CsA ELISA

上(shang)海(hai)乾(qian)思(si)生物科(ke)技(ji)中(zhong)心，為(wei)您精(jing)心研(yan)發(fa)、細(xi)胞(bao)株(zhu)產(chan)品。我們(men)就是要做(zuo)壹(yi)件(jian)事(shi)，服(fu)務(wu)好(hao)廣大(da)的科(ke)研(yan)大(da)眾(zhong)。
產(chan)品名(ming)稱(cheng):CsA ELISA。

類別 :ELISA
貨期 :7-10天(tian)
CsA ELISA。註意(yi)事(shi)項(xiang)：
收(shou)集標(biao)本(ben)前必(bi)須清(qing)楚要(yao)檢測的成(cheng)份是否(fou)足夠(gou)穩(wen)定(ding)。對(dui)收(shou)集後當(dang)天(tian)進行檢(jian)測的標(biao)本(ben)，儲存(cun)在(zai)4℃備(bei)用，如有特(te)殊(shu)原因需要周(zhou)期收(shou)集標(biao)本(ben)，將標(biao)本及(ji)時(shi)分裝後放在(zai)-20℃或(huo)-70℃條(tiao)件下(xia)保(bao)存(cun)。避免(mian)反復凍融(rong)。標本(ben)2-8℃可保存(cun)48小(xiao)時(shi)，-20℃可保存(cun)1個月。-70度(du)可保存(cun)6個月。部分標(biao)本(ben)需添加(jia)抑肽酶(mei)。
1.  試劑準(zhun)備(bei)：所(suo)有(you)試劑都(dou)必(bi)須在(zai)使(shi)用前達到室(shi)溫，使(shi)用後請立即按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)保(bao)存(cun)試劑。  實(shi)驗(yan)操(cao)作中(zhong)請使(shi)用壹(yi)次(ci)性的吸(xi)頭(tou)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染(ran)。
2.   加(jia)樣(yang)：加(jia)樣(yang)或(huo)加(jia)試劑時(shi)，請(qing)註意(yi)在(zai)吸(xi)取(qu)標本(ben) / 標準品，酶(mei)結(jie)合(he)物或(huo)底(di)物(wu)時(shi)，前壹(yi)個孔(kong)與後壹(yi)個孔(kong)加(jia)樣(yang)之間(jian)的時(shi)間(jian)間(jian)隔如(ru)果(guo)太大(da)，將會(hui)導(dao)致不同(tong)的 “預(yu)孵(fu)育(yu)"時間(jian)，從(cong)而(er)明顯地影響到測量(liang)值的準(zhun)確(que)性及(ji)重(zhong)復性。壹(yi)次(ci)加(jia)樣(yang)時(shi)間(jian)(包括標(biao)準品(pin)及(ji)所(suo)有(you)樣(yang)品(pin))好(hao)控制在(zai)10分鐘(zhong)內，如標(biao)本(ben)數(shu)量(liang)多(duo)，推(tui)薦使(shi)用多(duo)道(dao)移液(ye)器(qi)加(jia)樣(yang)。
3.   孵(fu)育(yu)：為(wei)防止樣(yang)品(pin)蒸(zheng)發(fa)，試驗(yan)時(shi)將反應板(ban)放於(yu)鋪(pu)有濕布(bu)的密閉盒(he)內，酶(mei)標(biao)板(ban)加(jia)上蓋或(huo)覆膜(mo)，以避(bi)免(mian)液(ye)體(ti)蒸(zheng)發(fa)；洗板(ban)後應盡快進(jin)行下(xia)步操(cao)作，任何時侯都(dou)應避免(mian)酶(mei)標(biao)板(ban)處於(yu)幹(gan)燥狀(zhuang)態(tai);同(tong)時應嚴格(ge)遵守(shou)給定(ding)的孵(fu)育(yu)時間(jian)和溫度(du)。
4.   洗滌：洗滌過程中(zhong)反應孔(kong)中(zhong)殘留的洗滌液(ye)應在(zai)濾(lv)紙(zhi)上充分拍(pai)幹(gan)，勿將濾(lv)紙(zhi)直接(jie)放入(ru)反應孔(kong)中(zhong)吸水(shui)，同(tong)時(shi)要消(xiao)除板(ban)底(di)殘(can)留的液(ye)體(ti)和手(shou)指印，避(bi)免(mian)影響後的讀(du)數。
