C3c ELISA

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產(chan)品名稱(cheng):C3c ELISA。

類別 :ELISA
貨(huo)期 :7-10天
C3c ELISA。註(zhu)意(yi)事項：
收(shou)集(ji)標本(ben)前必(bi)須清(qing)楚(chu)要檢(jian)測的(de)成份是否足(zu)夠(gou)穩定。對(dui)收(shou)集(ji)後當天進(jin)行檢(jian)測的(de)標本(ben)，儲存(cun)在4℃備(bei)用(yong)，如有(you)特(te)殊原(yuan)因(yin)需(xu)要(yao)周(zhou)期收(shou)集(ji)標本(ben)，將標本(ben)及時分(fen)裝後放(fang)在-20℃或-70℃條件下(xia)保(bao)存(cun)。避免(mian)反復凍融。標本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存48小(xiao)時，-20℃可(ke)保(bao)存1個(ge)月。-70度可(ke)保(bao)存6個(ge)月。部分(fen)標本(ben)需(xu)添加(jia)抑(yi)肽酶(mei)。
1.  試劑準(zhun)備(bei)：所有試(shi)劑都(dou)必(bi)須在使(shi)用(yong)前達到室(shi)溫，使(shi)用(yong)後(hou)請(qing)立即(ji)按照說(shuo)明書要(yao)求(qiu)保(bao)存(cun)試(shi)劑。  實驗(yan)操作(zuo)中請(qing)使用(yong)壹次(ci)性(xing)的(de)吸頭，避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染。
2.   加(jia)樣(yang)：加(jia)樣或加試(shi)劑時，請(qing)註(zhu)意(yi)在吸取(qu)標本(ben) / 標準品，酶(mei)結(jie)合物(wu)或底物(wu)時，前壹個孔(kong)與(yu)後壹個孔(kong)加(jia)樣之間(jian)的時間(jian)間(jian)隔如果(guo)太大，將會導致(zhi)不(bu)同(tong)的(de) “預(yu)孵(fu)育(yu)"時間(jian)，從(cong)而(er)明顯地影(ying)響(xiang)到測(ce)量值的準(zhun)確(que)性(xing)及(ji)重復性(xing)。壹(yi)次(ci)加樣(yang)時間(jian)(包(bao)括標準品及所(suo)有(you)樣品(pin))好(hao)控(kong)制在10分(fen)鐘內，如標本(ben)數(shu)量(liang)多(duo)，推(tui)薦(jian)使(shi)用多(duo)道(dao)移(yi)液(ye)器(qi)加樣。
3.   孵(fu)育(yu)：為防止樣品(pin)蒸發(fa)，試驗(yan)時將(jiang)反應板放(fang)於(yu)鋪(pu)有濕(shi)布(bu)的(de)密(mi)閉(bi)盒(he)內，酶(mei)標板加(jia)上(shang)蓋或覆膜，以避免(mian)液(ye)體(ti)蒸發；洗板後(hou)應盡快進(jin)行下(xia)步(bu)操作(zuo)，任(ren)何(he)時侯(hou)都(dou)應避免(mian)酶(mei)標板處於(yu)幹(gan)燥(zao)狀態;同(tong)時應嚴格(ge)遵(zun)守給(gei)定的孵(fu)育(yu)時間(jian)和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔(kong)中(zhong)殘留的洗滌液(ye)應在濾(lv)紙(zhi)上充(chong)分拍幹(gan)，勿(wu)將濾(lv)紙(zhi)直(zhi)接放(fang)入反應孔(kong)中(zhong)吸水(shui)，同(tong)時要(yao)消(xiao)除板底殘留的液(ye)體(ti)和手指印(yin)，避免(mian)影(ying)響(xiang)後的(de)讀數(shu)。
5.  試(shi)劑配(pei)制：Detection A及Detection B在使(shi)用(yong)前請(qing)手甩(shuai)幾(ji)下(xia)或少時離(li)心(xin)處理，以使(shi)管壁(bi)或瓶(ping)蓋(gai)的(de)液(ye)體(ti)沈積(ji)到(dao)管底。標準品、檢(jian)測溶(rong)液(ye)A工(gong)作(zuo)液(ye)、檢(jian)測溶(rong)液(ye)B工(gong)作(zuo)液(ye)請(qing)依據(ju)所需(xu)的(de)量(liang)配(pei)置使(shi)用(yong)，並(bing)使用(yong)相應的稀(xi)釋液(ye)配(pei)制，不能混淆。請(qing)確(que)配(pei)置標準品及工(gong)作(zuo)液(ye)，盡量不(bu)要(yao)微量配(pei)置(如(ru)吸取(qu)檢(jian)測溶(rong)液(ye)A時，壹(yi)次(ci)不要(yao)小(xiao)於(yu)10μl)，以避免(mian)由於(yu)不準(zhun)確(que)稀(xi)釋而(er)造成的濃(nong)度誤(wu)差(cha)；請(qing)勿重復使(shi)用(yong)已稀釋過的標準品、檢(jian)測溶(rong)液(ye)A工(gong)作(zuo)液(ye)或檢(jian)測溶(rong)液(ye)B工(gong)作(zuo)液(ye)。
6.  反應時間(jian)的控制(zhi)：加入底物(wu)後請(qing)定時觀察反應孔(kong)的(de)顏(yan)色變化(hua)(比(bi)如，每隔10分鐘)，如(ru)顏(yan)色較深，請(qing)提前加入終止(zhi)液(ye)終止(zhi)反應，避免(mian)反應過強從(cong)而(er)影(ying)響(xiang)光密(mi)度讀(du)數(shu)。
