HBxAg ELISA

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產(chan)品名(ming)稱(cheng):HBxAg ELISA。

類(lei)別(bie) :ELISA
貨(huo)期(qi) :7-10天(tian)
HBxAg ELISA。註(zhu)意事項(xiang)：
收集(ji)標本(ben)前(qian)必須(xu)清(qing)楚要檢測(ce)的(de)成份(fen)是(shi)否(fou)足夠(gou)穩定。對(dui)收集(ji)後(hou)當(dang)天(tian)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)的(de)標本(ben)，儲(chu)存在(zai)4℃備(bei)用(yong)，如(ru)有特殊(shu)原(yuan)因(yin)需(xu)要周期(qi)收(shou)集標本(ben)，將標本(ben)及(ji)時(shi)分(fen)裝(zhuang)後(hou)放(fang)在(zai)-20℃或(huo)-70℃條件下(xia)保(bao)存(cun)。避免(mian)反(fan)復凍融(rong)。標本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存(cun)48小(xiao)時(shi)，-20℃可保(bao)存(cun)1個月。-70度(du)可(ke)保(bao)存(cun)6個月。部分(fen)標本(ben)需(xu)添(tian)加抑肽酶。
1.  試(shi)劑準(zhun)備(bei)：所有試劑都(dou)必須(xu)在(zai)使用(yong)前(qian)達到(dao)室(shi)溫(wen)，使用(yong)後(hou)請立(li)即按照說明(ming)書要(yao)求(qiu)保(bao)存(cun)試劑(ji)。  實(shi)驗(yan)操作(zuo)中(zhong)請使用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)的(de)吸頭(tou)，避免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。
2.   加樣(yang)：加樣(yang)或加試(shi)劑時(shi)，請註(zhu)意在(zai)吸取標本(ben) / 標準(zhun)品，酶(mei)結合(he)物或底物時(shi)，前壹(yi)個(ge)孔(kong)與後(hou)壹(yi)個(ge)孔(kong)加樣(yang)之間(jian)的(de)時(shi)間(jian)間(jian)隔如(ru)果(guo)太(tai)大，將會(hui)導(dao)致(zhi)不同的(de) “預(yu)孵(fu)育"時(shi)間(jian)，從而明顯地(di)影(ying)響(xiang)到(dao)測(ce)量(liang)值的(de)準(zhun)確(que)性(xing)及(ji)重復(fu)性(xing)。壹(yi)次(ci)加樣(yang)時(shi)間(jian)(包(bao)括標準(zhun)品及(ji)所有樣品)好(hao)控(kong)制(zhi)在(zai)10分(fen)鐘內，如(ru)標本(ben)數量(liang)多，推薦使用(yong)多道移液器加樣(yang)。
3.   孵(fu)育：為防止(zhi)樣品蒸(zheng)發，試驗(yan)時(shi)將反(fan)應(ying)板(ban)放(fang)於(yu)鋪(pu)有濕布(bu)的(de)密閉盒內，酶(mei)標板加上(shang)蓋或覆膜，以避免(mian)液體蒸(zheng)發；洗板後(hou)應(ying)盡(jin)快進行(xing)下(xia)步(bu)操作(zuo)，任(ren)何時(shi)侯都(dou)應(ying)避(bi)免(mian)酶(mei)標板處於(yu)幹燥狀態;同時(shi)應(ying)嚴(yan)格(ge)遵守(shou)給(gei)定的(de)孵(fu)育時(shi)間(jian)和溫(wen)度(du)。
4.   洗滌：洗滌過(guo)程(cheng)中(zhong)反(fan)應(ying)孔(kong)中(zhong)殘留(liu)的(de)洗滌液應(ying)在(zai)濾紙(zhi)上充分(fen)拍(pai)幹(gan)，勿將濾紙(zhi)直接(jie)放(fang)入(ru)反(fan)應(ying)孔(kong)中(zhong)吸水(shui)，同時(shi)要消(xiao)除(chu)板(ban)底殘留(liu)的(de)液體和(he)手(shou)指(zhi)印，避(bi)免(mian)影響(xiang)後(hou)的(de)讀(du)數。