5.  試劑配(pei)制：Detection A及(ji)Detection B在(zai)使(shi)用前請手甩(shuai)幾(ji)下(xia)或(huo)少時離(li)心處理(li)，以使(shi)管(guan)壁(bi)或(huo)瓶蓋的液(ye)體(ti)沈積(ji)到管(guan)底(di)。標(biao)準(zhun)品、檢(jian)測溶(rong)液(ye)A工(gong)作(zuo)液(ye)、檢(jian)測溶(rong)液(ye)B工(gong)作(zuo)液(ye)請(qing)依(yi)據所(suo)需的量(liang)配(pei)置(zhi)使(shi)用，並使(shi)用相應的稀(xi)釋(shi)液(ye)配(pei)制，不(bu)能混(hun)淆(xiao)。請確(que)配(pei)置(zhi)標(biao)準(zhun)品(pin)及(ji)工(gong)作液(ye)，盡量(liang)不(bu)要(yao)微(wei)量(liang)配(pei)置(zhi)(如(ru)吸(xi)取(qu)檢測溶(rong)液(ye)A時(shi)，壹(yi)次(ci)不(bu)要小(xiao)於(yu)10μl)，以(yi)避免(mian)由於(yu)不(bu)準確(que)稀(xi)釋(shi)而(er)造成的濃度(du)誤差；請勿重(zhong)復使(shi)用已稀(xi)釋(shi)過的標(biao)準(zhun)品(pin)、檢測溶(rong)液(ye)A工(gong)作(zuo)液(ye)或(huo)檢測溶(rong)液(ye)B工(gong)作(zuo)液(ye)。
6.  反應時間(jian)的控(kong)制：加(jia)入(ru)底(di)物(wu)後請定時觀察(cha)反應孔(kong)的顏(yan)色(se)變(bian)化(hua)(比(bi)如(ru)，每(mei)隔10分鐘(zhong))，如(ru)顏色(se)較深(shen)，請提(ti)前(qian)加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)終(zhong)止(zhi)反應，避免(mian)反應過強從(cong)而(er)影響光密度(du)讀(du)數。
7.  底(di)物(wu)：底(di)物(wu)請(qing)避光保存(cun)，在(zai)儲存(cun)和溫育(yu)時避(bi)免(mian)強光直接(jie)照(zhao)射。
    建(jian)議檢測樣(yang)品(pin)時(shi)均(jun)設(she)雙孔(kong)測定，以(yi)保證(zheng)檢測結果(guo)的準(zhun)確(que)性。
    如標本中(zhong)待測物質(zhi)含(han)量(liang)過(guo)高(gao)，請先(xian)稀(xi)釋(shi)後再測定，計(ji)算時(shi)請後乘以稀(xi)釋(shi)倍數。
洗板(ban)方法(fa)
1.  手(shou)工(gong)洗板(ban)方法(fa)：吸(xi)去(不可觸及(ji)板(ban)壁(bi))或(huo)甩(shuai)掉(diao)酶(mei)標(biao)板(ban)內的液(ye)體(ti)；在(zai)實(shi)驗(yan)臺上(shang)鋪(pu)墊幾(ji)層(ceng)吸水(shui)紙(zhi)，酶(mei)標(biao)板(ban)朝(chao)下(xia)用力(li)拍(pai)幾(ji)次(ci)；將推(tui)薦的洗滌緩沖液(ye)至(zhi)少0.3ml註入(ru)孔(kong)內，浸(jin)泡1-2分鐘(zhong)，根據(ju)需要，重(zhong)復此(ci)過(guo)程數次。
2.  自(zi)動(dong)洗板(ban)：如果(guo)有自(zi)動(dong)，應在(zai)熟(shu)練使(shi)用後再用到正式(shi)實(shi)驗(yan)過(guo)程中(zhong)。
液(ye)體(ti)類標本(ben)：
標(biao)本(ben)必(bi)須為(wei)液(ye)體(ti)，不含(han)沈(chen)澱。包括、、尿液(ye)、胸(xiong)腹(fu)水(shui)、腦(nao)脊(ji)液(ye)、細(xi)胞(bao)培(pei)養上清(qing)、組(zu)織勻漿等(deng)。1ml的全(quan)血(xue)可得(de)到(dao)0.5ml的或(huo)。每(mei)個標(biao)本量(liang)收(shou)集體(ti)積(ji)＝100ul×檢測種類。
◇      ：