7.  底物(wu)：底物(wu)請(qing)避光保(bao)存(cun)，在儲(chu)存(cun)和溫育(yu)時避免(mian)強光直(zhi)接照射(she)。
    建(jian)議檢(jian)測樣(yang)品時均(jun)設雙孔(kong)測(ce)定，以保(bao)證檢(jian)測結(jie)果的(de)準(zhun)確(que)性(xing)。
    如(ru)標本(ben)中待測物(wu)質含(han)量(liang)過高，請(qing)先稀(xi)釋(shi)後(hou)再(zai)測(ce)定，計(ji)算(suan)時請(qing)後乘以稀(xi)釋倍(bei)數(shu)。
洗板方(fang)法
1.  手(shou)工洗板方(fang)法：吸去(qu)(不(bu)可(ke)觸(chu)及板壁(bi))或甩(shuai)掉(diao)酶(mei)標板內的液(ye)體(ti)；在實驗(yan)臺上(shang)鋪(pu)墊幾(ji)層吸水(shui)紙(zhi)，酶(mei)標板朝(chao)下(xia)用(yong)力(li)拍幾(ji)次(ci)；將推(tui)薦(jian)的(de)洗滌緩沖(chong)液(ye)至(zhi)少0.3ml註(zhu)入孔(kong)內，浸泡1-2分鐘，根(gen)據(ju)需(xu)要(yao)，重復此過程數(shu)次(ci)。
2.  自動洗板：如(ru)果(guo)有自動，應在熟練(lian)使(shi)用(yong)後(hou)再用到(dao)正式實驗(yan)過程中。
液(ye)體(ti)類標本(ben)：
標本(ben)必(bi)須為(wei)液(ye)體(ti)，不含(han)沈(chen)澱。包(bao)括、、尿液(ye)、胸(xiong)腹水、腦脊液(ye)、細(xi)胞(bao)培養(yang)上清、組(zu)織(zhi)勻(yun)漿等(deng)。1ml的全血可(ke)得(de)到(dao)0.5ml的(de)或。每個(ge)標本(ben)量收(shou)集(ji)體積(ji)＝100ul×檢(jian)測種(zhong)類。
◇      ：
室(shi)溫血(xue)液(ye)自然凝固(gu)10-20分鐘後(hou)，離(li)心(xin)20分(fen)鐘左(zuo)右(2000-3000轉/分)。收(shou)集(ji)上清。如有沈澱形(xing)成，應再次(ci)離心(xin)。
◇      ：
應根據(ju)的要(yao)求(qiu)選(xuan)擇EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉(na)或肝素(su)作(zuo)為抗(kang)凝(ning)劑，加(jia)入10％(v/v)抗(kang)凝(ning)劑(0.1M檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉(na)或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合(he)10-20分(fen)鐘後(hou)，離(li)心(xin)20分(fen)鐘左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔細收(shou)集(ji)上清。如有沈澱形(xing)成，應再次(ci)離心(xin)。
◇      尿液(ye)、胸(xiong)腹水、腦脊液(ye)：
用(yong)無菌管(guan)收(shou)集(ji)。離心20分鐘左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔細收(shou)集(ji)上清。如有沈澱形(xing)成，應再次(ci)離心(xin)。
◇      細(xi)胞(bao)培養(yang)上清：
檢(jian)測分(fen)泌性(xing)的(de)成份時，用(yong)無菌管(guan)收(shou)集(ji)。離心20分鐘左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔細收(shou)集(ji)上清。檢(jian)測細(xi)胞(bao)內的成份時，用(yong)PBS(PH7.2-7.4)稀(xi)釋細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，細(xi)胞(bao)濃(nong)度達(da)到100萬(wan)/ml左右。通(tong)過反復凍融，以使(shi)細胞(bao)破壞並(bing)放出(chu)細胞(bao)內成份。離(li)心20分鐘左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔細收(shou)集(ji)上清。保存過程中如有(you)沈(chen)澱(dian)形(xing)成，應再次(ci)離心(xin)。
◇      組(zu)織標本(ben)：
切割(ge)標本(ben)後，稱(cheng)取(qu)重量。加(jia)入壹定量的(de)PBS，緩沖(chong)液(ye)中(zhong)可(ke)加(jia)入1μg/L蛋白(bai)酶(mei)抑(yi)制劑或50U/ml的Aprotinin(抑(yi)肽酶(mei))。用手工或勻漿器(qi)將標本(ben)勻漿充(chong)分。離(li)心(xin)20分(fen)鐘左(zuo)右(2000-3000轉/分)。仔細收(shou)集(ji)上清置於(yu)-20度或- 70度保(bao)存，如(ru)有(you)必(bi)要，可(ke)以將(jiang)樣品(pin)濃(nong)縮(suo)幹(gan)燥(zao)。分裝後壹(yi)份待檢(jian)測，其余(yu)冷(leng)凍備用。
寄(ji)標本(ben)時需(xu)註(zhu)明以下(xia)情(qing)況(kuang)：
1、標本(ben)編號(hao)；2、所(suo)測(ce)項目；3、是否做復(fu)孔(kong)；4、實驗(yan)後標本(ben)是否寄回(hui)