5.  試劑(ji)配制(zhi)：Detection A及Detection B在(zai)使用(yong)前(qian)請手(shou)甩幾(ji)下(xia)或少時(shi)離心處理(li)，以使管壁或瓶(ping)蓋的(de)液體沈積(ji)到(dao)管(guan)底。標準(zhun)品、檢(jian)測(ce)溶液A工作(zuo)液、檢測(ce)溶液B工作(zuo)液請依(yi)據(ju)所需(xu)的(de)量(liang)配置使用(yong)，並(bing)使用(yong)相(xiang)應(ying)的(de)稀釋(shi)液配制(zhi)，不能(neng)混淆(xiao)。請確(que)配(pei)置標準(zhun)品及(ji)工作(zuo)液，盡量(liang)不要(yao)微量(liang)配置(如(ru)吸取檢(jian)測(ce)溶液A時(shi)，壹(yi)次(ci)不要(yao)小(xiao)於10μl)，以避(bi)免(mian)由於不準(zhun)確(que)稀釋(shi)而造成的(de)濃度誤差(cha)；請勿重復(fu)使用(yong)已(yi)稀釋(shi)過(guo)的(de)標準(zhun)品、檢(jian)測(ce)溶液A工作(zuo)液或檢(jian)測(ce)溶液B工作(zuo)液。
6.  反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)的(de)控制(zhi)：加入(ru)底物後(hou)請定時(shi)觀察(cha)反(fan)應(ying)孔(kong)的(de)顏色(se)變化(比如，每(mei)隔(ge)10分(fen)鐘)，如顏色(se)較深，請提前加入(ru)終止(zhi)液終止(zhi)反(fan)應(ying)，避(bi)免(mian)反(fan)應(ying)過(guo)強(qiang)從(cong)而影響(xiang)光密(mi)度(du)讀(du)數。
7.  底物：底物請避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)，在(zai)儲(chu)存和溫育時(shi)避免(mian)強光直接(jie)照射。
    建議檢(jian)測(ce)樣品時(shi)均(jun)設雙孔測(ce)定，以(yi)保(bao)證檢測(ce)結果的(de)準(zhun)確(que)性(xing)。
    如(ru)標本(ben)中(zhong)待測(ce)物質(zhi)含(han)量(liang)過(guo)高(gao)，請先(xian)稀釋(shi)後(hou)再(zai)測(ce)定，計(ji)算時(shi)請後(hou)乘以稀釋(shi)倍(bei)數。
洗板方(fang)法(fa)
1.  手工洗板方(fang)法(fa)：吸去(qu)(不可(ke)觸(chu)及(ji)板壁)或甩掉酶標板內的(de)液體；在(zai)實(shi)驗(yan)臺上鋪(pu)墊(dian)幾(ji)層吸水(shui)紙(zhi)，酶標板朝下(xia)用(yong)力(li)拍(pai)幾(ji)次；將推薦的(de)洗滌緩沖液至少0.3ml註(zhu)入(ru)孔內，浸泡1-2分(fen)鐘，根據(ju)需(xu)要，重復(fu)此(ci)過(guo)程(cheng)數次。
2.  自動(dong)洗板：如(ru)果有自動(dong)，應(ying)在(zai)熟練使用(yong)後(hou)再(zai)用(yong)到(dao)正式實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)。
液體類(lei)標本(ben)：
標本(ben)必須(xu)為液體，不含(han)沈澱(dian)。包(bao)括、、尿液、胸腹(fu)水(shui)、腦(nao)脊液、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)、組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)等(deng)。1ml的(de)全血可得(de)到(dao)0.5ml的(de)或。每(mei)個(ge)標本(ben)量(liang)收集(ji)體積(ji)＝100ul×檢測(ce)種類(lei)。
◇      ：
室(shi)溫(wen)血液自然(ran)凝(ning)固10-20分(fen)鐘後(hou)，離(li)心20分(fen)鐘左右(you)(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。收集(ji)上(shang)清(qing)。如有沈澱(dian)形(xing)成，應(ying)再(zai)次離(li)心。