室(shi)溫血(xue)液(ye)自(zi)然(ran)凝(ning)固10-20分鐘(zhong)後，離心20分鐘(zhong)左(zuo)右(2000-3000轉/分)。收(shou)集上(shang)清(qing)。如有(you)沈澱(dian)形成，應再次(ci)離(li)心。
◇      ：
應根據(ju)的要(yao)求(qiu)選(xuan)擇(ze)EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鈉(na)或(huo)肝(gan)素(su)作為(wei)抗凝(ning)劑，加(jia)入(ru)10％(v/v)抗凝(ning)劑(0.1M檸(ning)檬(meng)酸鈉或(huo)1% heparin 或(huo)2.0%EDTA.Na2)混(hun)合(he)10-20分鐘(zhong)後，離心20分鐘(zhong)左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔(zai)細(xi)收(shou)集上(shang)清(qing)。如有(you)沈澱(dian)形成，應再次(ci)離(li)心。
◇      尿液(ye)、胸(xiong)腹(fu)水(shui)、腦(nao)脊(ji)液(ye)：
用無菌管收(shou)集。離(li)心20分鐘(zhong)左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔(zai)細(xi)收(shou)集上(shang)清(qing)。如有(you)沈澱(dian)形成，應再次(ci)離(li)心。
◇      細胞(bao)培(pei)養上清(qing)：
檢測分泌(mi)性的成(cheng)份時，用無菌管收(shou)集。離(li)心20分鐘(zhong)左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔(zai)細(xi)收(shou)集上(shang)清(qing)。檢測細胞(bao)內的成(cheng)份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀(xi)釋(shi)細胞(bao)懸液(ye)，細(xi)胞(bao)濃度(du)達(da)到100萬/ml左右。通過(guo)反復凍融(rong)，以使(shi)細(xi)胞(bao)破(po)壞(huai)並放出細(xi)胞(bao)內成份。離心20分鐘(zhong)左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔(zai)細(xi)收(shou)集上(shang)清(qing)。保存(cun)過程中(zhong)如有(you)沈(chen)澱(dian)形成，應再次(ci)離(li)心。
◇      組(zu)織標(biao)本(ben)：
切割標(biao)本後，稱(cheng)取(qu)重(zhong)量(liang)。加(jia)入(ru)壹(yi)定(ding)量(liang)的PBS，緩(huan)沖液(ye)中(zhong)可加(jia)入(ru)1μg/L蛋白(bai)酶(mei)抑制劑或(huo)50U/ml的Aprotinin(抑肽酶(mei))。用手工或(huo)勻漿器(qi)將標本(ben)勻漿充分。離(li)心20分鐘(zhong)左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔(zai)細(xi)收(shou)集上(shang)清(qing)置(zhi)於(yu)-20度(du)或(huo)- 70度(du)保(bao)存(cun)，如有必(bi)要，可以將樣(yang)品(pin)濃縮幹燥。分裝後壹(yi)份待檢測，其余(yu)冷(leng)凍備用。
寄標(biao)本(ben)時需註明(ming)以(yi)下(xia)情況(kuang)：
1、標本(ben)編號(hao)；2、所(suo)測項目(mu)；3、是否(fou)做復孔(kong)；4、實驗(yan)後標本是否(fou)寄回(hui)

CsA ELISA 安(an)全性
1）避免(mian)直接(jie)接(jie)觸終(zhong)止(zhi)液(ye)和(he)底(di)物(wu)A、B。壹(yi)旦(dan)接觸到(dao)這(zhe)些液(ye)體(ti)，請盡快用水沖洗。
2）實(shi)驗(yan)中(zhong)不要(yao)吃(chi)喝(he)、抽煙(yan)或(huo)使(shi)用化(hua)妝(zhuang)品。
3）不(bu)要用嘴吸取(qu)裏的任何成份。

CsA ELISA 操(cao)作註意(yi)事(shi)項(xiang)
