小(xiao)鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao)_復蘇的(de)

　　細胞(bao)作為生命(ming)組成(cheng)的(de)zui小(xiao)單元，研究(jiu)其(qi)相關(guan)的(de)生物行(xing)為及其(qi)規律與(yu)本(ben)質，對於(yu)揭(jie)示生命(ming)的(de)奧(ao)秘，探(tan)索(suo)疾(ji)病(bing)的(de)機(ji)理與(yu)治療(liao)手(shou)段(duan)，提(ti)高人類的(de)生存(cun)壽(shou)命(ming)與(yu)質量(liang)，都有著(zhe)重(zhong)要的(de)意義。對細胞(bao)的(de)研(yan)究(jiu)是(shi)壹個復(fu)雜的(de)工(gong)程，細胞(bao)在人體(ti)內處於復雜的(de)微(wei)環(huan)境(jing)之(zhi)中(zhong)，包(bao)括(kuo)溫(wen)度(du)、氧(yang)氣(qi)濃(nong)度(du)、生物因子(zi)濃(nong)度(du)、機(ji)械(xie)作(zuo)用、細胞(bao)間相互(hu)作(zuo)用、細胞(bao)基質間相互(hu)作(zuo)用等(deng)，同(tong)時(shi)，細胞(bao)體積微(wei)小(xiao)、種類多(duo)樣，在細胞(bao)水(shui)平(ping)進行細胞(bao)識別、代(dai)謝(xie)物(wu)檢測(ce)、內部(bu)組分(fen)分(fen)析、細胞(bao)結構與(yu)功能表(biao)征、細胞(bao)間相互(hu)作(zuo)用分(fen)析等(deng)工(gong)作(zuo)也都有著(zhe)很(hen)大的(de)難度(du)。小(xiao)鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao)，上海乾(qian)思生物公(gong)司細胞(bao)近3000種，來(lai)源(yuan)於(yu)美國ATCC,細胞(bao)都是(shi)經過嚴(yan)格(ge)質(zhi)量(liang)控制(zhi)，在中國大陸努(nu)力(li)搭建(jian)正(zheng)牌(pai)細胞(bao)與(yu)國內廣大科(ke)研人員(yuan)之間(jian)的(de)溝(gou)通橋梁(liang)。為您提(ti)供(gong)小(xiao)鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao)外，還(hai)有更多(duo)相關(guan)實(shi)驗(yan)產品，標(biao)準品，細胞(bao)株(zhu)和(he)實(shi)驗(yan)技(ji)術(shu)服(fu)務(wu)等(deng)等(deng)前期(qi)後續(xu)服(fu)務(wu)。

　　1. 小鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基的(de)保(bao)存(cun)是(shi)冷(leng)藏(zang)好？還(hai)是(shi)冷(leng)凍(dong)好？

　　要冷(leng)藏(zang)！！因為液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基經冷(leng)凍(dong)後再經溶化時(shi)，其(qi)溶液(ye)的(de)pH值(zhi)會發生改變(bian)，溶(rong)液(ye)往往變堿，某(mou)些(xie)成(cheng)分(fen)溶解也會受到影(ying)響(xiang)對細胞(bao)生長不利(li)。故(gu)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基壹定要存(cun)放(fang)在冷(leng)藏(zang)箱(xiang)中，通常液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基在冷(leng)藏(zang)條(tiao)件(jian)下(xia)可存(cun)放(fang)6個月 ~ 壹(yi)年(nian)。

　　2.小鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao) 液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基中谷氨酰胺的(de)作(zuo)用，及(ji)使用(yong)方(fang)法(fa)。