◇      ：
應(ying)根(gen)據(ju)的(de)要求(qiu)選(xuan)擇(ze)EDTA、檸(ning)檬酸鈉或肝(gan)素(su)作(zuo)為抗(kang)凝(ning)劑(ji)，加入(ru)10％(v/v)抗(kang)凝(ning)劑(ji)(0.1M檸(ning)檬酸鈉或1% heparin 或(huo)2.0%EDTA.Na2)混(hun)合(he)10-20分(fen)鐘後(hou)，離(li)心20分(fen)鐘左右(you)(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細(xi)收集(ji)上(shang)清(qing)。如有沈澱(dian)形(xing)成，應(ying)再(zai)次離(li)心。
◇      尿液、胸腹(fu)水(shui)、腦(nao)脊液：
用(yong)無菌(jun)管收集。離心20分(fen)鐘左右(you)(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細(xi)收集(ji)上(shang)清(qing)。如有沈澱(dian)形(xing)成，應(ying)再(zai)次離(li)心。
◇      細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)：
檢測(ce)分(fen)泌性的(de)成份(fen)時(shi)，用(yong)無菌(jun)管收集。離心20分(fen)鐘左右(you)(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細(xi)收集(ji)上(shang)清(qing)。檢測(ce)細(xi)胞(bao)內的(de)成份(fen)時(shi)，用(yong)PBS(PH7.2-7.4)稀釋(shi)細(xi)胞(bao)懸液，細(xi)胞(bao)濃度達到(dao)100萬(wan)/ml左右(you)。通(tong)過(guo)反(fan)復凍融(rong)，以使細(xi)胞(bao)破(po)壞(huai)並放出細(xi)胞(bao)內成份(fen)。離心20分(fen)鐘左右(you)(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細(xi)收集(ji)上(shang)清(qing)。保(bao)存(cun)過(guo)程(cheng)中(zhong)如有沈澱(dian)形(xing)成，應(ying)再(zai)次離(li)心。
◇      組織(zhi)標本(ben)：
切(qie)割標本(ben)後(hou)，稱(cheng)取(qu)重量(liang)。加入(ru)壹(yi)定量(liang)的(de)PBS，緩沖液中可(ke)加入(ru)1μg/L蛋(dan)白酶(mei)抑制(zhi)劑或50U/ml的(de)Aprotinin(抑肽酶)。用(yong)手(shou)工或勻(yun)漿(jiang)器(qi)將標本(ben)勻(yun)漿(jiang)充分(fen)。離心20分(fen)鐘左右(you)(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細(xi)收集(ji)上(shang)清(qing)置於(yu)-20度(du)或(huo)- 70度保(bao)存(cun)，如有必要，可以將樣(yang)品濃縮幹燥。分(fen)裝(zhuang)後(hou)壹(yi)份(fen)待檢(jian)測(ce)，其余冷凍備(bei)用(yong)。
寄(ji)標本(ben)時(shi)需(xu)註(zhu)明以下(xia)情(qing)況(kuang)：
1、標本(ben)編號(hao)；2、所測(ce)項目；3、是(shi)否(fou)做(zuo)復(fu)孔(kong)；4、實(shi)驗(yan)後(hou)標本(ben)是(shi)否(fou)寄回(hui)

HBxAg ELISA 安(an)全性
1）避免直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)終止(zhi)液和底物A、B。壹(yi)旦(dan)接(jie)觸(chu)到(dao)這些液體，請盡(jin)快用(yong)水(shui)沖洗。
2）實(shi)驗(yan)中不要(yao)吃(chi)喝、抽煙(yan)或使用(yong)化(hua)妝(zhuang)品。
3）不要(yao)用(yong)嘴(zui)吸取裏的(de)任何成份(fen)。

HBxAg ELISA 操作(zuo)註(zhu)意事項(xiang)