1）試劑應按標(biao)簽(qian)說(shuo)明(ming)書(shu)儲存(cun)，使(shi)用前恢(hui)復到(dao)室(shi)溫。稀(xi)稀(xi)過後的標(biao)準(zhun)品(pin)應丟(diu)棄(qi)，不可保存(cun)。
2）實驗(yan)中(zhong)不用的板(ban)條(tiao)應立即放回包裝袋中(zhong)，密封保(bao)存(cun)，以免(mian)變質(zhi)。
3）不用的其它(ta)試劑應包裝好(hao)或(huo)蓋好(hao)。不同(tong)批號的試劑不(bu)要(yao)混(hun)用。保質前使(shi)用。
4）使(shi)用壹(yi)次(ci)性的吸(xi)頭(tou)以(yi)免(mian)交叉(cha)汙染(ran)，吸取(qu)終(zhong)止(zhi)液(ye)和(he)底(di)物(wu)A、B液(ye)時(shi)，避(bi)免(mian)使(shi)用帶金(jin)屬(shu)部(bu)分的加(jia)樣(yang)器(qi)。
5）使(shi)用幹凈的塑(su)料(liao)容(rong)器(qi)配(pei)置(zhi)洗滌液(ye)。使(shi)用前充分混(hun)勻裏的各(ge)種(zhong)成(cheng)份及(ji)樣(yang)品(pin)。
6）洗滌酶(mei)標(biao)板(ban)時應充分拍(pai)幹(gan)，不(bu)要(yao)將(jiang)吸水紙(zhi)直接(jie)放入(ru)酶(mei)標(biao)反應孔(kong)中(zhong)吸水(shui)。
7）底(di)物(wu)A應揮發(fa)，避(bi)免(mian)長時間(jian)打開蓋子(zi)。底(di)物(wu)B對(dui)光敏感，避免(mian)長時間(jian)暴露於(yu)光下(xia)。避(bi)免(mian)用手接觸，有(you)毒(du)。實驗(yan)完成(cheng)後應立即讀(du)取(qu)OD值。
8）加(jia)入(ru)試劑的順(shun)序(xu)應壹(yi)致，以保(bao)證(zheng)所(suo)有(you)反應板(ban)孔(kong)溫育(yu)的時(shi)間(jian)壹(yi)樣(yang)。
9）按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)中(zhong)標明(ming)的時(shi)間(jian)、加(jia)液(ye)的量(liang)及(ji)順(shun)序(xu)進行溫(wen)育(yu)操(cao)作。

CsA ELISA 樣(yang)品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及(ji)保(bao)存(cun)方法(fa)
1）-----操(cao)作過程中(zhong)避免(mian)任何細胞(bao)刺(ci)激(ji)。使(shi)用不含(han)熱(re)原和內的試管。收(shou)集血(xue)液(ye)後，1000×g離心10分鐘(zhong)將(jiang)和紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心地分離(li)。
2）-----EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽、肝(gan)素(su)可用於(yu)檢(jian)測。1000×g離心30分鐘(zhong)去除顆粒。
3）細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)---1000×g離(li)心10分鐘(zhong)去除顆粒和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。
4）組(zu)織勻漿-----將(jiang)組(zu)織加(jia)入(ru)適量(liang)生理(li)鹽水搗(dao)碎。1000×g離(li)心10分鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)液(ye)
5）保(bao)存(cun)------如果樣(yang)品(pin)不(bu)立(li)即(ji)使(shi)用，應將其分成(cheng)小(xiao)部(bu)分-70 ℃保(bao)存(cun)，避免(mian)反復冷(leng)凍。盡可能的不(bu)要(yao)使(shi)用溶(rong)血(xue)或(huo)高血(xue)脂血(xue)。如果中(zhong)大(da)量(liang)顆(ke)粒，檢(jian)測前先(xian)離心或(huo)過濾(lv)。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或(huo)更高的溫(wen)度(du)加(jia)熱(re)解(jie)凍。應在(zai)室(shi)溫下(xia)解(jie)凍並確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻地充分解(jie)凍。