C3c ELISA 安全性(xing)
1）避免(mian)直接接觸(chu)終止(zhi)液(ye)和(he)底物(wu)A、B。壹旦(dan)接觸(chu)到(dao)這(zhe)些(xie)液(ye)體(ti)，請(qing)盡快用(yong)水(shui)沖(chong)洗。
2）實驗(yan)中不(bu)要吃喝(he)、抽煙(yan)或使用(yong)化(hua)妝(zhuang)品。
3）不要用嘴(zui)吸取(qu)裏(li)的任(ren)何(he)成份。

C3c ELISA 操(cao)作(zuo)註(zhu)意(yi)事項
1）試劑應按標簽(qian)說明書儲(chu)存(cun)，使(shi)用(yong)前恢復到(dao)室(shi)溫。稀(xi)稀(xi)過後的標準品應丟(diu)棄(qi)，不(bu)可(ke)保(bao)存。
2）實驗(yan)中不(bu)用的板條應立即(ji)放(fang)回(hui)包(bao)裝袋(dai)中(zhong)，密(mi)封(feng)保存(cun)，以免(mian)變質。
3）不用(yong)的(de)其它(ta)試(shi)劑應包(bao)裝好或蓋好(hao)。不同(tong)批號的(de)試(shi)劑不(bu)要(yao)混用(yong)。保(bao)質前使用。
4）使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)的(de)吸頭以免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染，吸取(qu)終止(zhi)液(ye)和(he)底物(wu)A、B液(ye)時，避免(mian)使用(yong)帶(dai)金屬部分(fen)的(de)加樣(yang)器(qi)。
5）使用幹(gan)凈(jing)的塑料(liao)容(rong)器(qi)配(pei)置洗滌液(ye)。使(shi)用前充(chong)分混勻(yun)裏(li)的各(ge)種成份及(ji)樣品。
6）洗滌酶(mei)標板時應充(chong)分拍幹(gan)，不(bu)要將(jiang)吸水(shui)紙(zhi)直接放(fang)入酶(mei)標反應孔(kong)中(zhong)吸水(shui)。
7）底物(wu)A應揮發(fa)，避免(mian)長時間(jian)打開蓋(gai)子(zi)。底物(wu)B對(dui)光敏感，避免(mian)長時間(jian)暴露於(yu)光下(xia)。避免(mian)用手(shou)接觸(chu)，有(you)毒(du)。實驗(yan)完成後應立即(ji)讀(du)取(qu)OD值。
8）加入試劑的(de)順(shun)序(xu)應壹致(zhi)，以保(bao)證所有反應板孔(kong)溫育(yu)的時間(jian)壹樣。
9）按照說(shuo)明書中(zhong)標明的時間(jian)、加液(ye)的(de)量及順(shun)序(xu)進(jin)行溫育(yu)操作(zuo)。