1）試劑(ji)應(ying)按標簽說明書儲(chu)存(cun)，使用(yong)前(qian)恢復到(dao)室(shi)溫(wen)。稀稀過(guo)後(hou)的(de)標準(zhun)品應(ying)丟棄(qi)，不可(ke)保(bao)存(cun)。
2）實(shi)驗(yan)中不用(yong)的(de)板條應(ying)立(li)即放(fang)回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中(zhong)，密(mi)封保(bao)存(cun)，以免(mian)變質(zhi)。
3）不用(yong)的(de)其它試劑(ji)應(ying)包(bao)裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋好。不同批號(hao)的(de)試劑不要(yao)混用(yong)。保(bao)質(zhi)前使用(yong)。
4）使用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)的(de)吸頭(tou)以免(mian)交叉汙(wu)染(ran)，吸取終止(zhi)液和底物A、B液時(shi)，避免(mian)使用(yong)帶金屬(shu)部分(fen)的(de)加樣(yang)器。
5）使用(yong)幹(gan)凈的(de)塑料容器(qi)配置洗滌液。使用(yong)前(qian)充分(fen)混勻(yun)裏的(de)各種成份(fen)及樣(yang)品。
6）洗滌酶標板時(shi)應(ying)充分(fen)拍(pai)幹(gan)，不要(yao)將吸水(shui)紙(zhi)直接(jie)放(fang)入(ru)酶標反(fan)應(ying)孔(kong)中(zhong)吸水(shui)。
7）底物A應(ying)揮(hui)發，避免(mian)長時(shi)間(jian)打開(kai)蓋子。底物B對(dui)光(guang)敏感，避(bi)免長時(shi)間(jian)暴露(lu)於(yu)光(guang)下(xia)。避免(mian)用(yong)手(shou)接(jie)觸(chu)，有毒。實(shi)驗(yan)完成後(hou)應(ying)立(li)即讀(du)取OD值(zhi)。
8）加入(ru)試劑(ji)的(de)順序應(ying)壹(yi)致(zhi)，以(yi)保(bao)證所有反(fan)應(ying)板(ban)孔(kong)溫(wen)育的(de)時(shi)間(jian)壹(yi)樣(yang)。
9）按照說明(ming)書中(zhong)標明的(de)時(shi)間(jian)、加液的(de)量(liang)及順(shun)序進(jin)行(xing)溫(wen)育操(cao)作(zuo)。

HBxAg ELISA 樣(yang)品收(shou)集(ji)、處理(li)及保(bao)存(cun)方法(fa)
1）-----操作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免任何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激。使用(yong)不含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內的(de)試管。收(shou)集(ji)血液後(hou)，1000×g離(li)心10分(fen)鐘將和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心地(di)分(fen)離。
2）-----EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)、肝(gan)素(su)可(ke)用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)。1000×g離心30分(fen)鐘去(qu)除(chu)顆(ke)粒。
3）細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液---1000×g離心10分(fen)鐘去(qu)除(chu)顆(ke)粒和(he)聚合(he)物。
4）組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)-----將組(zu)織(zhi)加入(ru)適(shi)量(liang)生理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。1000×g離心10分(fen)鐘，取上清(qing)液