CsA ELISA 試劑的準(zhun)備(bei)
1）標(biao)準品：標(biao)準品的系(xi)列稀(xi)釋(shi)應在(zai)實(shi)驗(yan)時(shi)準備，不能儲存(cun)。稀(xi)釋(shi)前將(jiang)標準品振蕩(dang)混(hun)勻。
2）洗滌緩沖液(ye)（50×）的稀(xi)釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水(shui)50倍稀(xi)釋(shi)。

CsA ELISA 操(cao)作步驟
1）使(shi)用前，將所(suo)有(you)試劑充分混(hun)勻。不要使(shi)液(ye)體(ti)產(chan)生大(da)量(liang)的泡(pao)沫(mo)，以(yi)免(mian)加(jia)樣(yang)時(shi)加(jia)入(ru)大(da)量(liang)的氣泡(pao)，產(chan)生加(jia)樣(yang)上(shang)的誤差。
2）根據(ju)待測樣(yang)品(pin)數(shu)量(liang)加(jia)上標準品的數(shu)量(liang)決(jue)定(ding)所(suo)需的板(ban)條(tiao)數。每(mei)個標(biao)準品(pin)和(he)空(kong)白(bai)孔(kong)建議做復孔(kong)。每(mei)個樣(yang)品(pin)根據(ju)自(zi)己(ji)的數(shu)量(liang)來(lai)定(ding)，能使(shi)用復孔(kong)的盡量(liang)做(zuo)復孔(kong)。標本(ben)用標本稀(xi)釋(shi)液(ye)1：1稀(xi)釋(shi)後加(jia)入(ru)50ul於(yu)反應孔(kong)內。
3）加(jia)入(ru)稀(xi)釋(shi)好(hao)後的標(biao)準(zhun)品(pin)50ul於(yu)反應孔(kong)、加(jia)入(ru)待測樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反應孔(kong)內。立即(ji)加(jia)入(ru)50ul的生物素(su)標記的。蓋上(shang)膜(mo)板(ban)，輕輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫育(yu)1小(xiao)時(shi)。
4）甩(shuai)去孔(kong)內液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒，甩(shuai)去洗滌液(ye)，用吸水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操(cao)作3次。如果(guo)用洗滌，洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次(ci)。
5）每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)80ul的親(qin)和(he)鏈(lian)酶(mei)素(su)-HRP，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。
6）甩(shuai)去孔(kong)內液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒，甩(shuai)去洗滌液(ye)，用吸水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操(cao)作3次。如果(guo)用洗滌，洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次(ci)。
7）每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)底(di)物(wu)A、B各(ge)50ul，輕輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫育(yu)10分鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光照。
