人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)_培養指南

非(fei)常(chang)讓人著(zhe)迷(mi)的實(shi)驗，其成(cheng)功(gong)關(guan)鍵之(zhi)壹是(shi)選擇(ze)可信(xin)的(de)實(shi)驗試(shi)劑。

我司細(xi)胞(bao)近3000種(zhong)，來源(yuan)於(yu)美(mei)國ATCC,細(xi)胞(bao)都(dou)是(shi)經(jing)過嚴(yan)格(ge)質(zhi)量控(kong)制(zhi)，在中(zhong)國(guo)大陸努力(li)搭(da)建正(zheng)牌細(xi)胞(bao)與國內(nei)廣(guang)大科研(yan)人員之(zhi)間的(de)溝(gou)通(tong)橋(qiao)梁(liang)。為您(nin)提(ti)供人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)外(wai)，還(hai)有更(geng)多相(xiang)關(guan)實(shi)驗產品，標(biao)準(zhun)品，細(xi)胞(bao)株(zhu)和(he)實(shi)驗技(ji)術(shu)服務(wu)等等(deng)前期後續(xu)服務(wu)。

人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)的(de)產(chan)品(pin)介紹

人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)由(you)我司*銷售人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)。

人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)細(xi)胞(bao)株(zhu)

　　Q1. 人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)液(ye)體(ti)培養基(ji)的保(bao)存是(shi)冷藏好？還(hai)是(shi)冷凍(dong)好？

　　要冷藏！！因(yin)為液(ye)體(ti)培養基(ji)經(jing)冷凍(dong)後再(zai)經(jing)溶(rong)化(hua)時(shi)，其溶(rong)液(ye)的(de)pH值會發(fa)生改(gai)變，溶(rong)液(ye)往(wang)往變堿，某(mou)些(xie)成(cheng)分(fen)溶(rong)解也會受到(dao)影響對(dui)細(xi)胞(bao)生長(chang)不利(li)。故液體(ti)培養基(ji)壹定要存放在(zai)冷藏箱(xiang)中，通(tong)常(chang)液(ye)體(ti)培養基(ji)在冷藏條(tiao)件(jian)下(xia)可存放6個月 ~ 壹年(nian)。

　　Q2.人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao) 液(ye)體(ti)培養基(ji)中谷(gu)氨(an)酰胺(an)的(de)作(zuo)用，及使用方(fang)法。

　　幾乎所(suo)有的細(xi)胞(bao)對(dui)谷(gu)氨(an)酰胺(an)有較高(gao)的(de)要求，細(xi)胞(bao)需(xu)要(yao)谷(gu)氨(an)酰胺(an)合成(cheng)蛋(dan)白(bai)質(zhi)，在(zai)缺少(shao)谷(gu)氨(an)酰胺(an)時(shi)，細(xi)胞(bao)生長(chang)不良而死亡。所(suo)以(yi)，各種培養液(ye)中都(dou)含(han)有較大量的谷氨(an)酰胺(an)。谷(gu)氨(an)酰胺(an)在(zai)溶(rong)液(ye)中(zhong)很不穩定，應置(zhi)-20 ?C冰凍(dong)保(bao)存，用前加入培養基(ji)中。加有谷氨(an)酰胺(an)的(de)液(ye)體(ti)培養基(ji)4 ?C 冰箱儲(chu)存兩周以(yi)上(shang)時(shi)，應重新加入原(yuan)來量的谷氨(an)酰胺(an)。基(ji)礎醫(yi)學(xue)細(xi)胞(bao)中(zhong)心(xin)在(zai)其服務(wu)項目(mu)中配制(zhi)分(fen)裝(zhuang)了(le)高(gao)濃(nong)度(du)（100倍）的谷氨(an)酰胺(an)溶(rong)液(ye)（1ml/支）。每(mei)支1ml的(de)谷(gu)氨(an)酰胺(an)加到(dao)99ml*培養基(ji)中，其終(zhong)濃(nong)度(du)為(wei)2mM/ml培養基(ji)。包裝(zhuang)為(wei)粉紅(hong)色(se)，-24?C保存。

