上(shang)海乾思(si)生(sheng)物AnaSpec品(pin)牌代理專(zhuan)業(ye)經營進口(kou)胎牛血清、細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生物試劑、耗材(cai)、培養(yang)基(ji)、壹抗(kang)、二抗、其產(chan)品(pin)吸附均勻(yun)，吸附性(xing)好，空白值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透(tou)明(ming)度(du)高(gao)，代做ELISA實(shi)驗等(deng)。完善(shan)的庫(ku)存(cun)及(ji)供(gong)應體(ti)系(xi)以(yi)及高效穩(wen)定的純(chun)化技術(shu)，保證產(chan)品(pin)均能(neng)現貨供應和產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的穩定性(xing)。

AnaSpec

上(shang)海乾思(si)生(sheng)物AnaSpec品(pin)牌代理專(zhuan)業(ye)經營進口(kou)胎牛血清、細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生物試劑、耗材(cai)、培養(yang)基(ji)、壹抗(kang)、二抗、其產(chan)品(pin)吸附均勻(yun)，吸附性(xing)好，空白值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透(tou)明(ming)度(du)高(gao)，代做ELISA實(shi)驗等(deng)。完善(shan)的庫(ku)存(cun)及(ji)供(gong)應體(ti)系(xi)以(yi)及高效穩(wen)定的純(chun)化技術(shu)，保證產(chan)品(pin)均能(neng)現貨供應和產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的穩定性(xing)。

怎(zen)樣查(zha)到(dao)壹個(ge)特定細(xi)胞(bao)株(zhu)的相(xiang)關(guan)知(zhi)識和培養(yang)條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了(le)絕大多數細(xi)胞(bao)的詳細資(zi)料(liao)。打(da)開(kai)ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸入細(xi)胞(bao)名(ming)稱(cheng)就(jiu)可以搜(sou)索ATCC的細胞(bao)數據(ju)庫(ku)。數據(ju)庫(ku)中有每(mei)壹種細(xi)胞(bao)的詳細描(miao)述，包括(kuo)細(xi)胞(bao)的來源，培養(yang)和凍存(cun)條件，以及(ji)相(xiang)關(guan)文(wen)獻(xian)等(deng)資料(liao)。
如(ru)何(he)選(xuan)用特殊細(xi)胞(bao)系(xi)培養(yang)基(ji)？
培養(yang)某(mou)類(lei)型(xing)細(xi)胞(bao)沒(mei)有固(gu)定的培養(yang)條件。MEM中培養(yang)的細胞(bao)，很(hen)可能在(zai)DMEM或(huo)M199中同樣容易生(sheng)長(chang)。總之，*MEM、DMEM做(zuo)貼壁細胞(bao)培養(yang)；RPMI1640做(zuo)懸浮(fu)細(xi)胞(bao)培養(yang)；各(ge)種目的無血清培養(yang)*AIMV培養(yang)基(ji)（SFM）。

