細(xi)胞(bao)培(pei)養時應註意的事項(xiang)

　　1、實(shi)驗(yan)進(jin)行前(qian)，無菌室(shi)及無(wu)菌操(cao)作(zuo)臺(tai)（laminarflow）以(yi)紫(zi)外(wai)燈(deng)照(zhao)射(she)30-60分鐘滅菌，以(yi)70%ethanol擦(ca)拭(shi)無(wu)菌操(cao)作(zuo)擡(tai)面，並開(kai)啟(qi)無(wu)菌操(cao)作(zuo)臺(tai)風(feng)扇運(yun)轉10分鐘後(hou)，才(cai)開(kai)始實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)。每(mei)次操(cao)作(zuo)只(zhi)處(chu)理(li)壹株細(xi)胞(bao)株，且即(ji)使(shi)培(pei)養基相(xiang)同亦不共享培(pei)養基，以(yi)避(bi)免失誤(wu)混淆(xiao)或(huo)細(xi)胞(bao)間(jian)汙染。實(shi)驗(yan)完畢(bi)後(hou)，將(jiang)實(shi)驗(yan)物(wu)品(pin)帶出(chu)工(gong)作(zuo)臺(tai)，以(yi)70%ethanol擦(ca)拭(shi)無(wu)菌操(cao)作(zuo)擡(tai)面。操(cao)作(zuo)間(jian)隔(ge)應讓無菌操(cao)作(zuo)臺(tai)運(yun)轉10分鐘以(yi)上(shang)後(hou)，再(zai)進(jin)行下(xia)壹個細(xi)胞(bao)株之操(cao)作(zuo)。

　　2、無(wu)菌操(cao)作(zuo)工(gong)作(zuo)區域(yu)應保持(chi)清潔(jie)及寬(kuan)敞(chang)，必要(yao)物(wu)品(pin)，例如(ru)試管(guan)架、吸(xi)管(guan)吸取(qu)器或(huo)吸管(guan)盒(he)等(deng)可(ke)以(yi)暫(zan)時(shi)放(fang)置，其(qi)它實(shi)驗(yan)用品(pin)用完(wan)即(ji)應移出(chu)，以(yi)利(li)於(yu)氣流(liu)之流通(tong)。實(shi)驗(yan)用品(pin)以70%ethanol擦(ca)拭(shi)後(hou)才(cai)帶入無菌操(cao)作(zuo)臺(tai)內。實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)應在擡(tai)面之中央無菌區域(yu)，勿在(zai)邊(bian)緣(yuan)之非(fei)無菌區域(yu)操(cao)作(zuo)。

　　3、小(xiao)心(xin)取(qu)用無菌之實(shi)驗(yan)物(wu)品(pin)，避(bi)免造(zao)成(cheng)汙(wu)染(ran)。勿碰(peng)觸吸(xi)管(guan)尖頭部(bu)或(huo)是(shi)容(rong)器(qi)瓶(ping)口(kou)，亦不要(yao)在(zai)打開(kai)之容(rong)器(qi)正上(shang)方操(cao)作(zuo)實(shi)驗(yan)。容(rong)器(qi)打開(kai)後(hou)，以(yi)手(shou)夾(jia)住瓶(ping)蓋(gai)並握(wo)住瓶(ping)身(shen)，傾斜約(yue)45°角(jiao)取用(yong)，盡量(liang)勿將(jiang)瓶(ping)蓋(gai)蓋(gai)口朝(chao)上放(fang)置(zhi)桌面。

　　4、工(gong)作(zuo)人(ren)員(yuan)應註意自身之安全，須(xu)穿戴實(shi)驗(yan)衣及手(shou)套(tao)後(hou)才(cai)進(jin)行實(shi)驗(yan)。對於(yu)來自人(ren)類(lei)或(huo)是(shi)病毒(du)感(gan)染(ran)之細(xi)胞(bao)株應特別小(xiao)心(xin)操(cao)作(zuo)，並選(xuan)擇(ze)適當(dang)等(deng)級(ji)之無菌操(cao)作(zuo)臺(tai)（至少(shao)ClassⅡ）。操(cao)作(zuo)過程(cheng)中(zhong)，應避(bi)免引(yin)起(qi)aerosol之產生(sheng)，小(xiao)心(xin)毒(du)性(xing)藥(yao)品(pin)，例如(ru)DMSO及TPA等(deng)，並避(bi)免尖銳針頭(tou)之傷害(hai)等(deng)。

　　5、定(ding)期(qi)檢測(ce)下(xia)列(lie)項(xiang)目(mu)：5.1CO2鋼(gang)瓶(ping)之CO2壓(ya)力5.2CO2培(pei)養箱之CO2濃度、溫(wen)度、及水(shui)盤(pan)是(shi)否(fou)有(you)汙(wu)染(ran)（水(shui)盤(pan)的水(shui)用無菌水(shui)，每(mei)周更(geng)換(huan)）。5.3.無菌操(cao)作(zuo)臺(tai)內之airflow壓(ya)力，定(ding)期(qi)更(geng)換(huan)紫(zi)外(wai)線燈(deng)管(guan)及HEPA過濾(lv)膜(mo)，預(yu)濾(lv)網（300小(xiao)時(shi)/預(yu)濾(lv)網，3000小(xiao)時(shi)/HEPA）。6.水(shui)槽(cao)可添加(jia)消(xiao)毒(du)劑(ji)（Zephrin1:750），定(ding)期(qi)更(geng)換(huan)水槽(cao)的水

　　6、粉(fen)末培(pei)養基配制好(hao)後(hou)（加(jia)了(le)血(xue)清），壹般在(zai)4度盡(jin)量(liang)不要(yao)超(chao)過1個月(yue)，如(ru)在-20度存放(fang)時(shi)間(jian)可(ke)長壹些，但(dan)也(ye)不要(yao)超(chao)過3-4個月(yue)，可(ke)能(neng)對於永生(sheng)化(hua)細(xi)胞(bao)株來說(shuo)要(yao)求不是(shi)太高，細(xi)胞(bao)嬌弱(ruo)，放(fang)置(zhi)時(shi)間(jian)不宜過長。

　　7、開(kai)紫(zi)外(wai)線照(zhao)射(she)臺(tai)的(de)時候，就將(jiang)培(pei)養基、酶(mei)、DHANKS液(ye)那(na)到(dao)室(shi)外(wai)讓它自然升溫。這(zhe)樣(yang)40分鐘後(hou)，溫(wen)度也(ye)升上來了(le)。有(you)很(hen)多(duo)人(ren)將(jiang)他放(fang)到(dao)37度水(shui)浴(yu)鍋裏(li)加(jia)熱(re)。壹定(ding)要(yao)註(zhu)意水浴(yu)鍋的(de)衛(wei)生(sheng)，有(you)的(de)常(chang)年不清洗，裏(li)面很(hen)臟，容(rong)易(yi)在外(wai)面瓶(ping)身(shen)上吸附(fu)大(da)量(liang)細(xi)菌。因(yin)此用它(ta)的也(ye)壹定(ding)要(yao)勤(qin)換(huan)水。從水浴(yu)鍋拿(na)出(chu)後(hou)，找(zhao)個毛(mao)巾(jin)擦(ca)幹上(shang)面的(de)水。