CK-20 ELISA

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產品名(ming)稱(cheng):CK-20 ELISA。

類別(bie) :ELISA
貨期(qi) :7-10天(tian)
CK-20 ELISA。註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：
收集(ji)標本前必須清楚(chu)要檢測(ce)的(de)成份是否(fou)足夠穩(wen)定(ding)。對(dui)收集後當(dang)天進(jin)行(xing)檢測(ce)的(de)標(biao)本，儲存(cun)在4℃備用，如有(you)特殊(shu)原因(yin)需要周(zhou)期(qi)收(shou)集(ji)標(biao)本，將(jiang)標(biao)本及時分(fen)裝(zhuang)後(hou)放(fang)在-20℃或(huo)-70℃條(tiao)件(jian)下(xia)保存(cun)。避(bi)免反復(fu)凍融。標本2-8℃可保存(cun)48小(xiao)時，-20℃可保存(cun)1個月。-70度(du)可(ke)保存(cun)6個月。部(bu)分(fen)標本需添加(jia)抑肽(tai)酶(mei)。
1.  試劑準(zhun)備：所(suo)有(you)試劑都(dou)必(bi)須在使用前達(da)到室(shi)溫，使用後請(qing)立即按照說(shuo)明(ming)書(shu)要求保存(cun)試(shi)劑。  實驗操(cao)作(zuo)中請(qing)使用壹次(ci)性的吸頭，避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。
2.   加(jia)樣(yang)：加(jia)樣(yang)或(huo)加(jia)試(shi)劑(ji)時，請(qing)註(zhu)意(yi)在吸取(qu)標(biao)本 / 標準品，酶(mei)結合(he)物(wu)或(huo)底物(wu)時(shi)，前(qian)壹個孔(kong)與後壹個孔(kong)加(jia)樣(yang)之(zhi)間(jian)的時(shi)間(jian)間(jian)隔如果太大，將(jiang)會(hui)導(dao)致(zhi)不(bu)同(tong)的(de) “預(yu)孵(fu)育(yu)"時(shi)間(jian)，從而明(ming)顯地(di)影(ying)響(xiang)到(dao)測(ce)量值的(de)準(zhun)確性及重(zhong)復(fu)性。壹次(ci)加(jia)樣(yang)時(shi)間(jian)(包(bao)括(kuo)標(biao)準(zhun)品及(ji)所(suo)有(you)樣(yang)品)好控(kong)制(zhi)在10分(fen)鐘(zhong)內(nei)，如標(biao)本數(shu)量多(duo)，推(tui)薦(jian)使用多道(dao)移(yi)液器加(jia)樣(yang)。
3.   孵(fu)育(yu)：為(wei)防(fang)止(zhi)樣(yang)品蒸(zheng)發(fa)，試(shi)驗時(shi)將(jiang)反(fan)應板(ban)放(fang)於鋪有(you)濕(shi)布(bu)的密閉(bi)盒內(nei)，酶標(biao)板(ban)加(jia)上(shang)蓋(gai)或(huo)覆膜(mo)，以避(bi)免液體蒸(zheng)發(fa)；洗(xi)板(ban)後(hou)應(ying)盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)下(xia)步(bu)操(cao)作(zuo)，任何時(shi)侯都(dou)應(ying)避(bi)免(mian)酶標板(ban)處(chu)於幹燥狀(zhuang)態;同(tong)時(shi)應(ying)嚴(yan)格遵守(shou)給定(ding)的孵(fu)育(yu)時(shi)間(jian)和(he)溫度(du)。
4.   洗(xi)滌(di)：洗滌過程(cheng)中反應孔(kong)中殘留的(de)洗滌(di)液應在濾(lv)紙(zhi)上充分(fen)拍(pai)幹(gan)，勿將(jiang)濾(lv)紙(zhi)直接放(fang)入反(fan)應(ying)孔(kong)中吸水，同(tong)時要消除(chu)板(ban)底殘(can)留的(de)液體和(he)手指(zhi)印，避(bi)免影(ying)響(xiang)後(hou)的(de)讀(du)數(shu)。
5.  試劑配(pei)制(zhi)：Detection A及Detection B在使用前請(qing)手甩(shuai)幾(ji)下(xia)或(huo)少時離(li)心(xin)處(chu)理，以使管壁(bi)或(huo)瓶蓋的(de)液體沈(chen)積到(dao)管底。標(biao)準(zhun)品、檢測(ce)溶(rong)液A工(gong)作(zuo)液、檢測(ce)溶(rong)液B工(gong)作(zuo)液請(qing)依據(ju)所(suo)需的量配(pei)置(zhi)使用，並使用相應的稀(xi)釋液配(pei)制(zhi)，不(bu)能混淆(xiao)。請(qing)確(que)配(pei)置(zhi)標準品及(ji)工(gong)作(zuo)液，盡(jin)量不(bu)要微量配(pei)置(zhi)(如吸取(qu)檢測(ce)溶(rong)液A時，壹(yi)次(ci)不(bu)要小於10μl)，以避(bi)免由(you)於不(bu)準(zhun)確(que)稀(xi)釋而造(zao)成的(de)濃(nong)度(du)誤差(cha)；請(qing)勿(wu)重復(fu)使用已(yi)稀釋過(guo)的標準(zhun)品、檢測(ce)溶(rong)液A工(gong)作(zuo)液或(huo)檢測(ce)溶(rong)液B工(gong)作(zuo)液。
6.  反應(ying)時間(jian)的控(kong)制(zhi)：加(jia)入(ru)底物(wu)後(hou)請(qing)定(ding)時觀察(cha)反應孔(kong)的顏色變化(比(bi)如，每(mei)隔10分(fen)鐘(zhong))，如顏色較深(shen)，請(qing)提前加(jia)入(ru)終止(zhi)液終止(zhi)反(fan)應(ying)，避(bi)免(mian)反應過強(qiang)從而影(ying)響(xiang)光密度讀(du)數(shu)。
7.  底物(wu)：底物(wu)請(qing)避(bi)光保存(cun)，在儲(chu)存(cun)和(he)溫育(yu)時(shi)避(bi)免強光直接照(zhao)射。
