上海(hai)乾思(si)生(sheng)物(wu)Abnova品牌(pai)代(dai)理(li)專(zhuan)業經營(ying)進(jin)口胎牛(niu)血清、細胞因(yin)子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細(xi)胞、抗體、生物(wu)試劑、耗材、培(pei)養基、壹(yi)抗、二(er)抗、其(qi)產品吸附均(jun)勻(yun)，吸附性好(hao)，空白(bai)值低(di)，孔底透(tou)明度(du)高，代(dai)做(zuo)ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完善的庫(ku)存(cun)及供應(ying)體系以及高效穩(wen)定(ding)的純(chun)化(hua)技(ji)術，保證產品均(jun)能現貨供應(ying)和產品質(zhi)量(liang)的(de)穩(wen)定(ding)性。

Abnova

上海(hai)乾思(si)生(sheng)物(wu)Abnova品牌(pai)代(dai)理(li)專(zhuan)業經營(ying)進(jin)口胎牛(niu)血清、細胞因(yin)子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細(xi)胞、抗體、生物(wu)試劑、耗材、培(pei)養基、壹(yi)抗、二(er)抗、其(qi)產品吸附均(jun)勻(yun)，吸附性好(hao)，空白(bai)值低(di)，孔底透(tou)明度(du)高，代(dai)做(zuo)ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完善的庫(ku)存(cun)及供應(ying)體系以及高效穩(wen)定(ding)的純(chun)化(hua)技(ji)術，保證產品均(jun)能現貨供應(ying)和產品質(zhi)量(liang)的(de)穩(wen)定(ding)性。

怎樣(yang)查到壹(yi)個(ge)特(te)定(ding)細胞株的(de)相關知(zhi)識和培(pei)養條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集了絕大(da)多(duo)數細胞的詳(xiang)細資(zi)料。打(da)開(kai)ATCC網頁(ye)的Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸入(ru)細(xi)胞名稱就(jiu)可(ke)以搜索ATCC的(de)細(xi)胞數據(ju)庫(ku)。數據(ju)庫(ku)中有(you)每(mei)壹(yi)種(zhong)細(xi)胞的詳(xiang)細描(miao)述，包括細胞的來(lai)源(yuan)，培(pei)養和凍(dong)存(cun)條件(jian)，以及相關文(wen)獻等(deng)資(zi)料。
如何選用特(te)殊細胞系培(pei)養基？
培(pei)養某(mou)類(lei)型細胞沒有(you)固(gu)定(ding)的培(pei)養條件。MEM中培(pei)養的細胞，很(hen)可能(neng)在DMEM或M199中(zhong)同樣容(rong)易生(sheng)長(chang)。總之，*MEM、DMEM做(zuo)貼壁(bi)細(xi)胞培(pei)養；RPMI1640做懸浮細胞培(pei)養；各(ge)種(zhong)目(mu)的無血清培(pei)養*AIMV培(pei)養基（SFM）。

