上海(hai)乾(qian)思生(sheng)物Anshlabs​品(pin)牌代(dai)理(li)專(zhuan)業(ye)經(jing)營(ying)進口(kou)胎牛(niu)血清(qing)、細(xi)胞(bao)因(yin)子、ELISA試劑盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體、生物試(shi)劑、耗(hao)材(cai)、培養(yang)基、壹(yi)抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產(chan)品(pin)吸附(fu)均勻，吸附性好(hao)，空白值(zhi)低(di)，孔底(di)透(tou)明度(du)高(gao)，代做ELISA實(shi)驗(yan)等。完(wan)善(shan)的庫(ku)存及供(gong)應體(ti)系以及高(gao)效穩定的(de)純(chun)化(hua)技術，保證產(chan)品(pin)均能(neng)現(xian)貨供(gong)應和(he)產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的穩定性。

Anshlabs

上(shang)海(hai)乾(qian)思生(sheng)物Anshlabs品(pin)牌代(dai)理(li)專(zhuan)業(ye)經(jing)營(ying)進口(kou)胎牛(niu)血清(qing)、細(xi)胞(bao)因(yin)子、ELISA試劑盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體、生物試(shi)劑、耗(hao)材(cai)、培養(yang)基、壹(yi)抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產(chan)品(pin)吸附(fu)均勻，吸附性好(hao)，空白值(zhi)低(di)，孔底(di)透(tou)明度(du)高(gao)，代做ELISA實(shi)驗(yan)等。完(wan)善(shan)的庫(ku)存及供(gong)應體(ti)系以及高(gao)效穩定的(de)純(chun)化(hua)技術，保證產(chan)品(pin)均能(neng)現(xian)貨供(gong)應和(he)產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的穩定性。

怎(zen)樣(yang)查(zha)到(dao)壹(yi)個特(te)定細(xi)胞(bao)株(zhu)的相關(guan)知識(shi)和(he)培(pei)養條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕大(da)多(duo)數細(xi)胞(bao)的(de)詳(xiang)細(xi)資(zi)料。打(da)開(kai)ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入細(xi)胞(bao)名(ming)稱就(jiu)可以搜索(suo)ATCC的細(xi)胞(bao)數據(ju)庫。數據(ju)庫中(zhong)有(you)每(mei)壹(yi)種(zhong)細(xi)胞(bao)的(de)詳(xiang)細(xi)描(miao)述(shu)，包(bao)括(kuo)細(xi)胞(bao)的(de)來(lai)源，培(pei)養和(he)凍存條(tiao)件(jian)，以及相關(guan)文獻(xian)等資料。
如(ru)何(he)選用特(te)殊細(xi)胞(bao)系(xi)培(pei)養基？
培(pei)養(yang)某類(lei)型細(xi)胞(bao)沒有(you)固(gu)定的(de)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)。MEM中培(pei)養的(de)細(xi)胞(bao)，很可能(neng)在(zai)DMEM或M199中同(tong)樣(yang)容易(yi)生長。總(zong)之，*MEM、DMEM做貼(tie)壁細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)；RPMI1640做懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)；各種(zhong)目(mu)的(de)無血清培(pei)養(yang)*AIMV培養(yang)基（SFM）。