    建(jian)議檢測(ce)樣(yang)品時(shi)均(jun)設雙孔(kong)測(ce)定(ding)，以保證檢測(ce)結(jie)果的準(zhun)確(que)性。
    如標(biao)本中待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)含量過(guo)高(gao)，請(qing)先(xian)稀釋後(hou)再(zai)測(ce)定(ding)，計算時(shi)請(qing)後(hou)乘以稀(xi)釋倍數(shu)。
洗板(ban)方(fang)法
1.  手工(gong)洗板(ban)方(fang)法：吸去(qu)(不(bu)可(ke)觸(chu)及板(ban)壁(bi))或(huo)甩(shuai)掉(diao)酶(mei)標(biao)板(ban)內(nei)的液體；在實驗臺(tai)上鋪(pu)墊(dian)幾(ji)層(ceng)吸水紙(zhi)，酶標(biao)板(ban)朝(chao)下(xia)用(yong)力(li)拍(pai)幾(ji)次(ci)；將(jiang)推(tui)薦(jian)的洗(xi)滌緩沖液至少0.3ml註(zhu)入(ru)孔(kong)內(nei)，浸泡(pao)1-2分(fen)鐘(zhong)，根(gen)據(ju)需要，重復(fu)此過程(cheng)數(shu)次(ci)。
2.  自(zi)動洗(xi)板(ban)：如果有自(zi)動，應(ying)在熟(shu)練使用後再(zai)用到(dao)正式(shi)實驗過(guo)程(cheng)中。
液體類(lei)標(biao)本：
標本必須為液體，不(bu)含沈(chen)澱。包(bao)括(kuo)、、尿(niao)液、胸(xiong)腹(fu)水、腦(nao)脊(ji)液、細胞(bao)培養(yang)上清、組(zu)織勻漿(jiang)等。1ml的(de)全血(xue)可得(de)到(dao)0.5ml的(de)或(huo)。每個標本量收(shou)集(ji)體積＝100ul×檢測(ce)種(zhong)類(lei)。
◇      ：
室(shi)溫血(xue)液自(zi)然凝(ning)固(gu)10-20分(fen)鐘(zhong)後(hou)，離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。收集(ji)上清。如有(you)沈(chen)澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。
◇      ：
應(ying)根(gen)據(ju)的要求選擇(ze)EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鈉或(huo)肝(gan)素作(zuo)為抗(kang)凝劑(ji)，加(jia)入(ru)10％(v/v)抗(kang)凝劑(0.1M檸(ning)檬酸(suan)鈉或(huo)1% heparin 或(huo)2.0%EDTA.Na2)混合10-20分(fen)鐘(zhong)後(hou)，離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔(zai)細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清。如有(you)沈(chen)澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。
◇      尿(niao)液、胸(xiong)腹(fu)水、腦(nao)脊(ji)液：
用無(wu)菌(jun)管收集(ji)。離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔(zai)細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清。如有(you)沈(chen)澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。
◇      細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上清：
檢測(ce)分(fen)泌性的成份時，用(yong)無(wu)菌(jun)管收集(ji)。離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔(zai)細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清。檢測(ce)細(xi)胞(bao)內(nei)的成份時，用(yong)PBS(PH7.2-7.4)稀(xi)釋細(xi)胞懸液，細胞(bao)濃度達(da)到100萬(wan)/ml左右。通(tong)過(guo)反復(fu)凍融，以使細胞破(po)壞(huai)並(bing)放(fang)出(chu)細胞內(nei)成份。離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔(zai)細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清。保存(cun)過(guo)程(cheng)中如有(you)沈(chen)澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。
◇      組(zu)織標本：
切(qie)割標(biao)本後，稱(cheng)取重(zhong)量。加(jia)入(ru)壹(yi)定(ding)量的(de)PBS，緩沖液中可加(jia)入(ru)1μg/L蛋白酶(mei)抑制(zhi)劑(ji)或(huo)50U/ml的Aprotinin(抑肽(tai)酶(mei))。用手工(gong)或(huo)勻漿(jiang)器(qi)將(jiang)標(biao)本勻漿(jiang)充分(fen)。離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔(zai)細(xi)收(shou)集(ji)上(shang)清置(zhi)於-20度或(huo)- 70度保存(cun)，如有(you)必要，可以將(jiang)樣(yang)品濃(nong)縮幹(gan)燥。分(fen)裝(zhuang)後(hou)壹份待(dai)檢測(ce)，其(qi)余冷(leng)凍備用。
寄(ji)標本時需註(zhu)明(ming)以下(xia)情況：
1、標(biao)本編號(hao)；2、所(suo)測(ce)項(xiang)目(mu)；3、是否(fou)做復(fu)孔(kong)；4、實驗後(hou)標本是否(fou)寄回