　　幾乎所(suo)有的(de)細胞(bao)對谷(gu)氨(an)酰胺有較高的(de)要求(qiu)，細胞(bao)需(xu)要谷(gu)氨酰胺合(he)成(cheng)蛋白(bai)質，在缺(que)少(shao)谷(gu)氨酰胺時(shi)，細胞(bao)生長不良(liang)而死亡。所(suo)以，各種培(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)都含(han)有較大量(liang)的(de)谷(gu)氨酰胺。谷(gu)氨(an)酰胺在溶液(ye)中(zhong)很(hen)不穩(wen)定，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍(dong)保(bao)存(cun)，用(yong)前加入培(pei)養基中。加有谷氨(an)酰胺的(de)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基4 ?C 冰箱(xiang)儲存(cun)兩(liang)周(zhou)以上時(shi)，應(ying)重(zhong)新加入原(yuan)來量(liang)的(de)谷(gu)氨酰胺。基礎醫(yi)學(xue)細胞(bao)中心在其服(fu)務(wu)項(xiang)目(mu)中(zhong)配(pei)制(zhi)分(fen)裝了高濃(nong)度(du)（100倍）的(de)谷(gu)氨酰胺溶(rong)液(ye)（1ml/支）。每支1ml的(de)谷(gu)氨酰胺加到99ml*培養(yang)基中，其終(zhong)濃(nong)度(du)為2mM/ml培養(yang)基。包裝為粉紅(hong)色，-24?C保存(cun)。

　　3. 小鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao) 培養用(yong)液(ye)pH對細胞(bao)生長的(de)影(ying)響(xiang)

　　由於，大多數細胞(bao)適宜pH為7.2~7.4，偏(pian)離此範(fan)圍對細胞(bao)將產生有害的(de)影(ying)響(xiang)。各種細胞(bao)對pH的(de)要求(qiu)也不*相同(tong)，原(yuan)代培養細胞(bao)壹般對pH變(bian)動(dong)耐受差(cha)，無限(xian)細胞(bao)系(xi)耐受力(li)強(qiang)。

　　但總(zong)體(ti)來(lai)說(shuo)，細胞(bao)耐酸性比(bi)耐堿性強(qiang)壹(yi)些(xie)，偏(pian)酸環(huan)境(jing)中(zhong)更(geng)利(li)於(yu)細胞(bao)生長。因此，我(wo)們(men)在配制(zhi)培養(yang)用液(ye)時(shi)，可(ke)把液(ye)體(ti)的(de)pH稍(shao)微(wei)調(tiao)得(de)偏(pian)酸壹(yi)些(xie)。液(ye)體(ti)在經過0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜過濾(lv)時(shi)，溶(rong)液(ye)的(de)pH還(hai)會向上(shang)浮動0.2左(zuo)右(you)。

　　4.小鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao) 細胞(bao)傳代消(xiao)化時(shi)所(suo)用(yong)胰(yi)酶(mei)濃(nong)度(du)越高越好嗎？

　　不見得(de)！因為胰蛋白(bai)酶溶(rong)液(ye)的(de)消(xiao)化能力(li)是(shi)和(he)溶(rong)液(ye)的(de)pH、溫(wen)度(du)、胰酶(mei)濃(nong)度(du)及(ji)溶(rong)液(ye)中(zhong)是(shi)否(fou)含(han)有Ca++, Mg++離子(zi)和(he)血清等(deng)因素(su)有關(guan)。通常情況下(xia)，pH 8.0 , 溫(wen)度(du) 37 oC 其作(zuo)用能力(li)zui強(qiang)。另外，鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)及血清均能大大降低其(qi)消(xiao)化能力(li)。我(wo)們(men)每次(ci)進行傳(chuan)代(dai)消(xiao)化前，壹(yi)定要用(yong)D-Hanks液(ye)或(huo)PBS液(ye)反(fan)復沖(chong)洗細胞(bao)培養瓶(ping)，以便(bian)於將(jiang)含(han)血清的(de)培(pei)養基沖洗幹(gan)凈，這樣就能大大提(ti)高消(xiao)化液(ye)的(de)消(xiao)化能力(li)。本(ben)中心通常使用(yong)的(de)消(xiao)化液(ye)濃(nong)度(du)為：

　　（1）０.０５％胰蛋白(bai)酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；

　　（2）０.２５％胰蛋白(bai)酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。

　　（3）0.25% 胰蛋白(bai)酶

　　溶液(ye)ｐＨ８.０～９.０；使用(yong)Ｄ－Ｈａｎｋ液(ye)配(pei)制(zhi)。

　　多數細胞(bao)傳代消(xiao)化可使用(yong)０.０５％胰蛋白(bai)酶＋０.０２％ＥＤＴＡ這(zhe)種消(xiao)化液(ye)。

　　購(gou)買上(shang)海乾思生物細胞(bao)註意事項（乾思生物）發(fa)布(bu)