測(ce)序(xu)實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1 收(shou)集(ji)樣品(pin)
2 相關(guan)試劑 總(zong)RNA提(ti)取試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取試劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄(lu)酶(mei)), RNA 純(chun)化(hua)試劑, RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR預混(hun)試劑)。
3 實(shi)驗(yan)儀器 熒光定(ding)量(liang)PCR儀; PCR儀;低(di)溫離(li)心(xin)機(ji)。
4 總(zong)RNA提(ti)取
5 cDNA合(he)成 在(zai)0.5ml的離(li)心(xin)管(guan)中加(jia)入(ru)1µl模(mo)板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引(yin)物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至15µl體(ti)系。混(hun)勻後70℃變(bian)性RNA 5分(fen)鐘，冰(bing)上(shang)速(su)冷1分(fen)鐘，離(li)心(xin)將(jiang)溶液(ye)收(shou)集至(zhi)管(guan)底(di)加(jia)入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體(ti)系。PCR儀中反應條(tiao)件(jian)設置 37℃延伸(shen)60min，70℃保溫15min終(zhong)止反應。合(he)成好(hao)的(de)cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保存備用。
6 引(yin)物設計與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成
7 實(shi)時(shi)定量(liang)PCR 按(an)以下反應體系(xi)進行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊引(yin)物F 1 ul，下遊引(yin)物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀擴增反應條(tiao)件(jian)設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huan))。
8 PCR產(chan)物溶解(jie)曲線(xian)分析 將(jiang)所(suo)擴(kuo)增的(de)PCR 產物進行(xing)溶解(jie)曲線(xian)分析，單峰(feng)溶解(jie)曲線(xian)表示擴增產(chan)物單壹(yi)，無(wu)非特(te)異性擴(kuo)增產(chan)物。溶解(jie)曲線(xian)生成的(de)反應程序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意事項：收集(ji)標(biao)本(ben)前(qian)必須(xu)清(qing)楚要(yao)檢測的(de)成份是(shi)否足(zu)夠穩定，對(dui)收集(ji)後當天進行(xing)檢測的(de)標(biao)本(ben)，儲(chu)存在(zai)4℃備用，如(ru)有(you)特(te)殊原(yuan)因需(xu)要(yao)周(zhou)期(qi)收(shou)集(ji)標本(ben)，將(jiang)標(biao)本(ben)及(ji)時(shi)分(fen)裝後放(fang)在(zai)-20℃或-70℃條(tiao)件(jian)下保存。避免(mian)反復凍融，標本(ben)2-8℃可(ke)保存48小時，-20℃可(ke)保存1個月，-70度可(ke)保存6個月，部分(fen)標(biao)本(ben)需(xu)添加(jia)抑(yi)肽(tai)酶(mei)。我(wo)公(gong)司(si)是國(guo)內信(xin)譽(yu)雙收的(de)放(fang)心(xin)企(qi)業代理(li)商(shang)，具有良好(hao)的(de)市(shi)場信(xin)譽(yu)與口(kou)碑(bei)，專(zhuan)業(ye)的(de)銷(xiao)售(shou)和(he)技術服務(wu)團(tuan)隊，歡迎(ying)廣(guang)大(da)師生(sheng)、研究機(ji)構(gou)等，洽商(shang)。

細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，可重發(fa)的(de)情(qing)況(kuang)有(you)哪些(xie)？判(pan)定(ding)標準是什(shen)麽(me)？
　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸途中遭(zao)遇的(de)各(ge)種(zhong)問(wen)題(ti)，細(xi)胞(bao)丟失、破損、漏(lou)液(ye)等，重發(fa)；
　　（2）凍存的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇後，絕(jue)大(da)多(duo)數細(xi)胞(bao)未(wei)存活，重發(fa)；
　　（3）存活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置(zhi)24小時後，絕大(da)多(duo)數細(xi)胞(bao)未(wei)存活，重發(fa)；
　　（4）凍存的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇後或(huo)存活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置(zhi)4小時後並且未(wei)開(kai)封(feng)，出(chu)現汙(wu)染(ran)，重發(fa)；
　　（5）視具(ju)體情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)。
細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，不予(yu)以重發(fa)的(de)情(qing)況(kuang)有(you)哪些(xie)？
　　（1）客(ke)戶(hu)造(zao)成細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)，不重發(fa)；
　　（2）客(ke)戶(hu)不正(zheng)確操(cao)作致(zhi)細(xi)胞(bao)狀態(tai)不好(hao)，不重發(fa)；
　　（3）細(xi)胞(bao)狀態(tai)不好(hao)，未(wei)提(ti)供(gong)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)前(qian)3天照(zhao)片的，不重發(fa)；
　　（4）細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)時經其(qi)它處理(li)的(de)，不重發(fa)；
　　（5）細(xi)胞(bao)收(shou)到(dao)2天內，未(wei)告(gao)知(zhi)，不重發(fa)；
　　（6）視具(ju)體情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)。