上海乾思生(sheng)物Amsbio品牌代(dai)理(li)專(zhuan)業(ye)經營進(jin)口胎牛(niu)血(xue)清(qing)、細(xi)胞(bao)因(yin)子、ELISA試劑(ji)盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生(sheng)物試劑(ji)、耗材(cai)、培養基、壹抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產(chan)品(pin)吸(xi)附均(jun)勻，吸(xi)附性好，空白值(zhi)低，孔底(di)透(tou)明度(du)高，代(dai)做(zuo)ELISA實驗等(deng)。完(wan)善(shan)的庫(ku)存及(ji)供應體(ti)系以(yi)及(ji)高效穩定(ding)的純化(hua)技(ji)術(shu)，保證產(chan)品(pin)均(jun)能現(xian)貨供應和產(chan)品(pin)質(zhi)量的穩定(ding)性。

Amsbio

上(shang)海乾思生(sheng)物Amsbio品牌代(dai)理(li)專(zhuan)業(ye)經營進(jin)口胎牛(niu)血(xue)清(qing)、細(xi)胞(bao)因(yin)子、ELISA試劑(ji)盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生(sheng)物試劑(ji)、耗材(cai)、培養基、壹抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產(chan)品(pin)吸(xi)附均(jun)勻，吸(xi)附性好，空白值(zhi)低，孔底(di)透(tou)明度(du)高，代(dai)做(zuo)ELISA實驗等(deng)。完(wan)善(shan)的庫(ku)存及(ji)供應體(ti)系以(yi)及(ji)高效穩定(ding)的純化(hua)技(ji)術(shu)，保證產(chan)品(pin)均(jun)能現(xian)貨供應和產(chan)品(pin)質(zhi)量的穩定(ding)性。

怎樣查到(dao)壹個(ge)特(te)定(ding)細胞(bao)株的相關知識(shi)和(he)培(pei)養條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)的詳(xiang)細(xi)資(zi)料(liao)。打開(kai)ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈接，輸(shu)入(ru)細(xi)胞(bao)名(ming)稱(cheng)就可以(yi)搜索(suo)ATCC的細胞數(shu)據(ju)庫(ku)。數(shu)據(ju)庫(ku)中(zhong)有每(mei)壹種細胞(bao)的詳(xiang)細(xi)描(miao)述，包括細(xi)胞的來源(yuan)，培養和(he)凍(dong)存條(tiao)件，以(yi)及(ji)相關(guan)文獻等(deng)資(zi)料(liao)。
如(ru)何選(xuan)用特(te)殊細胞(bao)系培(pei)養基？
培(pei)養某(mou)類(lei)型(xing)細胞沒(mei)有(you)固(gu)定(ding)的培養條(tiao)件(jian)。MEM中(zhong)培養的細胞，很可能在(zai)DMEM或M199中(zhong)同樣(yang)容易(yi)生(sheng)長。總(zong)之，*MEM、DMEM做(zuo)貼(tie)壁細胞(bao)培養；RPMI1640做(zuo)懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)培養；各(ge)種目(mu)的無血(xue)清(qing)培(pei)養*AIMV培(pei)養基（SFM）。