C3c ELISA 樣品(pin)收(shou)集(ji)、處理及保存(cun)方(fang)法
1）-----操(cao)作(zuo)過程中避免(mian)任(ren)何(he)細胞(bao)刺激(ji)。使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱原(yuan)和(he)內的試(shi)管。收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，1000×g離心10分(fen)鐘將(jiang)和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小心(xin)地分離。
2）-----EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽(yan)、肝(gan)素(su)可(ke)用(yong)於(yu)檢(jian)測。1000×g離(li)心30分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒。
3）細(xi)胞(bao)上(shang)清液(ye)---1000×g離(li)心10分鐘去(qu)除顆(ke)粒和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。
4）組織(zhi)勻漿-----將(jiang)組織(zhi)加(jia)入適(shi)量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎(sui)。1000×g離(li)心10分鐘，取(qu)上(shang)清液(ye)
5）保(bao)存------如果(guo)樣品(pin)不(bu)立即(ji)使(shi)用(yong)，應將其分(fen)成小部分(fen)-70 ℃保(bao)存，避免(mian)反復冷(leng)凍。盡可(ke)能(neng)的不(bu)要使用溶(rong)血或高血(xue)脂(zhi)血。如(ru)果中大量顆(ke)粒，檢(jian)測前先離(li)心(xin)或過濾。不要在37℃或更高(gao)的溫度加(jia)熱解凍。應在室(shi)溫下(xia)解凍並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地充(chong)分解凍。

C3c ELISA 試劑的(de)準(zhun)備
1）標準品：標準品的系(xi)列稀(xi)釋(shi)應在實驗(yan)時準(zhun)備(bei)，不能(neng)儲存。稀釋前將標準品振蕩(dang)混勻(yun)。
2）洗滌緩沖(chong)液(ye)（50×）的(de)稀釋：蒸(zheng)餾水50倍(bei)稀釋(shi)。

