小鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao)_選購(gou)指南

　　細胞(bao)作為(wei)生(sheng)命(ming)組成(cheng)的(de)zui小(xiao)單(dan)元(yuan)，研(yan)究(jiu)其相(xiang)關(guan)的(de)生(sheng)物(wu)行(xing)為(wei)及(ji)其規律與本(ben)質(zhi)，對(dui)於(yu)揭示(shi)生(sheng)命(ming)的(de)奧(ao)秘(mi)，探(tan)索疾病(bing)的(de)機理(li)與(yu)治(zhi)療(liao)手(shou)段，提高人類的(de)生(sheng)存壽(shou)命(ming)與(yu)質(zhi)量，都有著(zhe)重(zhong)要的(de)意義(yi)。對(dui)細胞(bao)的(de)研(yan)究(jiu)是壹個復(fu)雜的(de)工(gong)程(cheng)，細胞(bao)在人體內處於(yu)復(fu)雜的(de)微環境(jing)之中，包括(kuo)溫度、氧氣(qi)濃度、生(sheng)物(wu)因(yin)子(zi)濃(nong)度、機械作用(yong)、細胞(bao)間相(xiang)互作用(yong)、細胞(bao)基(ji)質(zhi)間相(xiang)互作用(yong)等，同時，細胞(bao)體積(ji)微小、種類多(duo)樣，在(zai)細胞(bao)水(shui)平進行細胞(bao)識別(bie)、代(dai)謝(xie)物(wu)檢測(ce)、內部(bu)組分分析(xi)、細胞(bao)結構(gou)與(yu)功(gong)能表征、細胞(bao)間相(xiang)互作用(yong)分析(xi)等工作也都有著(zhe)很大(da)的(de)難(nan)度。小鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao)，上海(hai)乾(qian)思(si)生(sheng)物(wu)公(gong)司細胞(bao)近(jin)3000種(zhong)，來(lai)源於(yu)美(mei)國(guo)ATCC,細胞(bao)都是經過(guo)嚴格(ge)質(zhi)量控制(zhi)，在中國(guo)大(da)陸(lu)努力(li)搭建正(zheng)牌(pai)細胞(bao)與國(guo)內(nei)廣(guang)大(da)科(ke)研(yan)人員之間的(de)溝(gou)通橋梁。為(wei)您(nin)提供(gong)小鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao)外，還(hai)有(you)更(geng)多(duo)相(xiang)關(guan)實(shi)驗產(chan)品(pin)，標(biao)準品(pin)，細胞(bao)株和(he)實(shi)驗技(ji)術服務等等前期(qi)後(hou)續服務(wu)。

　　1. 小鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao)液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)保(bao)存是(shi)冷(leng)藏好(hao)？還(hai)是(shi)冷(leng)凍好(hao)？

　　要冷(leng)藏！！因(yin)為(wei)液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)經冷(leng)凍後(hou)再(zai)經溶化(hua)時，其溶液(ye)的(de)pH值會(hui)發(fa)生(sheng)改(gai)變，溶液(ye)往往(wang)變堿(jian)，某(mou)些成(cheng)分溶解也會(hui)受(shou)到影(ying)響對(dui)細胞(bao)生(sheng)長不(bu)利。故(gu)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)壹定要存放在冷(leng)藏箱中，通常液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)在冷(leng)藏條(tiao)件下可(ke)存放6個月(yue) ~ 壹年(nian)。

　　2.小鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao) 液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)中谷(gu)氨酰胺的(de)作用(yong)，及(ji)使用(yong)方法。

　　幾(ji)乎(hu)所(suo)有(you)的(de)細胞(bao)對(dui)谷(gu)氨酰胺有較(jiao)高(gao)的(de)要求，細胞(bao)需(xu)要谷(gu)氨酰胺合成蛋白(bai)質(zhi)，在缺少(shao)谷(gu)氨酰胺時，細胞(bao)生(sheng)長不(bu)良而死(si)亡(wang)。所(suo)以(yi)，各種(zhong)培(pei)養(yang)液中都含有較(jiao)大(da)量的(de)谷(gu)氨酰胺。谷(gu)氨酰胺在溶液(ye)中很不(bu)穩定，應置(zhi)-20 ?C冰凍(dong)保(bao)存，用(yong)前(qian)加入培(pei)養(yang)基(ji)中。加有(you)谷(gu)氨酰胺的(de)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)4 ?C 冰箱儲存兩(liang)周(zhou)以(yi)上時，應(ying)重(zhong)新(xin)加入原來(lai)量的(de)谷(gu)氨酰胺。基(ji)礎醫學細胞(bao)中心在(zai)其服務(wu)項(xiang)目中配制(zhi)分裝(zhuang)了高(gao)濃度（100倍）的(de)谷(gu)氨酰胺溶液(ye)（1ml/支）。每(mei)支(zhi)1ml的(de)谷(gu)氨酰胺加到99ml*培(pei)養(yang)基(ji)中，其終濃度為2mM/ml培(pei)養(yang)基(ji)。包裝(zhuang)為(wei)粉(fen)紅(hong)色，-24?C保(bao)存。

