上(shang)海(hai)乾(qian)思生物(wu)Alomone Labs品(pin)牌(pai)代(dai)理專(zhuan)業經(jing)營進口胎(tai)牛血(xue)清(qing)、細(xi)胞(bao)因(yin)子、ELISA試(shi)劑(ji)盒、細(xi)胞(bao)、抗體(ti)、生(sheng)物(wu)試劑(ji)、耗材(cai)、培(pei)養基、壹(yi)抗、二(er)抗、其(qi)產(chan)品(pin)吸附均(jun)勻(yun)，吸附性(xing)好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透明度(du)高，代(dai)做ELISA實(shi)驗等(deng)。完(wan)善(shan)的(de)庫(ku)存(cun)及(ji)供應(ying)體(ti)系(xi)以及(ji)高效穩(wen)定的(de)純化(hua)技術，保(bao)證產(chan)品(pin)均(jun)能(neng)現(xian)貨(huo)供應(ying)和產品(pin)質(zhi)量的(de)穩(wen)定性。

Alomone Labs

上海(hai)乾(qian)思生物(wu)Alomone Labs品(pin)牌(pai)代(dai)理專(zhuan)業經(jing)營進口胎(tai)牛血(xue)清(qing)、細(xi)胞(bao)因(yin)子、ELISA試(shi)劑(ji)盒、細(xi)胞(bao)、抗體(ti)、生(sheng)物(wu)試劑(ji)、耗材(cai)、培(pei)養基、壹(yi)抗、二(er)抗、其(qi)產(chan)品(pin)吸附均(jun)勻(yun)，吸附性(xing)好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透明度(du)高，代(dai)做ELISA實(shi)驗等(deng)。完(wan)善(shan)的(de)庫(ku)存(cun)及(ji)供應(ying)體(ti)系(xi)以及(ji)高效穩(wen)定的(de)純化(hua)技術，保(bao)證產(chan)品(pin)均(jun)能(neng)現(xian)貨(huo)供應(ying)和產品(pin)質(zhi)量的(de)穩(wen)定性。

怎樣查(zha)到(dao)壹(yi)個特定細(xi)胞(bao)株(zhu)的(de)相(xiang)關(guan)知識(shi)和培養條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了(le)絕大多數(shu)細(xi)胞(bao)的(de)詳(xiang)細(xi)資(zi)料(liao)。打開ATCC網頁(ye)的(de)Cells and hybridomas鏈(lian)接(jie)，輸(shu)入(ru)細(xi)胞(bao)名稱就(jiu)可(ke)以搜(sou)索ATCC的(de)細(xi)胞(bao)數(shu)據庫(ku)。數(shu)據庫(ku)中(zhong)有每壹(yi)種細(xi)胞(bao)的(de)詳(xiang)細(xi)描(miao)述，包(bao)括(kuo)細(xi)胞(bao)的(de)來(lai)源(yuan)，培養和凍存條(tiao)件(jian)，以及(ji)相(xiang)關(guan)文(wen)獻等資(zi)料(liao)。
如何(he)選用特殊細(xi)胞(bao)系(xi)培養(yang)基？
培(pei)養某類型細(xi)胞(bao)沒有(you)固(gu)定的(de)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)。MEM中培養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)，很(hen)可能(neng)在(zai)DMEM或(huo)M199中(zhong)同樣容(rong)易(yi)生(sheng)長(chang)。總(zong)之(zhi)，*MEM、DMEM做貼(tie)壁細(xi)胞(bao)培(pei)養；RPMI1640做懸浮(fu)細(xi)胞(bao)培(pei)養；各種目的(de)無血(xue)清培養(yang)*AIMV培養基（SFM）。