C3c ELISA 操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)
1）使用(yong)前，將所有(you)試劑充(chong)分混勻(yun)。不(bu)要使(shi)液(ye)體(ti)產生(sheng)大(da)量(liang)的(de)泡沫，以免(mian)加樣(yang)時加(jia)入大量的氣(qi)泡，產生(sheng)加(jia)樣(yang)上(shang)的誤(wu)差(cha)。
2）根(gen)據(ju)待測樣(yang)品數(shu)量(liang)加(jia)上(shang)標準品的數(shu)量(liang)決(jue)定所需(xu)的(de)板條數(shu)。每(mei)個(ge)標準品和空(kong)白(bai)孔(kong)建(jian)議做復孔(kong)。每(mei)個樣品根(gen)據(ju)自己(ji)的(de)數(shu)量(liang)來(lai)定，能使(shi)用復(fu)孔(kong)的(de)盡量做(zuo)復(fu)孔(kong)。標本(ben)用標本(ben)稀釋(shi)液(ye)1：1稀(xi)釋後加(jia)入50ul於(yu)反應孔(kong)內。
3）加入稀釋好後(hou)的(de)標準品50ul於(yu)反應孔(kong)、加(jia)入待測樣(yang)品50ul於(yu)反應孔(kong)內。立即(ji)加(jia)入50ul的生(sheng)物(wu)素(su)標記(ji)的。蓋(gai)上膜板，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫育(yu)1小時。
4）甩(shuai)去(qu)孔(kong)內液(ye)體(ti)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液(ye)，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重復此操作(zuo)3次(ci)。如果(guo)用(yong)洗滌，洗滌次(ci)數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次(ci)。
5）每孔(kong)加(jia)入80ul的親和鏈(lian)酶(mei)素(su)-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫育(yu)30分鐘。
6）甩(shuai)去(qu)孔(kong)內液(ye)體(ti)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液(ye)，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重復此操作(zuo)3次(ci)。如果(guo)用(yong)洗滌，洗滌次(ci)數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次(ci)。
7）每孔(kong)加(jia)入底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕輕振蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫育(yu)10分鐘。避免(mian)光照。
8）取(qu)出(chu)酶(mei)標板，迅(xun)速(su)加入50ul終止(zhi)液(ye)，加(jia)入終止(zhi)液(ye)後(hou)應立即(ji)測(ce)定結(jie)果。
9）在450nm波長處測定各(ge)孔(kong)的(de)OD值。
壹些(xie)好(hao)評
辦事效(xiao)率(lv)蠻高(gao)，幾(ji)天，就幫我(wo)搞(gao)定了這(zhe)個，謝謝！盒(he)子(zi)蠻(man)不(bu)錯(cuo)，包(bao)含(han)所(suo)需(xu)試(shi)劑，並(bing)提供(gong)了中(zhong)英(ying)文雙版(ban)說(shuo)明書及(ji)增(zeng)值稅，很(hen)，銷(xiao)售(shou)人(ren)員(yuan)的(de)態度也(ye)謙和(he)。靈敏度不(bu)錯，重復性(xing)也(ye)行(xing)，在我(wo)做(zuo)的這(zhe)些(xie)實驗(yan)中，與(yu)國內同(tong)行(xing)的盒子(zi)相(xiang)比(bi)來(lai)說(shuo)，性(xing)價(jia)比(bi)挺(ting)高的，尤(you)其是價格(ge)占有(you)不錯(cuo)的優勢，贊壹個(ge)！操(cao)作(zuo)挺(ting)方(fang)便(bian)的(de)，也簡單，當(dang)然，這(zhe)也多(duo)虧(kui)了公司的(de)技(ji)術人(ren)員(yuan)詳細的(de)實驗(yan)指導(dao)，很好，謝謝，實驗(yan)也相(xiang)當成功。實驗(yan)出來(lai)的(de)標準曲線很(hen)不(bu)錯（很(hen)優(you)美(mei)），而(er)且價(jia)格(ge)相對(dui)合(he)理，技術指導(dao)很到位......我購買(mai)了兩(liang)盒(he)，批次(ci)新，保質期內，實驗(yan)結(jie)果做(zuo)出(chu)來(lai)了，貨(huo)到的挺(ting)快，那(na)麽遠(yuan)，幾(ji)天就到(dao)了，加(jia)上(shang)我做(zuo)實驗(yan)，壹共五(wu)天就搞(gao)定了。經(jing)朋(peng)友(you)介(jie)紹(shao)，購買(mai)了此公司的(de)ELISA，用(yong)過，還(hai)不錯，實驗(yan)效(xiao)果(guo)很好(hao)，基本(ben)達到(dao)實驗(yan)參數(shu)要(yao)求(qiu)，如(ru)果(guo)，下(xia)次(ci)還(hai)做實驗(yan)的話，我還(hai)買這(zhe)家(jia)的(de)，朋友(you)這(zhe)幾(ji)年(nian)都(dou)在用(yong)這(zhe)家(jia)的(de)（長期(qi)訂貨(huo)）。
C3c ELISA 局限(xian)
6號標準品以上(shang)的結(jie)果為(wei)非(fei)線性(xing)的(de)，根(gen)據(ju)此標準曲線無法得(de)到(dao)的(de)結(jie)果。
C3c ELISA 性(xing)能(neng)
1. 靈敏度：小(xiao)的檢(jian)測濃(nong)度小(xiao)於(yu)1號標準品。稀釋(shi)度的(de)線性(xing)。樣(yang)品(pin)線(xian)性(xing)回(hui)歸(gui)與預(yu)期(qi)濃(nong)度相(xiang)關系(xi)數(shu)R值為0.990。
2. 特(te)異(yi)性(xing)：不(bu)與(yu)其它(ta)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)反應。
3. 重復性(xing)：板內、板間(jian)變異系(xi)數(shu)均(jun)小(xiao)於(yu)10%。

C3c ELISA  結(jie)果判斷(duan)與分(fen)析(xi)
1、儀(yi)器(qi)值：於(yu)波長450nm的(de)上(shang)讀取(qu)各(ge)孔(kong)的(de)OD值
2、以吸光度OD值為縱(zong)坐標（Y），相應的待測物(wu)質標準品濃度為(wei)橫坐(zuo)標（X），做得(de)相(xiang)應的曲(qu)線，樣(yang)品(pin)的(de)待測物(wu)質含(han)量(liang)可(ke)根(gen)據(ju)其OD值由標準曲線換(huan)算(suan)出相(xiang)應的濃(nong)度。

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