　　3. 小鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao) 培(pei)養(yang)用(yong)液(ye)pH對(dui)細胞(bao)生(sheng)長的(de)影(ying)響

　　由於(yu)，大多(duo)數(shu)細胞(bao)適宜(yi)pH為7.2~7.4，偏離此範(fan)圍(wei)對(dui)細胞(bao)將產生(sheng)有害(hai)的(de)影(ying)響。各種(zhong)細胞(bao)對(dui)pH的(de)要求也不(bu)*相(xiang)同，原代(dai)培(pei)養(yang)細胞(bao)壹般(ban)對(dui)pH變動(dong)耐受(shou)差，無(wu)限(xian)細胞(bao)系耐(nai)受力強。

　　但總(zong)體(ti)來(lai)說，細胞(bao)耐酸(suan)性(xing)比(bi)耐(nai)堿性強壹些，偏酸(suan)環(huan)境(jing)中更(geng)利於(yu)細胞(bao)生(sheng)長。因(yin)此，我(wo)們(men)在(zai)配(pei)制(zhi)培(pei)養(yang)用(yong)液(ye)時，可(ke)把(ba)液(ye)體(ti)的(de)pH稍(shao)微調得偏酸(suan)壹(yi)些。液(ye)體在經過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾膜過(guo)濾時，溶液(ye)的(de)pH還(hai)會(hui)向(xiang)上浮(fu)動(dong)0.2左右(you)。

　　4.小鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)消(xiao)化(hua)時所(suo)用(yong)胰酶(mei)濃(nong)度越(yue)高(gao)越(yue)好(hao)嗎？

　　不(bu)見得(de)！因(yin)為(wei)胰蛋白(bai)酶(mei)溶液(ye)的(de)消(xiao)化(hua)能力是(shi)和溶液(ye)的(de)pH、溫(wen)度、胰酶(mei)濃(nong)度及溶液(ye)中是否(fou)含有Ca++, Mg++離(li)子(zi)和(he)血清等因(yin)素有關(guan)。通常情況(kuang)下(xia)，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用(yong)能力zui強(qiang)。另(ling)外，鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)及(ji)血清均(jun)能大大(da)降低其消(xiao)化(hua)能力。我(wo)們(men)每(mei)次(ci)進行傳(chuan)代(dai)消(xiao)化(hua)前，壹(yi)定要用(yong)D-Hanks液(ye)或PBS液反復(fu)沖(chong)洗(xi)細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶，以(yi)便(bian)於(yu)將含血清的(de)培(pei)養(yang)基(ji)沖(chong)洗(xi)幹(gan)凈(jing)，這(zhe)樣就(jiu)能大大(da)提高消(xiao)化(hua)液的(de)消(xiao)化(hua)能力。本(ben)中心通常使用(yong)的(de)消(xiao)化(hua)液濃(nong)度為：

　　（1）０.０５％胰蛋白(bai)酶(mei)＋０.０２％ＥＤＴＡ；

　　（2）０.２５％胰蛋白(bai)酶(mei)＋０.０３％ＥＤＴＡ。

　　（3）0.25% 胰蛋白(bai)酶(mei)

　　溶液(ye)ｐＨ８.０～９.０；使用(yong)Ｄ－Ｈａｎｋ液(ye)配制(zhi)。

　　多(duo)數(shu)細胞(bao)傳(chuan)代(dai)消(xiao)化(hua)可使(shi)用(yong)０.０５％胰蛋白(bai)酶(mei)＋０.０２％ＥＤＴＡ這(zhe)種(zhong)消(xiao)化(hua)液。

　　購買(mai)上海(hai)乾(qian)思(si)生(sheng)物(wu)細胞(bao)註(zhu)意事(shi)項(xiang)（乾(qian)思(si)生(sheng)物(wu)）發(fa)布(bu)