5）保(bao)存(cun)------如果(guo)樣(yang)品不立(li)即使用(yong)，應(ying)將其(qi)分(fen)成小(xiao)部分(fen)-70 ℃保(bao)存(cun)，避免(mian)反(fan)復冷(leng)凍。盡可能的(de)不要(yao)使用(yong)溶血或高(gao)血脂(zhi)血。如果(guo)中(zhong)大量(liang)顆(ke)粒，檢(jian)測(ce)前先(xian)離(li)心或過(guo)濾。不要(yao)在(zai)37℃或(huo)更高(gao)的(de)溫度加熱(re)解(jie)凍。應(ying)在(zai)室(shi)溫下(xia)解凍並確(que)保(bao)樣(yang)品均(jun)勻(yun)地(di)充分(fen)解凍。

HBxAg ELISA 試劑的(de)準(zhun)備(bei)
1）標準(zhun)品：標準(zhun)品的(de)系列稀釋(shi)應(ying)在(zai)實(shi)驗(yan)時(shi)準(zhun)備(bei)，不能(neng)儲存(cun)。稀釋(shi)前(qian)將標準(zhun)品振蕩(dang)混(hun)勻(yun)。
2）洗滌緩沖液（50×）的(de)稀釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水(shui)50倍(bei)稀釋(shi)。

HBxAg ELISA 操(cao)作(zuo)步(bu)驟
1）使用(yong)前(qian)，將所有試劑充分(fen)混勻(yun)。不要(yao)使液體產(chan)生大量(liang)的(de)泡沫(mo)，以(yi)免(mian)加樣(yang)時(shi)加入(ru)大量(liang)的(de)氣泡，產(chan)生加樣(yang)上的(de)誤差(cha)。
2）根據(ju)待測(ce)樣品數量(liang)加上(shang)標準(zhun)品的(de)數量(liang)決定所需(xu)的(de)板條數。每(mei)個(ge)標準(zhun)品和(he)空(kong)白孔(kong)建議做(zuo)復(fu)孔(kong)。每(mei)個(ge)樣品根(gen)據(ju)自己(ji)的(de)數量(liang)來定，能(neng)使用(yong)復(fu)孔(kong)的(de)盡量(liang)做(zuo)復(fu)孔(kong)。標本(ben)用(yong)標本(ben)稀釋(shi)液1：1稀釋(shi)後(hou)加入(ru)50ul於反(fan)應(ying)孔(kong)內。
3）加入(ru)稀釋(shi)好(hao)後(hou)的(de)標準(zhun)品50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)、加入(ru)待測(ce)樣品50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)內。立(li)即加入(ru)50ul的(de)生物(wu)素(su)標記的(de)。蓋上膜板，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育1小(xiao)時(shi)。
4）甩去(qu)孔內液體，每(mei)孔(kong)加滿洗滌液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩去(qu)洗滌液，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此(ci)操(cao)作(zuo)3次(ci)。如果用(yong)洗滌，洗滌次數增(zeng)加壹(yi)次(ci)。
5）每(mei)孔(kong)加入(ru)80ul的(de)親(qin)和鏈(lian)酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育30分(fen)鐘。
6）甩去(qu)孔內液體，每(mei)孔(kong)加滿洗滌液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩去(qu)洗滌液，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此(ci)操(cao)作(zuo)3次(ci)。如果用(yong)洗滌，洗滌次數增(zeng)加壹(yi)次(ci)。
7）每(mei)孔(kong)加入(ru)底物A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育10分(fen)鐘。避免光照。
