上海(hai)乾思(si)生(sheng)物ALPCO品(pin)牌代理(li)專(zhuan)業(ye)經營進口(kou)胎(tai)牛血清(qing)、細(xi)胞因(yin)子、ELISA試(shi)劑盒(he)、細(xi)胞、抗體(ti)、生(sheng)物(wu)試(shi)劑、耗(hao)材、培(pei)養基(ji)、壹抗、二抗、其(qi)產品吸附均勻(yun)，吸附性(xing)好，空白值(zhi)低，孔底(di)透(tou)明(ming)度(du)高(gao)，代做ELISA實驗等(deng)。完(wan)善(shan)的(de)庫(ku)存及供應體(ti)系以及高(gao)效穩(wen)定的純化技(ji)術(shu)，保(bao)證產品均能現(xian)貨供應和(he)產(chan)品(pin)質量(liang)的穩(wen)定性(xing)。

ALPCO

上海(hai)乾思(si)生(sheng)物ALPCO品(pin)牌代理(li)專(zhuan)業(ye)經營進口(kou)胎(tai)牛血清(qing)、細(xi)胞因(yin)子、ELISA試(shi)劑盒(he)、細(xi)胞、抗體(ti)、生(sheng)物(wu)試(shi)劑、耗(hao)材、培(pei)養基(ji)、壹抗、二抗、其(qi)產品吸附均勻(yun)，吸附性(xing)好，空白值(zhi)低，孔底(di)透(tou)明(ming)度(du)高(gao)，代做ELISA實驗等(deng)。完(wan)善(shan)的(de)庫(ku)存及供應體(ti)系以及高(gao)效穩(wen)定的純化技(ji)術(shu)，保(bao)證產品均能現(xian)貨供應和(he)產(chan)品(pin)質量(liang)的穩(wen)定性(xing)。

怎(zen)樣查到(dao)壹個特(te)定(ding)細(xi)胞株的(de)相(xiang)關(guan)知(zhi)識和(he)培(pei)養條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕大多數(shu)細(xi)胞的(de)詳(xiang)細(xi)資料(liao)。打(da)開ATCC網(wang)頁的(de)Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸(shu)入(ru)細(xi)胞名(ming)稱(cheng)就(jiu)可(ke)以搜索ATCC的細(xi)胞數(shu)據(ju)庫(ku)。數(shu)據(ju)庫(ku)中(zhong)有(you)每壹種細(xi)胞的(de)詳(xiang)細(xi)描述(shu)，包括(kuo)細(xi)胞的(de)來源，培(pei)養和(he)凍(dong)存條(tiao)件，以及相(xiang)關(guan)文獻(xian)等資(zi)料。
如(ru)何選(xuan)用特(te)殊(shu)細(xi)胞系培(pei)養基(ji)？
培(pei)養某(mou)類(lei)型細(xi)胞沒(mei)有(you)固定(ding)的(de)培(pei)養條(tiao)件。MEM中培(pei)養的(de)細(xi)胞，很(hen)可(ke)能(neng)在(zai)DMEM或M199中同樣容易生(sheng)長(chang)。總之(zhi)，*MEM、DMEM做(zuo)貼壁細(xi)胞培(pei)養；RPMI1640做(zuo)懸浮(fu)細(xi)胞培(pei)養；各(ge)種(zhong)目的(de)無(wu)血清(qing)培(pei)養*AIMV培(pei)養基(ji)（SFM）。