　　壹、客戶(hu)收到細胞(bao)先(xian)不開(kai)蓋(gai)，放(fang)在培養箱(xiang)靜置若幹小時(shi)後（看(kan)細胞(bao)密度而定）在倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞(bao)生長情況，並(bing)對細胞(bao)進行不(bu)同(tong)倍數拍照(zhao)（建(jian)議受收細胞(bao)時(shi)的(de)培(pei)養基拍壹(yi)張(zhang)照片，觀察(cha)培(pei)養基的(de)顏(yan)色和(he)是(shi)否(fou)有漏液(ye)情(qing)況，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)拍細胞(bao)100X，200X各壹張(zhang)），排除細胞(bao)本(ben)身(shen)汙(wu)染的(de)情(qing)況；

　　收到細胞(bao)未開(kai)封(feng)，出(chu)現(xian)汙(wu)染狀(zhuang)況我(wo)們(men)負(fu)責免費發(fa)送壹(yi)株(zhu)細胞(bao)。

　　二、如(ru)為貼壁(bi)細胞(bao)，請(qing)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞(bao)密度：

　　1. 未超過80%匯合(he)度時(shi)，用(yong)75%酒(jiu)精(jing)（建議(yi)配(pei)置75%酒(jiu)精(jing)的(de)水(shui)也是滅(mie)菌(jun)超純水(shui)，噴(pen)灑整(zheng)個瓶(ping)消(xiao)毒後放(fang)到超菌臺(tai)內，嚴(yan)格(ge)無菌(jun)操作；然(ran)後打(da)開(kai)蓋(gai)子(zi)，先(xian)把培養(yang)基吸出10ml左右(you)，放在離心管裏(li)，然(ran)後瓶(ping)口(kou)過火（嚴(yan)禁直(zhi)接(jie)傾倒(dao)），這樣可以保證不(bu)汙(wu)染，再用10ml的(de)移(yi)液(ye)管(guan)，將(jiang)剩(sheng)余(yu)的(de)培(pei)液(ye)全(quan)部(bu)吸出(chu)，放(fang)於離(li)心管中，培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)只(zhi)剩余(yu)10ml左(zuo)右(you)培液(ye)就可(ke)以了。培(pei)養16hr(時(shi)間(jian)根據細胞(bao)生長情況調(tiao)整(zheng)）之後，傳(chuan)代(dai)或(huo)者(zhe)凍(dong)存(cun)。

　　2. 超過80%匯合(he)度時(shi)，請(qing)按細胞(bao)培養條(tiao)件傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。具(ju)體步(bu)驟(zhou)如(ru)下(xia)：

　　1) 棄去培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong)3ml PBS（不(bu)含(han)鈣，鎂(mei)離子(zi)）洗1-2次(ci)；

　　2) 加1ml消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)T25培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)轉(zhuan)放(fang)於37度培(pei)養箱(xiang)1-3分(fen)鐘預熱(re)，然(ran)後又(you)將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)倒(dao)轉(zhuan)大約30秒後，在倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞(bao)消(xiao)化情況，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓(yuan)分(fen)散，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)培養(yang)瓶(ping)，細胞(bao)隨即脫落下(xia)來；

　　3) 加入6-8ml*培(pei)養基，吸出，分(fen)到新的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，按要求(qiu)分(fen)瓶。

　　三、如(ru)為懸浮細胞(bao)，吸出培(pei)養液(ye)，1000轉(zhuan)/分(fen)鐘離心5分(fen)鐘，吸出(chu)上清，管底細胞(bao)用新鮮(xian)培(pei)養(yang)基懸浮細胞(bao)後移(yi)回(hui)培(pei)養(yang)瓶。

　　註意：換液(ye)時(shi)壹(yi)半用我(wo)們(men)的(de)培(pei)養基，壹半用妳們(men)的(de)，以免細胞(bao)不適應(ying)而造成(cheng)生長不好。

　　四(si)、細胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，可(ke)重發的(de)情(qing)況有哪些(xie)？判定標(biao)準是什麽(me)？

　　（1）細胞(bao)運(yun)輸(shu)途(tu)中(zhong)遭(zao)遇的(de)各(ge)種問(wen)題(ti)，細胞(bao)丟失、破(po)損、漏液(ye)等(deng)，重(zhong)發；