測序實(shi)驗流程(cheng)：
1 收集(ji)樣(yang)品(pin)
2 相(xiang)關試(shi)劑(ji) 總RNA提(ti)取試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提(ti)取試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆轉錄(lu)酶(mei)), RNA 純化(hua)試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預(yu)混(hun)試劑(ji))。
3 實(shi)驗儀器(qi) 熒光定量PCR儀; PCR儀;低(di)溫離(li)心機(ji)。
4 總(zong)RNA提(ti)取
5 cDNA合成(cheng) 在(zai)0.5ml的(de)離(li)心管中(zhong)加入1µl模(mo)板總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機(ji)引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至(zhi)15µl體(ti)系(xi)。混(hun)勻(yun)後(hou)70℃變(bian)性RNA 5分鐘(zhong)，冰(bing)上(shang)速冷1分鐘(zhong)，離(li)心將溶(rong)液收集(ji)至(zhi)管底(di)加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至(zhi)30µl體(ti)系(xi)。PCR儀中(zhong)反應條(tiao)件(jian)設(she)置 37℃延伸60min，70℃保(bao)溫15min終(zhong)止(zhi)反應(ying)。合成(cheng)好(hao)的(de)cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保存(cun)備(bei)用。
6 引(yin)物(wu)設(she)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成(cheng)
7 實(shi)時定量PCR 按(an)以下(xia)反(fan)應體(ti)系(xi)進行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引(yin)物(wu)F 1 ul，下遊(you)引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀擴(kuo)增(zeng)反(fan)應條(tiao)件(jian)設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循(xun)環(huan))。
8 PCR產物(wu)溶(rong)解(jie)曲線分析 將(jiang)所擴增(zeng)的(de)PCR 產(chan)物(wu)進行(xing)溶(rong)解(jie)曲線分析，單(dan)峰(feng)溶(rong)解(jie)曲線表示擴增(zeng)產(chan)物(wu)單(dan)壹(yi)，無非特異(yi)性(xing)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)。溶(rong)解(jie)曲線生成(cheng)的(de)反(fan)應(ying)程(cheng)序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事項(xiang)：收集(ji)標(biao)本(ben)前必須(xu)清(qing)楚要(yao)檢(jian)測的(de)成(cheng)份(fen)是否(fou)足夠(gou)穩(wen)定，對(dui)收集(ji)後(hou)當(dang)天(tian)進(jin)行(xing)檢(jian)測的(de)標(biao)本(ben)，儲存(cun)在4℃備(bei)用，如有特殊原因(yin)需(xu)要(yao)周(zhou)期(qi)收集(ji)標(biao)本(ben)，將標(biao)本(ben)及(ji)時分(fen)裝後(hou)放(fang)在-20℃或(huo)-70℃條(tiao)件(jian)下保存(cun)。避(bi)免反復(fu)凍融(rong)，標(biao)本(ben)2-8℃可保(bao)存(cun)48小(xiao)時，-20℃可(ke)保(bao)存(cun)1個(ge)月(yue)，-70度(du)可(ke)保存(cun)6個月，部分(fen)標(biao)本(ben)需添加抑肽(tai)酶(mei)。我(wo)公司(si)是國(guo)內(nei)信譽(yu)雙(shuang)收的(de)放(fang)心企業代(dai)理商(shang)，具(ju)有(you)良好(hao)的(de)市(shi)場(chang)信譽(yu)與口(kou)碑，專(zhuan)業的(de)銷(xiao)售(shou)和技術服(fu)務團隊(dui)，歡(huan)迎(ying)廣大師生、研究機(ji)構等(deng)，洽(qia)商。

細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，可重(zhong)發(fa)的(de)情(qing)況(kuang)有哪些(xie)？判(pan)定標準(zhun)是什(shen)麽？
　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸(shu)途(tu)中(zhong)遭(zao)遇的(de)各種問(wen)題(ti)，細(xi)胞(bao)丟失(shi)、破損、漏(lou)液等，重發(fa)；
　　（2）凍存的(de)細(xi)胞(bao)復(fu)蘇(su)後(hou)，絕(jue)大多數(shu)細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存(cun)活的(de)細(xi)胞(bao)靜(jing)置24小時後(hou)，絕(jue)大多數(shu)細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍存的(de)細(xi)胞(bao)復(fu)蘇(su)後(hou)或(huo)存(cun)活的(de)細(xi)胞(bao)靜(jing)置4小時後(hou)並(bing)且未(wei)開(kai)封(feng)，出現(xian)汙(wu)染，重(zhong)發(fa)；
　　（5）視具體(ti)情(qing)況而定。
細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，不予以重(zhong)發(fa)的(de)情(qing)況(kuang)有哪些(xie)？
　　（1）客戶造成(cheng)細(xi)胞(bao)汙(wu)染，不(bu)重發(fa)；
　　（2）客戶不正確操作致細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態不好，不(bu)重發(fa)；
　　（3）細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態不好，未(wei)提(ti)供細(xi)胞(bao)培(pei)養前3天(tian)照片(pian)的(de)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（4）細(xi)胞(bao)培(pei)養時經(jing)其(qi)它處理的(de)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（5）細(xi)胞(bao)收到(dao)2天(tian)內(nei)，未(wei)告(gao)知，不重發(fa)；
　　（6）視具體(ti)情(qing)況而定。