人(ren)急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao)_ 實驗

非(fei)常讓(rang)人著(zhe)迷(mi)的實驗，其(qi)成功關鍵(jian)之(zhi)壹(yi)是選(xuan)擇可(ke)信(xin)的實驗試劑。

我(wo)司細(xi)胞(bao)近(jin)3000種(zhong)，來(lai)源(yuan)於(yu)美(mei)國ATCC,細(xi)胞(bao)都(dou)是經(jing)過嚴(yan)格(ge)質(zhi)量(liang)控(kong)制，在中(zhong)國大(da)陸(lu)努(nu)力搭建正(zheng)牌細(xi)胞(bao)與國內(nei)廣(guang)大(da)科研人員(yuan)之(zhi)間(jian)的溝通(tong)橋(qiao)梁(liang)。為(wei)您提(ti)供(gong)人(ren)急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao)外，還有更多(duo)相關實驗產品(pin)，標(biao)準品(pin)，細(xi)胞(bao)株和實驗技(ji)術(shu)服(fu)務(wu)等等前(qian)期後(hou)續(xu)服務(wu)。

人急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao)的產品(pin)介(jie)紹(shao)

人(ren)急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao)由我(wo)司*銷(xiao)售人(ren)急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao)。

人急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao)細胞(bao)株

　　Q1. 人急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao)液體(ti)培養(yang)基的保(bao)存(cun)是(shi)冷藏(zang)好(hao)？還(hai)是(shi)冷凍(dong)好？

　　要冷藏(zang)！！因(yin)為(wei)液體(ti)培養(yang)基經(jing)冷凍(dong)後(hou)再(zai)經(jing)溶化時(shi)，其(qi)溶液的pH值(zhi)會(hui)發(fa)生(sheng)改(gai)變，溶液往(wang)往變(bian)堿，某(mou)些(xie)成分(fen)溶解(jie)也會受到(dao)影響(xiang)對細胞(bao)生長(chang)不(bu)利。故(gu)液體(ti)培養(yang)基壹(yi)定要(yao)存(cun)放(fang)在冷藏(zang)箱(xiang)中(zhong)，通(tong)常液體(ti)培養(yang)基在(zai)冷藏(zang)條(tiao)件(jian)下(xia)可(ke)存(cun)放(fang)6個月 ~ 壹(yi)年。

　　Q2.人(ren)急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao) 液體(ti)培養(yang)基中(zhong)谷氨酰(xian)胺的作(zuo)用(yong)，及(ji)使用(yong)方(fang)法(fa)。

　　幾(ji)乎所(suo)有(you)的細(xi)胞(bao)對谷氨酰(xian)胺有(you)較(jiao)高(gao)的要(yao)求(qiu)，細(xi)胞(bao)需(xu)要谷氨酰(xian)胺合成蛋白(bai)質，在缺(que)少(shao)谷氨酰(xian)胺時(shi)，細(xi)胞(bao)生長(chang)不(bu)良(liang)而死亡(wang)。所以(yi)，各種(zhong)培(pei)養(yang)液中(zhong)都(dou)含(han)有(you)較(jiao)大(da)量(liang)的谷氨酰(xian)胺。谷氨酰(xian)胺在(zai)溶液中(zhong)很不(bu)穩(wen)定，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍(dong)保(bao)存(cun)，用(yong)前(qian)加(jia)入(ru)培養(yang)基中(zhong)。加(jia)有谷氨酰(xian)胺的液體(ti)培養(yang)基4 ?C 冰(bing)箱儲(chu)存(cun)兩(liang)周(zhou)以上(shang)時(shi)，應(ying)重新(xin)加(jia)入(ru)原來(lai)量的谷氨酰(xian)胺。基礎(chu)醫(yi)學(xue)細(xi)胞(bao)中(zhong)心(xin)在(zai)其(qi)服務(wu)項目(mu)中(zhong)配制(zhi)分(fen)裝了(le)高(gao)濃(nong)度（100倍）的谷氨酰(xian)胺溶液（1ml/支(zhi)）。每支(zhi)1ml的谷氨酰(xian)胺加(jia)到(dao)99ml*培養(yang)基中(zhong)，其(qi)終濃(nong)度為(wei)2mM/ml培養(yang)基。包(bao)裝(zhuang)為(wei)粉紅色，-24?C保(bao)存(cun)。