8）取(qu)出酶(mei)標(biao)板(ban)，迅速加(jia)入(ru)50ul終(zhong)止(zhi)液(ye)，加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)後應立即測定結(jie)果。
9）在(zai)450nm波(bo)長處測定各(ge)孔(kong)的OD值。
壹(yi)些(xie)好(hao)評
辦事(shi)效(xiao)率(lv)蠻高(gao)，幾(ji)天(tian)，就幫(bang)我搞定了(le)這個，謝謝！盒(he)子(zi)蠻(man)不錯(cuo)，包含(han)所(suo)需試劑，並提(ti)供(gong)了中(zhong)英文(wen)雙版說(shuo)明(ming)書(shu)及(ji)增(zeng)值稅(shui)，很，銷售人員的態(tai)度(du)也謙和(he)。靈敏度(du)不(bu)錯(cuo)，重(zhong)復性也行，在(zai)我做的這(zhe)些(xie)實(shi)驗(yan)中(zhong)，與國(guo)內同行的盒(he)子(zi)相比(bi)來(lai)說(shuo)，性價(jia)比(bi)挺高的，尤其是價(jia)格(ge)占有不(bu)錯(cuo)的優(you)勢，贊壹(yi)個！操(cao)作挺方便(bian)的，也簡單(dan)，當(dang)然(ran)，這(zhe)也多(duo)虧(kui)了公(gong)司的技(ji)術(shu)人員詳細的實(shi)驗(yan)指導，很好(hao)，謝謝，實(shi)驗(yan)也相當(dang)成(cheng)功。實驗(yan)出來(lai)的標(biao)準(zhun)曲(qu)線很不錯(cuo)（很優美），而(er)且價(jia)格(ge)相對(dui)合理(li)，技(ji)術(shu)指導很到位......我購(gou)買(mai)了(le)兩(liang)盒(he)，批次新(xin)，保質(zhi)期內，實驗(yan)結(jie)果做出來(lai)了(le)，貨到的挺快，那(na)麽遠，幾(ji)天(tian)就到(dao)了，加(jia)上我做實驗(yan)，壹(yi)共五(wu)天就搞(gao)定了(le)。經朋(peng)友(you)介(jie)紹(shao)，購(gou)買(mai)了(le)此公司的ELISA，用過，還不錯(cuo)，實(shi)驗(yan)效(xiao)果很好(hao)，基本(ben)達(da)到(dao)實驗(yan)參數(shu)要求，如果(guo)，下(xia)次(ci)還(hai)做(zuo)實(shi)驗(yan)的話，我還買(mai)這(zhe)家(jia)的，朋(peng)友(you)這幾(ji)年(nian)都(dou)在(zai)用這家(jia)的（長期訂(ding)貨）。
CsA ELISA 局限
6號(hao)標準(zhun)品以(yi)上(shang)的結(jie)果(guo)為(wei)非(fei)線性的，根據(ju)此(ci)標準曲(qu)線無法(fa)得(de)到(dao)的結(jie)果(guo)。
CsA ELISA 性能
1. 靈敏度(du)：小(xiao)的檢(jian)測濃度(du)小(xiao)於(yu)1號(hao)標準(zhun)品(pin)。稀(xi)釋(shi)度(du)的線性。樣(yang)品(pin)線性回歸(gui)與(yu)預期濃度(du)相關系(xi)數R值為(wei)0.990。
2. 特(te)異(yi)性：不與其它(ta)細胞(bao)因(yin)子反應。
3. 重(zhong)復性：板(ban)內、板(ban)間(jian)變異(yi)系(xi)數均(jun)小(xiao)於(yu)10%。

CsA ELISA  結(jie)果判(pan)斷(duan)與(yu)分析(xi)
1、儀器(qi)值：於(yu)波(bo)長450nm的上(shang)讀(du)取(qu)各孔(kong)的OD值
2、以吸(xi)光度(du)OD值為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)（Y），相應的待測物質(zhi)標準(zhun)品濃度(du)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)（X），做(zuo)得(de)相應的曲(qu)線，樣(yang)品(pin)的待測物質(zhi)含(han)量(liang)可根據(ju)其OD值由標(biao)準曲(qu)線換算(suan)出相應的濃度(du)。

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