CK-20 ELISA 安全性
1）避免(mian)直(zhi)接接觸(chu)終止(zhi)液和(he)底物(wu)A、B。壹(yi)旦接觸(chu)到這些液體，請(qing)盡(jin)快(kuai)用(yong)水沖洗。
2）實驗中不(bu)要吃喝、抽煙(yan)或(huo)使用化妝(zhuang)品。
3）不(bu)要用嘴(zui)吸取(qu)裏(li)的(de)任(ren)何成份。

CK-20 ELISA 操(cao)作(zuo)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)
1）試劑(ji)應按(an)標簽(qian)說(shuo)明(ming)書(shu)儲存(cun)，使用前恢復(fu)到室溫。稀(xi)稀(xi)過(guo)後的標準(zhun)品應(ying)丟棄(qi)，不(bu)可(ke)保存(cun)。
2）實驗中不(bu)用(yong)的(de)板(ban)條(tiao)應(ying)立即放(fang)回包(bao)裝(zhuang)袋中，密封保存(cun)，以免(mian)變質(zhi)。
3）不(bu)用(yong)的(de)其(qi)它試劑(ji)應(ying)包(bao)裝(zhuang)好或(huo)蓋好。不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)的試(shi)劑不(bu)要混用(yong)。保質(zhi)前(qian)使用。
4）使用壹次(ci)性的吸頭以免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染，吸取(qu)終止(zhi)液和(he)底物(wu)A、B液時，避(bi)免使用帶金屬部(bu)分(fen)的加(jia)樣(yang)器(qi)。
5）使用幹凈(jing)的(de)塑料(liao)容器(qi)配(pei)置(zhi)洗滌液。使用前充分(fen)混勻裏(li)的(de)各(ge)種(zhong)成份及樣(yang)品。
6）洗(xi)滌酶(mei)標(biao)板(ban)時(shi)應(ying)充分(fen)拍(pai)幹(gan)，不(bu)要將(jiang)吸水紙(zhi)直接放(fang)入酶(mei)標(biao)反(fan)應孔(kong)中吸水。
7）底物(wu)A應(ying)揮(hui)發，避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)打開蓋子(zi)。底物(wu)B對(dui)光敏感，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴露(lu)於光下(xia)。避(bi)免(mian)用(yong)手接觸(chu)，有毒。實驗完(wan)成後(hou)應(ying)立即讀(du)取OD值。
8）加(jia)入(ru)試(shi)劑的順序(xu)應(ying)壹(yi)致，以保證所(suo)有(you)反應板(ban)孔(kong)溫育(yu)的(de)時(shi)間(jian)壹樣(yang)。
9）按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)中標明(ming)的時(shi)間(jian)、加(jia)液的量及(ji)順序(xu)進(jin)行(xing)溫育(yu)操(cao)作(zuo)。