測(ce)序(xu)實驗流(liu)程：
1 收集樣(yang)品
2 相關(guan)試(shi)劑(ji) 總(zong)RNA提(ti)取試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提取試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)), RNA 純化(hua)試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒光(guang)定(ding)量PCR預(yu)混試劑(ji))。
3 實驗儀器(qi) 熒光(guang)定(ding)量PCR儀; PCR儀;低(di)溫離心機(ji)。
4 總(zong)RNA提(ti)取
5 cDNA合(he)成 在(zai)0.5ml的離心管中(zhong)加入(ru)1µl模(mo)板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機(ji)引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水至15µl體(ti)系。混(hun)勻(yun)後(hou)70℃變性RNA 5分鐘(zhong)，冰上速(su)冷(leng)1分(fen)鐘，離心將(jiang)溶液(ye)收集(ji)至管底(di)加(jia)入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體(ti)系。PCR儀中(zhong)反應條件設置 37℃延伸60min，70℃保溫15min終止反應。合成好的cDNA置於 -20 ℃保存備(bei)用。
6 引物設計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實時定(ding)量PCR 按(an)以(yi)下反應體(ti)系進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊(you)引物F 1 ul，下(xia)遊引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀擴(kuo)增反應條件設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循(xun)環)。
8 PCR產(chan)物(wu)溶(rong)解曲(qu)線分析(xi) 將(jiang)所(suo)擴增的PCR 產(chan)物(wu)進(jin)行(xing)溶(rong)解曲(qu)線分析(xi)，單(dan)峰溶(rong)解曲(qu)線表示(shi)擴(kuo)增產(chan)物(wu)單(dan)壹，無非(fei)特(te)異(yi)性擴增產(chan)物(wu)。溶(rong)解曲(qu)線生(sheng)成的反應程序(xu)為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事(shi)項(xiang)：收集標(biao)本前(qian)必(bi)須清(qing)楚要(yao)檢測的成份(fen)是(shi)否足(zu)夠(gou)穩定(ding)，對(dui)收(shou)集(ji)後(hou)當(dang)天(tian)進行(xing)檢測的標(biao)本，儲(chu)存(cun)在(zai)4℃備(bei)用，如(ru)有特(te)殊原(yuan)因(yin)需(xu)要(yao)周(zhou)期(qi)收集(ji)標(biao)本，將(jiang)標(biao)本及(ji)時分(fen)裝後(hou)放在(zai)-20℃或-70℃條件(jian)下(xia)保存。避(bi)免(mian)反復凍(dong)融，標(biao)本2-8℃可保存48小(xiao)時(shi)，-20℃可保存1個(ge)月(yue)，-70度(du)可保存6個(ge)月(yue)，部(bu)分標(biao)本需(xu)添加抑(yi)肽(tai)酶(mei)。我(wo)公司(si)是國內信(xin)譽雙收的放心企業(ye)代(dai)理(li)商(shang)，具(ju)有(you)良好(hao)的市場信(xin)譽與口碑，專(zhuan)業(ye)的銷售和(he)技術(shu)服(fu)務(wu)團(tuan)隊，歡迎廣(guang)大師(shi)生(sheng)、研究機構等(deng)，洽商(shang)。

細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，可重發的情況有(you)哪(na)些？判(pan)定(ding)標(biao)準是(shi)什(shen)麽(me)？
　　（1）細胞運輸途中(zhong)遭(zao)遇(yu)的各(ge)種問(wen)題(ti)，細(xi)胞(bao)丟失、破(po)損(sun)、漏液(ye)等(deng)，重(zhong)發；
　　（2）凍(dong)存的細胞復蘇(su)後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)未存活(huo)，重發；
　　（3）存(cun)活的細胞靜置(zhi)24小(xiao)時(shi)後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)未存活(huo)，重發；
　　（4）凍(dong)存的細胞復蘇(su)後(hou)或存活(huo)的細胞靜置(zhi)4小(xiao)時(shi)後(hou)並且(qie)未開封，出(chu)現(xian)汙染(ran)，重發；
　　（5）視(shi)具(ju)體(ti)情況而(er)定(ding)。
細胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，不(bu)予以(yi)重發的情況有(you)哪(na)些？
　　（1）客戶(hu)造(zao)成細(xi)胞汙(wu)染，不(bu)重(zhong)發；
　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確操作(zuo)致細(xi)胞(bao)狀態不(bu)好(hao)，不(bu)重(zhong)發；
　　（3）細(xi)胞狀態不(bu)好(hao)，未提供細胞培養前(qian)3天(tian)照(zhao)片的，不(bu)重(zhong)發；
　　（4）細(xi)胞培養時(shi)經其它(ta)處(chu)理(li)的，不(bu)重(zhong)發；
　　（5）細(xi)胞收到(dao)2天(tian)內，未告知，不(bu)重(zhong)發；
　　（6）視(shi)具(ju)體(ti)情況而(er)定(ding)。