8）取出(chu)酶(mei)標板，迅速(su)加入(ru)50ul終止(zhi)液，加入(ru)終止(zhi)液後(hou)應(ying)立(li)即測(ce)定結果。
9）在(zai)450nm波(bo)長處測(ce)定各(ge)孔的(de)OD值。
壹(yi)些(xie)好(hao)評(ping)
辦事效(xiao)率(lv)蠻高(gao)，幾(ji)天(tian)，就幫我搞(gao)定了(le)這個，謝(xie)謝(xie)！盒子蠻不錯(cuo)，包(bao)含(han)所需(xu)試劑(ji)，並(bing)提供(gong)了中(zhong)英文雙版說(shuo)明(ming)書及(ji)增(zeng)值(zhi)稅(shui)，很(hen)，銷售人(ren)員的(de)態度也(ye)謙和(he)。靈敏度(du)不錯(cuo)，重復(fu)性(xing)也(ye)行，在(zai)我(wo)做(zuo)的(de)這些實(shi)驗(yan)中，與國內同行的(de)盒子相(xiang)比來(lai)說，性價比挺高(gao)的(de)，尤(you)其是(shi)價格占有不錯(cuo)的(de)優勢，贊(zan)壹(yi)個(ge)！操(cao)作(zuo)挺(ting)方便的(de)，也(ye)簡單，當(dang)然(ran)，這也(ye)多虧了(le)公(gong)司的(de)技術人(ren)員詳(xiang)細(xi)的(de)實(shi)驗(yan)指(zhi)導(dao)，很(hen)好(hao)，謝(xie)謝，實(shi)驗(yan)也(ye)相(xiang)當(dang)成功(gong)。實(shi)驗(yan)出來的(de)標準(zhun)曲線(xian)很不錯(cuo)（很優美(mei)），而且(qie)價格相(xiang)對合(he)理(li)，技術指(zhi)導(dao)很(hen)到(dao)位(wei)......我購(gou)買了兩(liang)盒，批次(ci)新(xin)，保(bao)質(zhi)期內，實(shi)驗(yan)結果做(zuo)出(chu)來(lai)了，貨(huo)到(dao)的(de)挺快，那麽遠(yuan)，幾(ji)天(tian)就到(dao)了(le)，加上(shang)我做(zuo)實(shi)驗(yan)，壹(yi)共(gong)五(wu)天(tian)就搞(gao)定了(le)。經(jing)朋(peng)友介紹，購(gou)買了此公(gong)司的(de)ELISA，用(yong)過(guo)，還不錯(cuo)，實(shi)驗(yan)效(xiao)果(guo)很(hen)好(hao)，基本(ben)達到(dao)實(shi)驗(yan)參數要求(qiu)，如(ru)果(guo)，下(xia)次還做(zuo)實(shi)驗(yan)的(de)話，我還買這家的(de)，朋友這幾(ji)年(nian)都(dou)在(zai)用(yong)這家的(de)（長期訂(ding)貨(huo)）。
HBxAg ELISA 局限(xian)
6號(hao)標準(zhun)品以(yi)上(shang)的(de)結果為非線(xian)性(xing)的(de)，根據(ju)此標準(zhun)曲線(xian)無法(fa)得到(dao)的(de)結果。
HBxAg ELISA 性(xing)能(neng)
1. 靈敏度(du)：小(xiao)的(de)檢測(ce)濃度小(xiao)於1號(hao)標準(zhun)品。稀釋(shi)度(du)的(de)線性。樣(yang)品線(xian)性(xing)回(hui)歸(gui)與預(yu)期(qi)濃度相(xiang)關系(xi)數R值為0.990。
2. 特異(yi)性(xing)：不與其它細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)反(fan)應(ying)。
3. 重復(fu)性(xing)：板(ban)內、板(ban)間(jian)變異系數均(jun)小(xiao)於10%。

HBxAg ELISA  結果判斷與分(fen)析(xi)
1、儀器(qi)值(zhi)：於波長450nm的(de)上讀(du)取各(ge)孔的(de)OD值
2、以吸光度(du)OD值為縱(zong)坐標（Y），相(xiang)應(ying)的(de)待測(ce)物質(zhi)標準(zhun)品濃度為橫坐(zuo)標（X），做(zuo)得(de)相(xiang)應(ying)的(de)曲線，樣(yang)品的(de)待測(ce)物質(zhi)含(han)量(liang)可根(gen)據(ju)其OD值由標準(zhun)曲線(xian)換(huan)算出(chu)相(xiang)應(ying)的(de)濃度。

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