CK-20 ELISA 樣(yang)品收(shou)集、處(chu)理及保存(cun)方(fang)法
1）-----操(cao)作(zuo)過程(cheng)中避免任何細(xi)胞刺(ci)激(ji)。使用不(bu)含熱原和(he)內(nei)的試(shi)管。收集(ji)血(xue)液後，1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)和(he)紅(hong)細胞迅速(su)小心(xin)地(di)分(fen)離(li)。
2）-----EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)、肝(gan)素可用於檢測(ce)。1000×g離(li)心(xin)30分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒(li)。
3）細胞上(shang)清液---1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。
4）組(zu)織勻漿(jiang)-----將(jiang)組(zu)織加(jia)入(ru)適(shi)量生(sheng)理鹽水搗(dao)碎。1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清液
5）保存(cun)------如果樣(yang)品不(bu)立即使用，應將(jiang)其(qi)分(fen)成小(xiao)部(bu)分(fen)-70 ℃保存(cun)，避(bi)免反復(fu)冷(leng)凍。盡(jin)可(ke)能的不(bu)要使用溶(rong)血(xue)或(huo)高血(xue)脂(zhi)血(xue)。如果中大量顆(ke)粒(li)，檢測(ce)前(qian)先(xian)離(li)心(xin)或(huo)過濾(lv)。不(bu)要在37℃或(huo)更高的溫度(du)加(jia)熱解凍。應(ying)在室(shi)溫下(xia)解凍並(bing)確(que)保樣(yang)品均(jun)勻地(di)充分(fen)解凍。

CK-20 ELISA 試(shi)劑(ji)的準備
1）標準(zhun)品：標(biao)準品的(de)系列稀釋應(ying)在實驗時(shi)準備，不(bu)能儲存(cun)。稀(xi)釋前(qian)將(jiang)標(biao)準品振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻。
2）洗(xi)滌(di)緩沖液（50×）的稀(xi)釋：蒸(zheng)餾(liu)水50倍稀釋。