測序實(shi)驗流程：
1 收(shou)集(ji)樣(yang)品(pin)
2 相(xiang)關(guan)試劑 總RNA提(ti)取試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取試劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶), RNA 純(chun)化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量(liang)PCR預(yu)混試劑)。
3 實(shi)驗儀(yi)器 熒光定量(liang)PCR儀(yi); PCR儀(yi);低(di)溫(wen)離(li)心機(ji)。
4 總RNA提(ti)取
5 cDNA合成 在(zai)0.5ml的離心管(guan)中加(jia)入1µl模(mo)板總RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機(ji)引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水至(zhi)15µl體(ti)系(xi)。混勻(yun)後70℃變(bian)性(xing)RNA 5分鐘(zhong)，冰上(shang)速(su)冷(leng)1分(fen)鐘，離心將溶(rong)液(ye)收集(ji)至(zhi)管底加(jia)入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水至(zhi)30µl體(ti)系(xi)。PCR儀(yi)中反應條件設置(zhi) 37℃延伸(shen)60min，70℃保(bao)溫15min終止(zhi)反(fan)應。合成好的cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保(bao)存(cun)備用。
6 引物設計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shi)時(shi)定量(liang)PCR 按(an)以下(xia)反應體(ti)系(xi)進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊引(yin)物F 1 ul，下(xia)遊引(yin)物R 1 ul;cDNA template 2ul。定量(liang)PCR儀(yi)擴增(zeng)反(fan)應條件設置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循環)。
8 PCR產(chan)物溶(rong)解(jie)曲線分析(xi) 將所擴增(zeng)的PCR 產(chan)物進(jin)行(xing)溶解(jie)曲線分析(xi)，單峰溶(rong)解(jie)曲線表示(shi)擴增(zeng)產(chan)物單壹，無非特異性(xing)擴增(zeng)產(chan)物。溶(rong)解(jie)曲線生成的反應(ying)程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意事項(xiang)：收集(ji)標(biao)本前必(bi)須清(qing)楚(chu)要(yao)檢測的成份是(shi)否(fou)足夠(gou)穩(wen)定，對(dui)收集(ji)後(hou)當(dang)天進(jin)行(xing)檢測的標本(ben)，儲(chu)存在(zai)4℃備用，如有特殊原因(yin)需(xu)要周(zhou)期收(shou)集(ji)標(biao)本，將標(biao)本及時(shi)分裝(zhuang)後(hou)放在(zai)-20℃或(huo)-70℃條件下保(bao)存(cun)。避免反(fan)復凍(dong)融(rong)，標本2-8℃可保存(cun)48小(xiao)時(shi)，-20℃可保存(cun)1個月(yue)，-70度(du)可保存(cun)6個月(yue)，部(bu)分(fen)標(biao)本需(xu)添加(jia)抑肽酶(mei)。我(wo)公(gong)司是(shi)國內(nei)信(xin)譽(yu)雙收的放心企(qi)業代(dai)理商，具(ju)有良(liang)好的市場(chang)信譽與(yu)口(kou)碑，專(zhuan)業(ye)的銷售(shou)和技術(shu)服務團隊，歡迎(ying)廣大師生(sheng)、研究(jiu)機(ji)構(gou)等(deng)，洽商(shang)。

細胞(bao)出現問題，可重發(fa)的情況有哪(na)些(xie)？判(pan)定標(biao)準是什麽(me)？
　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸(shu)途(tu)中遭(zao)遇的各種問題，細胞(bao)丟(diu)失(shi)、破損、漏液(ye)等(deng)，重發(fa)；
　　（2）凍存(cun)的細胞(bao)復蘇(su)後(hou)，絕大多數細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活(huo)，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存活(huo)的細胞(bao)靜(jing)置(zhi)24小(xiao)時(shi)後，絕(jue)大多數細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活(huo)，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍存(cun)的細胞(bao)復蘇(su)後(hou)或(huo)存(cun)活的細胞(bao)靜(jing)置(zhi)4小(xiao)時(shi)後並(bing)且(qie)未開(kai)封(feng)，出現汙染(ran)，重(zhong)發(fa)；
　　（5）視(shi)具體(ti)情況而定。
細(xi)胞(bao)出現問題，不(bu)予以(yi)重發(fa)的情況有哪(na)些(xie)？
　　（1）客(ke)戶(hu)造(zao)成細胞(bao)汙染(ran)，不(bu)重發(fa)；
　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確(que)操(cao)作(zuo)致(zhi)細(xi)胞(bao)狀態(tai)不(bu)好，不(bu)重發(fa)；
　　（3）細胞(bao)狀態(tai)不(bu)好，未提(ti)供(gong)細(xi)胞(bao)培養(yang)前3天照(zhao)片(pian)的，不(bu)重發(fa)；
　　（4）細胞(bao)培養(yang)時(shi)經其它處理的，不(bu)重發(fa)；
　　（5）細胞(bao)收(shou)到(dao)2天(tian)內(nei)，未告(gao)知(zhi)，不(bu)重發(fa)；
　　（6）視(shi)具體(ti)情況而定。