)盒子相(xiang)比(bi)來(lai)說，性(xing)價比(bi)挺(ting)高的(de)，尤(you)其(qi)是(shi)價格(ge)占(zhan)有不(bu)錯的(de)優勢(shi)，贊(zan)壹(yi)個！操(cao)作挺(ting)方便的，也簡單(dan)，當然(ran)，這(zhe)也多虧了公(gong)司的(de)技術(shu)人(ren)員(yuan)詳細(xi)的實(shi)驗指導，很好，謝謝(xie)，實(shi)驗也相(xiang)當成功。實(shi)驗出來(lai)的標準(zhun)曲(qu)線很不錯（很優美(mei)），而(er)且(qie)價格(ge)相(xiang)對合理(li)，技術(shu)指導很到位(wei)......我購買了兩盒(he)，批次新(xin)，保質(zhi)期(qi)內(nei)，實(shi)驗結果做(zuo)出來(lai)了，貨到的(de)挺快(kuai)，那(na)麽遠，幾(ji)天就到(dao)了，加上(shang)我做(zuo)實(shi)驗，壹共五天就搞(gao)定了。經朋(peng)友(you)介(jie)紹，購(gou)買(mai)了此公司的(de)ELISA，用過(guo)，還不(bu)錯，實(shi)驗效果(guo)很好，基本(ben)達(da)到實驗參數(shu)要(yao)求，如果，下次還(hai)做(zuo)實(shi)驗的話，我還買這(zhe)家(jia)的，朋(peng)友(you)這(zhe)幾(ji)年都(dou)在(zai)用這(zhe)家(jia)的（長(chang)期訂(ding)貨）。
猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA 局(ju)限
6號標準(zhun)品(pin)以上(shang)的結果為非線性(xing)的，根(gen)據(ju)此標準(zhun)曲(qu)線無(wu)法得到的(de)結果(guo)。
猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA 性(xing)能(neng)
1. 靈敏(min)度(du)：小的檢測濃度(du)小於1號(hao)標準(zhun)品(pin)。稀釋度(du)的線性(xing)。樣(yang)品(pin)線性(xing)回(hui)歸(gui)與(yu)預(yu)期(qi)濃度(du)相(xiang)關系數(shu)R值(zhi)為0.990。
2. 特(te)異性(xing)：不與(yu)其(qi)它(ta)細(xi)胞因子反(fan)應(ying)。
3. 重(zhong)復(fu)性(xing)：板(ban)內(nei)、板(ban)間變異系數(shu)均(jun)小於10%。

猴(hou)抗(kang)白(bai)蛋(dan)白(AAA)ELISA  結(jie)果判(pan)斷(duan)與(yu)分析
1、儀器(qi)值(zhi)：於(yu)波(bo)長(chang)450nm的上(shang)讀取(qu)各孔的(de)OD值
2、以吸(xi)光度(du)OD值為(wei)縱坐(zuo)標（Y），相(xiang)應的待(dai)測物(wu)質(zhi)標準(zhun)品(pin)濃度(du)為橫坐(zuo)標（X），做(zuo)得相(xiang)應的曲(qu)線，樣(yang)品(pin)的待(dai)測物(wu)質(zhi)含量(liang)可(ke)根據(ju)其(qi)OD值(zhi)由標準(zhun)曲(qu)線換(huan)算出相(xiang)應的濃度(du)。

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