測(ce)序(xu)實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1 收(shou)集樣品
2 相關試(shi)劑 總(zong)RNA提取(qu)試(shi)劑TREzol Reagent (RNA提取(qu)試(shi)劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄酶(mei)), RNA 純(chun)化(hua)試(shi)劑, RealqPCR MasterMix (熒(ying)光定(ding)量PCR預(yu)混試劑)。
3 實(shi)驗(yan)儀(yi)器(qi) 熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi); PCR儀;低溫離(li)心機(ji)。
4 總(zong)RNA提取(qu)
5 cDNA合成(cheng) 在(zai)0.5ml的(de)離(li)心管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru)1µl模(mo)板(ban)總RNA(1µg/µl); 2µl隨機(ji)引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至15µl體系。混(hun)勻(yun)後70℃變(bian)性RNA 5分鐘，冰上速冷(leng)1分(fen)鐘，離(li)心將(jiang)溶(rong)液收(shou)集至管(guan)底加(jia)入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體系。PCR儀(yi)中反應(ying)條件(jian)設(she)置 37℃延(yan)伸60min，70℃保溫15min終止反應(ying)。合成(cheng)好(hao)的cDNA置於(yu) -20 ℃保存(cun)備用。
6 引物設(she)計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成(cheng)
7 實(shi)時定(ding)量PCR 按(an)以下反應(ying)體系進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引物F 1 ul，下(xia)遊(you)引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀(yi)擴增反應(ying)條件(jian)設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循(xun)環(huan))。
8 PCR產物溶(rong)解曲線分(fen)析 將所擴增的(de)PCR 產物進(jin)行(xing)溶(rong)解曲線分(fen)析，單(dan)峰(feng)溶(rong)解曲線表(biao)示(shi)擴增產物單(dan)壹(yi)，無非(fei)特(te)異(yi)性擴增產物。溶(rong)解曲線生(sheng)成的反應(ying)程序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意事(shi)項(xiang)：收(shou)集標本前必須清楚(chu)要檢(jian)測(ce)的成份(fen)是否(fou)足(zu)夠穩(wen)定(ding)，對收(shou)集後當天進行(xing)檢測(ce)的標本(ben)，儲存(cun)在4℃備(bei)用，如有(you)特(te)殊原因(yin)需要周(zhou)期收(shou)集標本，將標本(ben)及時(shi)分裝(zhuang)後放在(zai)-20℃或-70℃條(tiao)件下保存(cun)。避免反復(fu)凍(dong)融，標(biao)本(ben)2-8℃可(ke)保存(cun)48小時(shi)，-20℃可(ke)保存(cun)1個(ge)月(yue)，-70度可保存(cun)6個(ge)月(yue)，部(bu)分標本(ben)需(xu)添加(jia)抑(yi)肽(tai)酶(mei)。我(wo)公司(si)是國內(nei)信譽(yu)雙(shuang)收(shou)的放心(xin)企(qi)業代(dai)理(li)商，具(ju)有(you)良好(hao)的市場(chang)信(xin)譽(yu)與(yu)口碑，專(zhuan)業的(de)銷(xiao)售(shou)和技(ji)術服務團(tuan)隊(dui)，歡(huan)迎(ying)廣大(da)師(shi)生、研究機(ji)構(gou)等，洽商。

細(xi)胞出(chu)現問題，可重(zhong)發(fa)的情(qing)況有(you)哪(na)些？判定(ding)標準(zhun)是什麽(me)？
　　（1）細(xi)胞運輸(shu)途中遭遇的(de)各(ge)種(zhong)問題，細胞丟(diu)失、破(po)損(sun)、漏液等(deng)，重(zhong)發(fa)；
　　（2）凍(dong)存(cun)的細(xi)胞復(fu)蘇後，絕(jue)大(da)多(duo)數細胞未存(cun)活，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存(cun)活的(de)細(xi)胞靜置24小(xiao)時後，絕(jue)大(da)多(duo)數細胞未存(cun)活，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍(dong)存(cun)的細(xi)胞復(fu)蘇後或存(cun)活的(de)細(xi)胞靜置4小(xiao)時後並(bing)且(qie)未開(kai)封，出(chu)現汙(wu)染(ran)，重(zhong)發(fa)；
　　（5）視具(ju)體情況而(er)定(ding)。
細胞出(chu)現問題，不(bu)予以重(zhong)發(fa)的情(qing)況有(you)哪(na)些？
　　（1）客戶(hu)造成(cheng)細(xi)胞汙(wu)染(ran)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（2）客戶(hu)不(bu)正(zheng)確(que)操(cao)作(zuo)致(zhi)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)不(bu)好(hao)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（3）細胞狀(zhuang)態(tai)不(bu)好(hao)，未提供細(xi)胞培(pei)養前3天照(zhao)片的，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（4）細胞培(pei)養時經其(qi)它(ta)處(chu)理的(de)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（5）細胞收(shou)到2天內(nei)，未告(gao)知，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（6）視具(ju)體情況而(er)定(ding)。