　　壹、客(ke)戶收(shou)到細胞(bao)先(xian)不(bu)開蓋(gai)，放在培(pei)養(yang)箱靜(jing)置(zhi)若幹(gan)小(xiao)時後(hou)（看細胞(bao)密度而定）在倒(dao)置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)細胞(bao)生(sheng)長情(qing)況(kuang)，並(bing)對(dui)細胞(bao)進行不(bu)同倍數(shu)拍(pai)照(zhao)（建(jian)議受(shou)收(shou)細胞(bao)時的(de)培(pei)養(yang)基(ji)拍(pai)壹(yi)張照(zhao)片(pian)，觀察(cha)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)顏色和是否(fou)有(you)漏(lou)液情(qing)況(kuang)，顯(xian)微鏡下拍(pai)細胞(bao)100X，200X各壹(yi)張），排(pai)除(chu)細胞(bao)本身(shen)汙染的(de)情(qing)況(kuang)；

　　收(shou)到細胞(bao)未開封(feng)，出現(xian)汙染狀(zhuang)況(kuang)我(wo)們(men)負(fu)責免(mian)費發(fa)送壹株(zhu)細胞(bao)。

　　二、如為(wei)貼(tie)壁(bi)細胞(bao)，請在(zai)顯微鏡下觀察(cha)細胞(bao)密度：

　　1. 未超過(guo)80%匯合度時，用(yong)75%酒(jiu)精(jing)（建議配(pei)置(zhi)75%酒精(jing)的(de)水(shui)也是(shi)滅(mie)菌(jun)超純水(shui)，噴灑整個瓶消(xiao)毒後(hou)放到超(chao)菌臺內(nei)，嚴格(ge)無(wu)菌操作；然(ran)後(hou)打(da)開(kai)蓋子(zi)，先(xian)把(ba)培(pei)養(yang)基(ji)吸(xi)出10ml左(zuo)右(you)，放在離心(xin)管(guan)裏，然後(hou)瓶口(kou)過(guo)火（嚴禁直接傾倒(dao)），這(zhe)樣可(ke)以(yi)保(bao)證(zheng)不(bu)汙染，再(zai)用(yong)10ml的(de)移(yi)液(ye)管(guan)，將剩余(yu)的(de)培(pei)液(ye)全(quan)部(bu)吸(xi)出，放於(yu)離心(xin)管(guan)中，培(pei)養(yang)瓶中只剩余(yu)10ml左(zuo)右(you)培(pei)液(ye)就(jiu)可以(yi)了。培(pei)養(yang)16hr(時間(jian)根據細胞(bao)生(sheng)長情(qing)況(kuang)調(tiao)整）之後，傳(chuan)代(dai)或(huo)者凍存。

　　2. 超過(guo)80%匯合度時，請(qing)按細胞(bao)培(pei)養(yang)條件傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。具體(ti)步(bu)驟(zhou)如(ru)下(xia)：

　　1) 棄(qi)去培(pei)養(yang)液，用(yong)3ml PBS（不(bu)含鈣，鎂(mei)離(li)子(zi)）洗(xi)1-2次(ci)；

　　2) 加1ml消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)T25培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)轉(zhuan)放於(yu)37度培(pei)養(yang)箱1-3分鐘預(yu)熱，然(ran)後(hou)又(you)將培(pei)養(yang)瓶倒(dao)轉(zhuan)大(da)約(yue)30秒後，在(zai)倒(dao)置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分變圓分散(san)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)培(pei)養(yang)瓶，細胞(bao)隨即(ji)脫落下(xia)來(lai)；

　　3) 加入6-8ml*培(pei)養(yang)基(ji)，吸(xi)出，分到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶中，按要求分瓶。

　　三、如為(wei)懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)，吸(xi)出培(pei)養(yang)液，1000轉(zhuan)/分鐘離心(xin)5分鐘，吸(xi)出上清，管(guan)底(di)細胞(bao)用(yong)新(xin)鮮培(pei)養(yang)基(ji)懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)後移(yi)回培(pei)養(yang)瓶。

　　註(zhu)意：換(huan)液(ye)時壹(yi)半用(yong)我(wo)們(men)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，壹半(ban)用(yong)妳(ni)們的(de)，以(yi)免(mian)細胞(bao)不(bu)適應(ying)而造(zao)成(cheng)生(sheng)長不(bu)好(hao)。

　　四、細胞(bao)出現(xian)問(wen)題，可重(zhong)發(fa)的(de)情(qing)況(kuang)有(you)哪(na)些？判(pan)定標(biao)準是(shi)什(shen)麽？