CK-20 ELISA 操(cao)作(zuo)步驟
1）使用前，將(jiang)所(suo)有(you)試劑充分(fen)混勻。不(bu)要使液體產(chan)生(sheng)大量的(de)泡(pao)沫，以免(mian)加(jia)樣(yang)時(shi)加(jia)入(ru)大(da)量的(de)氣泡(pao)，產生(sheng)加(jia)樣(yang)上(shang)的(de)誤差(cha)。
2）根(gen)據(ju)待(dai)測(ce)樣(yang)品數(shu)量加(jia)上(shang)標(biao)準品的(de)數(shu)量決定(ding)所(suo)需的板(ban)條(tiao)數(shu)。每個標準(zhun)品和(he)空(kong)白孔(kong)建(jian)議做復(fu)孔(kong)。每個樣(yang)品根(gen)據(ju)自(zi)己(ji)的數(shu)量來定(ding)，能使用復(fu)孔(kong)的盡(jin)量做復(fu)孔(kong)。標本用標本稀釋液1：1稀釋後(hou)加(jia)入(ru)50ul於反應(ying)孔(kong)內(nei)。
3）加(jia)入(ru)稀(xi)釋好後的(de)標準(zhun)品50ul於反應(ying)孔(kong)、加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)樣(yang)品50ul於反應(ying)孔(kong)內(nei)。立即加(jia)入(ru)50ul的(de)生物(wu)素(su)標(biao)記的。蓋(gai)上(shang)膜(mo)板(ban)，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫育(yu)1小(xiao)時(shi)。
4）甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液體，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液，用吸水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此操(cao)作(zuo)3次(ci)。如果用洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌次(ci)數(shu)增加(jia)壹(yi)次(ci)。
5）每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)80ul的(de)親(qin)和(he)鏈(lian)酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。
6）甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液體，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液，用吸水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此操(cao)作(zuo)3次(ci)。如果用洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌次(ci)數(shu)增加(jia)壹(yi)次(ci)。
7）每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫育(yu)10分(fen)鐘(zhong)。避(bi)免光照。
8）取(qu)出(chu)酶標板(ban)，迅速(su)加(jia)入(ru)50ul終止(zhi)液，加(jia)入(ru)終止(zhi)液後應(ying)立即測(ce)定(ding)結果。
9）在450nm波(bo)長處(chu)測(ce)定(ding)各(ge)孔(kong)的OD值。
壹(yi)些好評(ping)
辦(ban)事(shi)效(xiao)率(lv)蠻(man)高(gao)，幾天，就幫我(wo)搞(gao)定(ding)了這個，謝謝(xie)！盒子(zi)蠻(man)不(bu)錯(cuo)，包(bao)含所(suo)需試劑，並(bing)提供了中英文(wen)雙(shuang)版說(shuo)明(ming)書(shu)及增(zeng)值稅，很(hen)，銷(xiao)售(shou)人(ren)員的態度(du)也謙和(he)。靈(ling)敏度不(bu)錯(cuo)，重(zhong)復(fu)性也行，在我(wo)做的這些實驗中，與國內(nei)同行(xing)的盒子(zi)相比來說(shuo)，性價比(bi)挺(ting)高的，尤(you)其(qi)是價(jia)格占(zhan)有不(bu)錯(cuo)的(de)優(you)勢(shi)，贊壹(yi)個！操(cao)作(zuo)挺(ting)方便的(de)，也簡(jian)單，當(dang)然，這也多虧(kui)了公司的技術(shu)人員詳細的(de)實驗指(zhi)導(dao)，很(hen)好，謝謝(xie)，實驗也相當(dang)成功(gong)。實驗出(chu)來的標(biao)準曲線(xian)很(hen)不(bu)錯(cuo)（很(hen)優(you)美），而且價(jia)格相對(dui)合理，技術(shu)指(zhi)導(dao)很(hen)到(dao)位......我購買了兩盒，批(pi)次(ci)新(xin)，保質(zhi)期(qi)內(nei)，實驗結(jie)果做出(chu)來了，貨到的挺(ting)快(kuai)，那(na)麽(me)遠(yuan)，幾天(tian)就到(dao)了，加(jia)上(shang)我(wo)做實驗，壹(yi)共(gong)五(wu)天(tian)就搞(gao)定(ding)了。經(jing)朋友介(jie)紹，購買(mai)了此公司的ELISA，用(yong)過(guo)，還不(bu)錯(cuo)，實驗效(xiao)果很(hen)好，基(ji)本達(da)到實驗參數(shu)要求，如果，下(xia)次(ci)還做實驗的(de)話，我還買這家的(de)，朋友這幾年(nian)都(dou)在用(yong)這家的(de)（長期(qi)訂(ding)貨）。
CK-20 ELISA 局限
6號(hao)標準(zhun)品以上(shang)的結(jie)果為非(fei)線(xian)性的，根(gen)據(ju)此標準(zhun)曲線(xian)無(wu)法得到的結(jie)果。
CK-20 ELISA 性能
1. 靈敏度：小的檢測(ce)濃(nong)度(du)小(xiao)於1號(hao)標準(zhun)品。稀(xi)釋度(du)的線(xian)性。樣(yang)品線(xian)性回歸與預(yu)期(qi)濃(nong)度(du)相關系數(shu)R值為(wei)0.990。
2. 特異(yi)性：不(bu)與(yu)其(qi)它細胞(bao)因(yin)子(zi)反(fan)應(ying)。
3. 重(zhong)復(fu)性：板(ban)內(nei)、板(ban)間(jian)變異(yi)系(xi)數(shu)均(jun)小於10%。

CK-20 ELISA  結果判斷(duan)與分(fen)析(xi)
1、儀(yi)器值：於波(bo)長450nm的(de)上讀(du)取各(ge)孔(kong)的OD值
2、以吸光度OD值為(wei)縱坐標(biao)（Y），相應的待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)標(biao)準(zhun)品濃(nong)度為(wei)橫(heng)坐標(biao)（X），做得相應的曲線(xian)，樣(yang)品的(de)待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)含量可(ke)根(gen)據(ju)其(qi)OD值由(you)標(biao)準曲線(xian)換算(suan)出(chu)相應的濃(nong)度(du)。

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