　　Q3.細(xi)胞(bao)計數(shu)及(ji)存(cun)活(huo)測試
1、原(yuan)理：
(1)計算細胞(bao)數(shu)目(mu)可(ke)用(yong)血(xue)球計數(shu)盤(pan)或(huo)是Coultercounter粒子計數(shu)器(qi)自(zi)動(dong)計數(shu)。
(2)血(xue)球計數(shu)盤(pan)壹(yi)般有(you)二(er)個chambers，每個chamber中(zhong)細(xi)刻(ke)9個1mm2大(da)正(zheng)方形(xing)，其(qi)中(zhong)4個角落(luo)之正(zheng)方形(xing)再(zai)細(xi)刻(ke)16個小格(ge)，深(shen)度均(jun)為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片(pian)後(hou)，每個大(da)正(zheng)方形(xing)之體積(ji)為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用(yong)時(shi)，計數(shu)每個大(da)正(zheng)方形(xing)內(nei)之細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)，乘(cheng)以(yi)稀釋倍數(shu)，再(zai)乘(cheng)以(yi)104，即(ji)為每ml中(zhong)之(zhi)細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)。
(3)存(cun)活(huo)測試之(zhi)步驟為dyeexclusion，利用(yong)染(ran)料(liao)會(hui)滲入(ru)死細(xi)胞(bao)中(zhong)而呈色(se)，而活細(xi)胞(bao)因(yin)細(xi)胞(bao)膜(mo)完(wan)整(zheng)，染(ran)料(liao)無(wu)法(fa)滲入(ru)而不(bu)會(hui)呈色(se)。壹(yi)般使(shi)用(yong)藍(lan)色之trypan blue染料(liao)，如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)不(bu)易(yi)吸收trypan blue，則(ze)用(yong)紅(hong)色(se)之(zhi)Erythrosin bluish。計算細胞(bao)活率：活細胞(bao)數(shu)/(活(huo)細(xi)胞(bao)數(shu)+死(si)細(xi)胞(bao)數(shu))×100%。計數(shu)應(ying)在(zai)臺(tai)盼蘭(lan)染(ran)色後(hou)數(shu)分(fen)鐘內(nei)完(wan)成，隨時(shi)間(jian)延長(chang)，部分(fen)活細(xi)胞(bao)也開始攝(she)取染(ran)料(liao);因(yin)為(wei)臺(tai)盼蘭(lan)對蛋白(bai)質有很強的親(qin)和(he)力，用(yong)不(bu)含(han)血(xue)清(qing)的稀釋液，可(ke)以使(shi)染色計數(shu)更(geng)為(wei)準確。

　　Q4.細(xi)胞(bao)特性(xing)
在(zai)細(xi)胞(bao)培養(yang)之前(qian)，我(wo)們要了(le)解(jie)壹(yi)下妳(ni)所(suo)要(yao)養(yang)細胞(bao)的基本(ben)特(te)性(xing)，這點可(ke)以(yi)從細胞(bao)的產品(pin)說(shuo)明書或(huo)者(zhe)從ATCC細胞(bao)庫(ku)查詢。除(chu)此之(zhi)外我(wo)們還要(yao)知道(dao)每管(guan)細(xi)胞(bao)的數(shu)量(liang)，建(jian)議(yi)分(fen)裂或(huo)傳代(dai)的比例，和(he)已知細(xi)胞(bao)的傳(chuan)代(dai)代次(ci)等信(xin)息(xi)。