測序實驗流(liu)程：
1 收集(ji)樣品
2 相關(guan)試(shi)劑 總(zong)RNA提(ti)取試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取試劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄酶), RNA 純(chun)化(hua)試劑, RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR預混(hun)試(shi)劑)。
3 實(shi)驗儀(yi)器 熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR儀(yi); PCR儀(yi);低溫離心(xin)機。
4 總(zong)RNA提(ti)取
5 cDNA合成(cheng) 在(zai)0.5ml的離心(xin)管(guan)中(zhong)加入(ru)1µl模(mo)板總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至(zhi)15µl體(ti)系。混(hun)勻(yun)後(hou)70℃變(bian)性(xing)RNA 5分鐘，冰上速冷(leng)1分鐘，離心(xin)將(jiang)溶(rong)液(ye)收(shou)集(ji)至(zhi)管(guan)底(di)加入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至(zhi)30µl體(ti)系。PCR儀(yi)中反應條(tiao)件設(she)置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫15min終止(zhi)反應。合成(cheng)好的(de)cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保(bao)存備用。
6 引物(wu)設(she)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成(cheng)
7 實時(shi)定(ding)量(liang)PCR 按(an)以下反應體(ti)系進行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引物(wu)F 1 ul，下(xia)遊引物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀(yi)擴增(zeng)反應條(tiao)件設(she)置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循(xun)環(huan))。
8 PCR產(chan)物溶(rong)解(jie)曲(qu)線(xian)分析 將(jiang)所(suo)擴增(zeng)的PCR 產物(wu)進行(xing)溶(rong)解(jie)曲(qu)線(xian)分析，單(dan)峰溶(rong)解(jie)曲(qu)線(xian)表示(shi)擴(kuo)增(zeng)產物單(dan)壹，無非(fei)特(te)異性(xing)擴增(zeng)產物。溶(rong)解(jie)曲(qu)線(xian)生(sheng)成(cheng)的反應程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事項：收集(ji)標(biao)本(ben)前必須(xu)清(qing)楚要(yao)檢測的成(cheng)份是(shi)否足夠穩(wen)定，對收集後(hou)當天(tian)進行(xing)檢(jian)測的標(biao)本(ben)，儲(chu)存在(zai)4℃備用(yong)，如(ru)有(you)特(te)殊(shu)原(yuan)因(yin)需(xu)要(yao)周(zhou)期收(shou)集標(biao)本(ben)，將(jiang)標(biao)本(ben)及(ji)時(shi)分裝(zhuang)後(hou)放在(zai)-20℃或-70℃條(tiao)件下保(bao)存。避(bi)免反復凍融，標(biao)本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存48小時(shi)，-20℃可(ke)保(bao)存1個月，-70度(du)可(ke)保(bao)存6個月，部(bu)分標(biao)本(ben)需(xu)添(tian)加抑(yi)肽(tai)酶(mei)。我(wo)公(gong)司是(shi)國(guo)內信(xin)譽雙(shuang)收的放心(xin)企(qi)業(ye)代理(li)商，具(ju)有(you)良好(hao)的(de)市(shi)場信譽(yu)與(yu)口碑(bei)，專(zhuan)業(ye)的銷(xiao)售(shou)和(he)技(ji)術(shu)服務(wu)團隊(dui)，歡(huan)迎(ying)廣大師生(sheng)、研(yan)究機構(gou)等，洽(qia)商。

細(xi)胞出現問題，可(ke)重發的(de)情況有(you)哪些(xie)？判定(ding)標(biao)準是(shi)什(shen)麽？
　　（1）細(xi)胞運輸(shu)途中遭遇(yu)的(de)各種(zhong)問題，細(xi)胞丟失、破(po)損、漏液(ye)等，重發；
　　（2）凍(dong)存的細(xi)胞復(fu)蘇後(hou)，絕大多數(shu)細(xi)胞未(wei)存活(huo)，重發；
　　（3）存活(huo)的細(xi)胞靜(jing)置(zhi)24小時(shi)後(hou)，絕大多數(shu)細(xi)胞未(wei)存活(huo)，重發；
　　（4）凍(dong)存的細(xi)胞復(fu)蘇後(hou)或存活(huo)的細(xi)胞靜(jing)置(zhi)4小時(shi)後(hou)並(bing)且(qie)未開(kai)封，出現汙染(ran)，重發；
　　（5）視(shi)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)而定。
細(xi)胞出現問題，不(bu)予以重發的(de)情況有(you)哪些(xie)？
　　（1）客(ke)戶造(zao)成(cheng)細(xi)胞汙染(ran)，不(bu)重發；
　　（2）客(ke)戶不(bu)正(zheng)確操作(zuo)致(zhi)細(xi)胞狀態(tai)不(bu)好(hao)，不(bu)重發；
　　（3）細(xi)胞狀態(tai)不(bu)好(hao)，未提(ti)供細(xi)胞培(pei)養前3天照片(pian)的，不(bu)重發；
　　（4）細(xi)胞培(pei)養時(shi)經(jing)其(qi)它處理(li)的(de)，不(bu)重發；
　　（5）細(xi)胞收(shou)到(dao)2天(tian)內(nei)，未(wei)告知(zhi)，不(bu)重發；
　　（6）視(shi)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)而定。