　　Q3.細(xi)胞(bao)計數及存活(huo)測試(shi)
1、原(yuan)理(li)：
(1)計算細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)可用血球計數盤或(huo)是(shi)Coultercounter粒子計數器(qi)自動(dong)計數。
(2)血球(qiu)計數盤壹般(ban)有二(er)個chambers，每個chamber中細(xi)刻(ke)9個1mm2大正(zheng)方(fang)形(xing)，其中4個角落(luo)之(zhi)正(zheng)方(fang)形(xing)再細(xi)刻(ke)16個小格(ge)，深度均(jun)為0.1mm。當chamber上(shang)方(fang)蓋(gai)上蓋(gai)玻片(pian)後，每(mei)個大正(zheng)方(fang)形(xing)之(zhi)體(ti)積(ji)為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時(shi)，計數每個大正(zheng)方(fang)形(xing)內之(zhi)細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)，乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數，再乘(cheng)以(yi)104，即(ji)為每ml中之(zhi)細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)。
(3)存活(huo)測試(shi)之(zhi)步驟(zhou)為(wei)dyeexclusion，利(li)用染(ran)料會(hui)滲入死細(xi)胞(bao)中(zhong)而呈(cheng)色，而活(huo)細(xi)胞(bao)因(yin)細(xi)胞(bao)膜(mo)完(wan)整(zheng)，染(ran)料無(wu)法滲(shen)入而不會呈色(se)。壹般(ban)使用藍(lan)色之(zhi)trypan blue染(ran)料，如(ru)果細(xi)胞(bao)不易(yi)吸(xi)收(shou)trypan blue，則(ze)用紅(hong)色(se)之(zhi)Erythrosin bluish。計算細(xi)胞(bao)活(huo)率(lv)：活(huo)細(xi)胞(bao)數(shu)/(活(huo)細(xi)胞(bao)數(shu)+死細(xi)胞(bao)數(shu))×100%。計數應在(zai)臺(tai)盼蘭染(ran)色後數(shu)分(fen)鐘(zhong)內(nei)完(wan)成(cheng)，隨時(shi)間延(yan)長，部分(fen)活(huo)細(xi)胞(bao)也開始攝取(qu)染(ran)料;因(yin)為臺(tai)盼蘭對蛋(dan)白(bai)質(zhi)有很強(qiang)的(de)親和力(li)，用不含血清(qing)的稀(xi)釋(shi)液(ye)，可以(yi)使染(ran)色計數更(geng)為準(zhun)確(que)。

　　Q4.細(xi)胞(bao)特(te)性(xing)
在細(xi)胞(bao)培養之(zhi)前，我們要了(le)解壹下(xia)妳所(suo)要養細(xi)胞(bao)的(de)基(ji)本(ben)特(te)性(xing)，這點可以(yi)從(cong)細(xi)胞(bao)的(de)產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)或者(zhe)從ATCC細(xi)胞(bao)庫查(zha)詢(xun)。除此(ci)之(zhi)外我們還(hai)要(yao)知道(dao)每(mei)管(guan)細(xi)胞(bao)的(de)數(shu)量，建議(yi)分(fen)裂(lie)或傳代的(de)比(bi)例，和(he)已知細(xi)胞(bao)的(de)傳代代(dai)次等(deng)信(xin)息(xi)。

　　Q5.準備培養基(ji)
復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)時(shi)需(xu)要(yao)準備合適(shi)的(de)培養基(ji)，血清(qing)和細(xi)胞(bao)生長(chang)所(suo)需的(de)添(tian)加劑(ji)。大部分(fen)培養細(xi)胞(bao)所(suo)用的培養體(ti)系(xi)，可以(yi)在(zai)訂(ding)購細(xi)胞(bao)系(xi)時(shi)獲(huo)得。
雖然(ran)大多數(shu)細(xi)胞(bao)系(xi)可以(yi)在(zai)不止(zhi)壹種(zhong)培養基(ji)中生長(chang)，但(dan)是(shi)當培養基(ji)改變時(shi)，細(xi)胞(bao)的(de)性(xing)質(zhi)也會變化(hua)。因此(ci)，使用細(xi)胞(bao)庫推(tui)薦的(de)培養基(ji)來培養細(xi)胞(bao)會(hui)獲(huo)得的效果。