　　（1）細胞(bao)運輸途(tu)中遭(zao)遇(yu)的(de)各(ge)種(zhong)問(wen)題，細胞(bao)丟(diu)失、破(po)損、漏(lou)液(ye)等，重(zhong)發(fa)；

　　（2）凍存的(de)細胞(bao)復(fu)蘇後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細胞(bao)未存活(huo)，重(zhong)發(fa)；

　　（3）存活(huo)的(de)細胞(bao)靜(jing)置(zhi)24小時後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細胞(bao)未存活(huo)，重(zhong)發(fa)；

　　（4）凍存的(de)細胞(bao)復(fu)蘇後(hou)或(huo)存活(huo)的(de)細胞(bao)靜(jing)置(zhi)4小時後(hou)並(bing)且(qie)未開封(feng)，出現(xian)汙染，重(zhong)發(fa)；

　　（5）視(shi)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)而定。

　　五(wu)、細胞(bao)出現(xian)問(wen)題，不(bu)予以(yi)重(zhong)發(fa)的(de)情(qing)況(kuang)有(you)哪(na)些？

　　（1）客(ke)戶造(zao)成(cheng)細胞(bao)汙染，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（2）客(ke)戶不(bu)正(zheng)確(que)操作致(zhi)細胞(bao)狀(zhuang)態不(bu)好(hao)，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（3）細胞(bao)狀(zhuang)態不(bu)好(hao)，未提供(gong)細胞(bao)培(pei)養(yang)前3天(tian)照片(pian)的(de)，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（4）細胞(bao)培(pei)養(yang)時經其它處理(li)的(de)，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（5）細胞(bao)收(shou)到2天(tian)內，未告知(zhi)，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（6）視(shi)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)而定。

　　六、售(shou)後服務(wu)政(zheng)策(ce)

　　Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品(pin)牌(pai)；部(bu)分產(chan)品(pin)現(xian)貨，超低比(bi)價，另(ling)常備  Trizol  DMSO  lipo2000    lipo3000  SC-2004  SC-2005常備現(xian)貨 ；貨期短(duan)，價格(ge)優(you)，售(shou)後齊全(quan)。

　　細胞(bao)汙染問題，請在(zai)收(shou)到產(chan)品(pin)48小(xiao)時內(nei)，給我(wo)們(men)提出真(zhen)實(shi)的(de)實(shi)驗結(jie)果(guo)；細胞(bao)活(huo)性問(wen)題，請在(zai)收(shou)到產(chan)品(pin)7天(tian)內(nei)給我(wo)們(men)提出真(zhen)實(shi)的(de)實(shi)驗結(jie)果(guo)，我(wo)們(men)調(tiao)查(zha)核(he)實(shi)後予免(mian)費調(tiao)換(huan)，不(bu)收(shou)取任何(he)費用(yong)。

　　需(xu)要客(ke)戶提供(gong)小鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao)細胞(bao)培(pei)養(yang)說明、細胞(bao)操作處理(li)方法、細胞(bao)質(zhi)量問題反饋(kui)表。

　　如用(yong)戶收(shou)到細胞(bao)8-30天之內，因(yin)處理(li)不(bu)當造(zao)成(cheng)細胞(bao)死(si)亡(wang)或(huo)汙染，我(wo)公(gong)司將優(you)惠(hui)價重(zhong)新(xin)提供(gong)壹株原(yuan)細胞(bao)

　　小鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao)質(zhi)量可靠(kao)，售(shou)後有保(bao)障(zhang)

　　★我(wo)庫(ku)細胞(bao)近(jin)3000種(zhong)，來(lai)源於(yu)美(mei)國(guo)ATCC,細胞(bao)都是經過(guo)嚴格(ge)質(zhi)量控制(zhi)。

　　凍存細胞(bao)時間(jian)為5-7個工作日，活(huo)細胞(bao)為7-15個工作日。

　　★由於(yu)細胞(bao)庫(ku)現(xian)有(you)細胞(bao)類目(mu)多(duo)，為(wei)了不(bu)出現(xian)混(hun)亂錯(cuo)誤，需(xu)要了解小(xiao)鼠胰腺導管上皮(pi)細胞(bao)相(xiang)關(guan)細胞(bao)價格(ge)及(ji)詳細資料(liao)請(qing)老師(shi)，對(dui)您(nin)造(zao)成(cheng)的(de)不(bu)便還(hai)請(qing)見(jian)諒！

（編(bian)輯(ji)：tanxi）