上海乾(qian)思生物1Click Chemistry品(pin)牌代(dai)理(li)專業經(jing)營進(jin)口胎(tai)牛(niu)血清(qing)、細胞(bao)因子(zi)、ELISA試(shi)劑盒、細胞(bao)、抗(kang)體、生物試(shi)劑、耗(hao)材(cai)、培(pei)養基(ji)、壹(yi)抗(kang)、二(er)抗(kang)、其產品吸(xi)附(fu)均勻，吸(xi)附(fu)性(xing)好(hao)，空白值(zhi)低，孔底(di)透明(ming)度(du)高，代(dai)做ELISA實驗(yan)等(deng)。完善(shan)的庫存及(ji)供(gong)應(ying)體(ti)系以及(ji)高(gao)效(xiao)穩(wen)定的純化(hua)技(ji)術，保(bao)證產品均(jun)能(neng)現(xian)貨供(gong)應(ying)和(he)產品質(zhi)量(liang)的穩(wen)定性(xing)。

1Click Chemistry

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怎(zen)樣查到壹(yi)個(ge)特定細胞(bao)株的相關知(zhi)識(shi)和(he)培(pei)養條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了絕大多數(shu)細胞(bao)的詳細資(zi)料(liao)。打(da)開ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入(ru)細胞(bao)名稱(cheng)就(jiu)可以(yi)搜(sou)索(suo)ATCC的細胞(bao)數據(ju)庫(ku)。數(shu)據(ju)庫(ku)中(zhong)有(you)每(mei)壹(yi)種(zhong)細胞(bao)的詳細描述(shu)，包(bao)括細胞(bao)的來源，培(pei)養和(he)凍(dong)存條件，以及(ji)相(xiang)關文(wen)獻(xian)等(deng)資(zi)料(liao)。
如何(he)選用(yong)特殊(shu)細胞(bao)系培養基(ji)？
培(pei)養某(mou)類(lei)型(xing)細胞(bao)沒(mei)有(you)固(gu)定(ding)的培養條件。MEM中培養的細胞(bao)，很可能(neng)在(zai)DMEM或(huo)M199中(zhong)同樣容(rong)易(yi)生長。總之，*MEM、DMEM做貼壁(bi)細胞(bao)培養；RPMI1640做懸浮(fu)細胞(bao)培養；各(ge)種(zhong)目(mu)的無(wu)血清(qing)培(pei)養*AIMV培(pei)養基(ji)（SFM）。

測(ce)序實驗流(liu)程(cheng)：
1 收(shou)集(ji)樣品
2 相關試(shi)劑 總(zong)RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑), M-MLV(cDNA逆轉(zhuan)錄酶(mei)), RNA 純(chun)化試(shi)劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量(liang)PCR預(yu)混試(shi)劑)。
3 實(shi)驗(yan)儀器(qi) 熒光定量(liang)PCR儀; PCR儀(yi);低溫(wen)離心(xin)機。
4 總RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合成 在0.5ml的離心(xin)管中加入(ru)1µl模(mo)板總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨機引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系。混(hun)勻後(hou)70℃變(bian)性(xing)RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰(bing)上速冷(leng)1分(fen)鐘(zhong)，離心(xin)將溶液收(shou)集(ji)至管底(di)加入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系。PCR儀(yi)中(zhong)反(fan)應(ying)條件設置 37℃延伸(shen)60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終(zhong)止(zhi)反應。合成好(hao)的cDNA置於 -20 ℃保(bao)存備(bei)用。
6 引(yin)物(wu)設計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實時定量(liang)PCR 按以(yi)下反(fan)應(ying)體系(xi)進(jin)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引(yin)物F 1 ul，下遊(you)引(yin)物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀擴增(zeng)反應(ying)條件設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環)。
8 PCR產物溶(rong)解曲(qu)線(xian)分(fen)析 將所(suo)擴增(zeng)的PCR 產物進(jin)行溶解曲(qu)線(xian)分(fen)析，單峰(feng)溶(rong)解曲(qu)線(xian)表(biao)示(shi)擴增(zeng)產物單(dan)壹(yi)，無(wu)非特異性(xing)擴增(zeng)產物。溶(rong)解曲(qu)線(xian)生成的反應(ying)程(cheng)序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意事(shi)項(xiang)：收(shou)集(ji)標本(ben)前(qian)必(bi)須(xu)清(qing)楚要(yao)檢測(ce)的成份是否(fou)足夠(gou)穩(wen)定，對(dui)收(shou)集(ji)後(hou)當(dang)天(tian)進(jin)行檢測的標本(ben)，儲(chu)存在(zai)4℃備(bei)用，如(ru)有(you)特(te)殊(shu)原因需(xu)要(yao)周期(qi)收(shou)集(ji)標本(ben)，將標本(ben)及(ji)時分(fen)裝後(hou)放(fang)在-20℃或(huo)-70℃條件下保(bao)存。避(bi)免反(fan)復(fu)凍融(rong)，標本2-8℃可保(bao)存48小時，-20℃可保(bao)存1個(ge)月(yue)，-70度(du)可保(bao)存6個(ge)月(yue)，部(bu)分(fen)標本需(xu)添(tian)加抑肽(tai)酶(mei)。我公司是國(guo)內信(xin)譽雙收(shou)的放(fang)心(xin)企業代理商，具(ju)有良好(hao)的市場信(xin)譽與口碑，專(zhuan)業的銷售(shou)和(he)技術服務(wu)團隊(dui)，歡(huan)迎廣(guang)大師生、研究機構(gou)等，洽商。

細胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，可重發的情況(kuang)有(you)哪些？判(pan)定標(biao)準(zhun)是什麽(me)？
　　（1）細胞(bao)運輸途(tu)中(zhong)遭(zao)遇的各(ge)種(zhong)問題(ti)，細胞(bao)丟失、破損、漏(lou)液等(deng)，重發；
　　（2）凍存的細胞(bao)復(fu)蘇後(hou)，絕大多數(shu)細胞(bao)未存活(huo)，重發；
　　（3）存活(huo)的細胞(bao)靜(jing)置24小時後(hou)，絕大多數(shu)細胞(bao)未存活(huo)，重發；
　　（4）凍存的細胞(bao)復(fu)蘇後(hou)或(huo)存活(huo)的細胞(bao)靜(jing)置4小時後(hou)並(bing)且未開封(feng)，出(chu)現(xian)汙染，重發；
　　（5）視具(ju)體情(qing)況(kuang)而(er)定。
細胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，不(bu)予以重發的情況(kuang)有(you)哪些？
　　（1）客(ke)戶(hu)造(zao)成細胞(bao)汙染，不(bu)重發；
　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確操作(zuo)致細胞(bao)狀態不(bu)好(hao)，不(bu)重發；
　　（3）細胞(bao)狀態不(bu)好(hao)，未提(ti)供(gong)細胞(bao)培養前(qian)3天(tian)照片的，不(bu)重發；
　　（4）細胞(bao)培養時經(jing)其它(ta)處理(li)的，不(bu)重發；
　　（5）細胞(bao)收(shou)到(dao)2天(tian)內，未(wei)告知，不(bu)重發；
　　（6）視具(ju)體情(qing)況(kuang)而(er)定。