　　（2）凍存(cun)的(de)細胞(bao)復蘇後，絕(jue)大多數細胞(bao)未存(cun)活(huo)，重發(fa)；

　　（3）存(cun)活(huo)的(de)細胞(bao)靜置24小(xiao)時(shi)後，絕(jue)大多數細胞(bao)未存(cun)活(huo)，重發(fa)；

　　（4）凍存(cun)的(de)細胞(bao)復蘇後或(huo)存(cun)活(huo)的(de)細胞(bao)靜置4小(xiao)時(shi)後並(bing)且(qie)未開(kai)封(feng)，出(chu)現(xian)汙(wu)染，重發(fa)；

　　（5）視(shi)具體(ti)情況而定。

　　五、細胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，不(bu)予以重發(fa)的(de)情(qing)況有哪些(xie)？

　　（1）客戶造(zao)成(cheng)細胞(bao)汙(wu)染，不重(zhong)發；

　　（2）客戶不(bu)正(zheng)確操作致(zhi)細胞(bao)狀(zhuang)態不好，不重(zhong)發(fa)；

　　（3）細胞(bao)狀(zhuang)態不好，未提(ti)供(gong)細胞(bao)培養前3天照片的(de)，不(bu)重發(fa)；

　　（4）細胞(bao)培養時(shi)經(jing)其它處理的(de)，不(bu)重發(fa)；

　　（5）細胞(bao)收到2天內，未(wei)告(gao)知，不重(zhong)發(fa)；

　　（6）視(shi)具體(ti)情況而定。

　　六、售後服(fu)務(wu)政(zheng)策(ce)

　　Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等(deng)品牌(pai)；部(bu)分(fen)產品現(xian)貨(huo)，超低比(bi)價，另常備  Trizol  DMSO  lipo2000    lipo3000  SC-2004  SC-2005常備現(xian)貨(huo) ；貨(huo)期短(duan)，價格(ge)優(you)，售(shou)後齊(qi)全(quan)。

　　細胞(bao)汙(wu)染問(wen)題(ti)，請(qing)在收到產品48小(xiao)時(shi)內，給我(wo)們(men)提(ti)出(chu)真實(shi)的(de)實(shi)驗(yan)結果(guo)；細胞(bao)活性問(wen)題(ti)，請(qing)在收到產品7天內給我(wo)們(men)提(ti)出(chu)真實(shi)的(de)實(shi)驗(yan)結果(guo)，我(wo)們(men)調(tiao)查(zha)核(he)實(shi)後予免費調(tiao)換，不收取(qu)任(ren)何(he)費(fei)用(yong)。

　　需(xu)要客(ke)戶提(ti)供(gong)小(xiao)鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao)細胞(bao)培養說(shuo)明、細胞(bao)操作處理方(fang)法(fa)、細胞(bao)質量(liang)問(wen)題(ti)反(fan)饋表(biao)。

　　如(ru)用(yong)戶(hu)收到細胞(bao)8-30天之內，因處理不當造(zao)成細胞(bao)死亡或(huo)汙(wu)染，我(wo)公司將(jiang)優惠(hui)價重新提(ti)供(gong)壹(yi)株(zhu)原(yuan)細胞(bao)

　　小鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao)質量(liang)可(ke)靠(kao)，售後有保障

　　★我(wo)庫細胞(bao)近3000種，來(lai)源(yuan)於(yu)美國ATCC,細胞(bao)都是(shi)經過嚴(yan)格(ge)質(zhi)量(liang)控制(zhi)。

　　凍存(cun)細胞(bao)時(shi)間(jian)為5-7個工(gong)作(zuo)日(ri)，活細胞(bao)為7-15個工(gong)作(zuo)日(ri)。

　　★由於細胞(bao)庫現(xian)有細胞(bao)類目(mu)多(duo)，為了不(bu)出現(xian)混亂錯誤(wu)，需(xu)要了解(jie)小鼠小腸(chang)黏(nian)膜上(shang)皮(pi)細胞(bao)相關(guan)細胞(bao)價格(ge)及(ji)詳(xiang)細資(zi)料(liao)請(qing)老(lao)師，對您(nin)造(zao)成(cheng)的(de)不(bu)便(bian)還(hai)請(qing)見(jian)諒！

（編(bian)輯(ji)：tanxi）