　　Q6.開啟凍(dong)存管(guan)
1.準(zhun)備壹個培養瓶，加入適(shi)宜(yi)細(xi)胞(bao)培養的(de)培養基(ji)，液體(ti)體(ti)積(ji)按(an)照說(shuo)明書(shu)的推(tui)薦配(pei)置，並平衡培養基(ji)的溫度(du)和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水浴中或(huo)細(xi)胞(bao)的(de)正(zheng)常(chang)生長(chang)溫度(du)下(xia)將(jiang)凍(dong)存管(guan)輕(qing)輕搖動(dong)。解凍(dong)要(yao)快(kuai)，約(yue)2分(fen)鐘(zhong)或(huo)直(zhi)到(dao)冰晶融化(hua)即可。
3.從(cong)水浴中取(qu)出(chu)凍(dong)存管(guan)並(bing)用浸泡或(huo)噴灑70%乙(yi)醇(chun)的方(fang)式(shi)來消(xiao)毒(du)。進(jin)壹步(bu)的(de)操作(zuo)均(jun)需在無(wu)菌操作(zuo)臺中(zhong)嚴(yan)格(ge)無(wu)菌條件(jian)下(xia)進(jin)行(xing)。
4.擰開凍(dong)存管(guan)的(de)管(guan)帽(mao)並將(jiang)內容物(wu)轉移到(dao)壹個含有9 ml推(tui)薦培養基(ji)的無(wu)菌離心管(guan)中(zhong)。通(tong)過溫和(he)離(li)心（125×g 10 min）除去冷凍(dong)保(bao)護劑（DMSO）。棄去(qu)上清(qing)，並(bing)用1或2 ml*培養基(ji)重懸細(xi)胞(bao)。將(jiang)這些(xie)細(xi)胞(bao)懸液轉(zhuan)移到(dao)含(han)有*培養基(ji)的培養瓶中(zhong)並(bing)輕輕搖動(dong)以(yi)*混(hun)勻(yun)。
5.培養24小(xiao)時(shi)後檢查(zha)細(xi)胞(bao)狀態(tai)並(bing)在需(xu)要時(shi)進(jin)行(xing)傳代。

　　Q7. 人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao) 培養用液pH對細(xi)胞(bao)生長(chang)的(de)影響

　　由(you)於，大多數(shu)細(xi)胞(bao)適(shi)宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離此範圍(wei)對(dui)細(xi)胞(bao)將(jiang)產生有害的影響。各種細(xi)胞(bao)對(dui)pH的(de)要(yao)求也不*相同(tong)，原(yuan)代(dai)培養細(xi)胞(bao)壹般(ban)對(dui)pH變動(dong)耐(nai)受差(cha)，無(wu)限細(xi)胞(bao)系(xi)耐(nai)受力(li)強(qiang)。

　　但(dan)總(zong)體(ti)來說(shuo)，細(xi)胞(bao)耐(nai)酸(suan)性比(bi)耐(nai)堿(jian)性強壹些(xie)，偏酸環境中(zhong)更(geng)利(li)於細(xi)胞(bao)生長(chang)。因(yin)此，我們在配(pei)制(zhi)培養用液時(shi)，可把(ba)液體(ti)的(de)pH稍(shao)微(wei)調(tiao)得偏酸壹些(xie)。液體(ti)在(zai)經(jing)過0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜過濾(lv)時(shi)，溶(rong)液(ye)的(de)pH還(hai)會(hui)向(xiang)上(shang)浮(fu)動(dong)0.2左(zuo)右。

　　人急性單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)質(zhi)量可靠(kao)，售後有保障（編(bian)輯：tanxi）