　　Q5.準備(bei)培(pei)養(yang)基
復(fu)蘇(su)細胞(bao)時需(xu)要準備(bei)合適的培(pei)養(yang)基，血(xue)清(qing)和(he)細(xi)胞(bao)生長(chang)所需(xu)的添(tian)加(jia)劑。大(da)部(bu)分(fen)培養(yang)細胞(bao)所用(yong)的培(pei)養(yang)體系，可(ke)以(yi)在(zai)訂(ding)購(gou)細(xi)胞(bao)系時(shi)獲(huo)得。
雖(sui)然大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)系可(ke)以(yi)在(zai)不(bu)止(zhi)壹(yi)種(zhong)培(pei)養(yang)基中(zhong)生(sheng)長(chang)，但是(shi)當(dang)培(pei)養(yang)基改(gai)變時，細(xi)胞(bao)的性(xing)質(zhi)也(ye)會(hui)變(bian)化。因(yin)此(ci)，使(shi)用(yong)細(xi)胞(bao)庫(ku)推(tui)薦(jian)的培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)會獲(huo)得的效(xiao)果(guo)。

　　Q6.開(kai)啟(qi)凍(dong)存(cun)管(guan)
1.準備(bei)壹(yi)個培養(yang)瓶(ping)，加(jia)入(ru)適宜(yi)細(xi)胞(bao)培養(yang)的培(pei)養(yang)基，液體(ti)體積(ji)按照說(shuo)明書的推(tui)薦(jian)配置(zhi)，並平(ping)衡(heng)培(pei)養(yang)基的溫(wen)度和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)或(huo)細胞(bao)的正(zheng)常生長(chang)溫度下(xia)將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)輕輕搖(yao)動(dong)。解(jie)凍(dong)要快，約2分(fen)鐘或(huo)直(zhi)到(dao)冰(bing)晶(jing)融化即(ji)可。
3.從水(shui)浴(yu)中(zhong)取(qu)出(chu)凍(dong)存(cun)管(guan)並用(yong)浸(jin)泡或(huo)噴灑(sa)70%乙醇的方(fang)式(shi)來消(xiao)毒(du)。進(jin)壹(yi)步的操(cao)作(zuo)均需(xu)在無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)臺中(zhong)嚴(yan)格(ge)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)進(jin)行。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存(cun)管(guan)的管(guan)帽(mao)並將(jiang)內(nei)容物轉(zhuan)移到(dao)壹(yi)個含(han)有(you)9 ml推(tui)薦(jian)培養(yang)基的無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)。通(tong)過溫(wen)和離(li)心（125×g 10 min）除(chu)去冷凍(dong)保(bao)護劑（DMSO）。棄去上(shang)清(qing)，並用(yong)1或(huo)2 ml*培養(yang)基重懸(xuan)細胞(bao)。將(jiang)這些(xie)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液轉(zhuan)移到(dao)含(han)有(you)*培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)並輕輕搖(yao)動(dong)以(yi)*混(hun)勻。
5.培(pei)養(yang)24小時後(hou)檢查細胞(bao)狀態(tai)並在需(xu)要時(shi)進(jin)行傳(chuan)代(dai)。

　　Q7. 人(ren)急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao) 培養(yang)用(yong)液pH對細胞(bao)生長(chang)的影響(xiang)

　　由於(yu)，大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)適宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離(li)此範(fan)圍對細胞(bao)將(jiang)產生有害的影響(xiang)。各種(zhong)細(xi)胞(bao)對pH的要(yao)求(qiu)也(ye)不(bu)*相同，原代(dai)培養(yang)細胞(bao)壹(yi)般對pH變動(dong)耐(nai)受(shou)差，無(wu)限(xian)細(xi)胞(bao)系耐(nai)受(shou)力強。

　　但總(zong)體(ti)來說(shuo)，細胞(bao)耐(nai)酸性(xing)比耐(nai)堿(jian)性(xing)強壹(yi)些(xie)，偏(pian)酸環境(jing)中(zhong)更(geng)利於(yu)細胞(bao)生長(chang)。因(yin)此(ci)，我(wo)們在配制(zhi)培(pei)養(yang)用(yong)液時(shi)，可把(ba)液體(ti)的pH稍(shao)微(wei)調(tiao)得偏(pian)酸壹(yi)些(xie)。液體(ti)在經(jing)過0.10um或(huo)0.22um濾膜(mo)過濾時，溶液的pH還(hai)會(hui)向(xiang)上浮(fu)動(dong)0.2左(zuo)右(you)。

　　人急(ji)性(xing)非(fei)B非(fei)T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao)質量可靠(kao)，售後(hou)有(you)保(bao)障（編輯(ji)：tanxi）