上(shang)海(hai)乾思生物(wu)ATCC品(pin)牌代(dai)理專(zhuan)業(ye)經(jing)營進口胎(tai)牛血(xue)清、細胞因(yin)子、ELISA試(shi)劑(ji)盒、細胞、抗(kang)體(ti)、生物(wu)試(shi)劑(ji)、耗材(cai)、培(pei)養基(ji)、壹抗(kang)、二(er)抗(kang)、其產品吸(xi)附均(jun)勻(yun)，吸(xi)附性(xing)好，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔底透(tou)明度(du)高(gao)，代(dai)做ELISA實(shi)驗等。完(wan)善的庫存(cun)及(ji)供(gong)應(ying)體系(xi)以(yi)及(ji)高(gao)效(xiao)穩定(ding)的純化(hua)技(ji)術(shu)，保證(zheng)產品(pin)均(jun)能(neng)現貨(huo)供應(ying)和(he)產品(pin)質量的穩定(ding)性(xing)。

ATCC

上(shang)海(hai)乾思生物(wu)ATCC品(pin)牌代(dai)理專(zhuan)業(ye)經(jing)營進口胎(tai)牛血(xue)清、細胞因(yin)子、ELISA試(shi)劑(ji)盒、細胞、抗(kang)體(ti)、生物(wu)試(shi)劑(ji)、耗材(cai)、培(pei)養基(ji)、壹抗(kang)、二(er)抗(kang)、其產品吸(xi)附均(jun)勻(yun)，吸(xi)附性(xing)好，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔底透(tou)明度(du)高(gao)，代(dai)做ELISA實(shi)驗等。完(wan)善的庫存(cun)及(ji)供(gong)應(ying)體系(xi)以(yi)及(ji)高(gao)效(xiao)穩定(ding)的純化(hua)技(ji)術(shu)，保證(zheng)產品(pin)均(jun)能(neng)現貨(huo)供應(ying)和(he)產品(pin)質量的穩定(ding)性(xing)。

怎(zen)樣查(zha)到壹個(ge)特定(ding)細胞株(zhu)的相(xiang)關知識和(he)培(pei)養條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了(le)絕(jue)大(da)多數細胞的詳(xiang)細資料。打(da)開ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入細胞名(ming)稱(cheng)就(jiu)可(ke)以(yi)搜(sou)索ATCC的細胞數(shu)據(ju)庫。數據(ju)庫中有(you)每壹種(zhong)細胞的詳(xiang)細描述(shu)，包(bao)括細胞的來(lai)源，培(pei)養和(he)凍存(cun)條(tiao)件，以及相(xiang)關文獻等資料。
如(ru)何選(xuan)用特殊(shu)細胞系(xi)培(pei)養基(ji)？
培(pei)養某(mou)類型(xing)細胞沒(mei)有(you)固定(ding)的培(pei)養條(tiao)件。MEM中培(pei)養的細胞，很(hen)可能(neng)在DMEM或(huo)M199中同(tong)樣容(rong)易(yi)生長(chang)。總之(zhi)，*MEM、DMEM做貼(tie)壁(bi)細胞培(pei)養；RPMI1640做(zuo)懸(xuan)浮(fu)細胞培(pei)養；各(ge)種(zhong)目(mu)的無(wu)血(xue)清培(pei)養*AIMV培(pei)養基(ji)（SFM）。

測序實(shi)驗流(liu)程(cheng)：
1 收集(ji)樣品(pin)
2 相關(guan)試(shi)劑(ji) 總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆轉錄酶), RNA 純化(hua)試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒光定(ding)量PCR預混(hun)試(shi)劑(ji))。
3 實(shi)驗儀器(qi) 熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀; PCR儀;低(di)溫離(li)心機。
4 總RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合(he)成(cheng) 在(zai)0.5ml的離(li)心管中加(jia)入(ru)1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機(ji)引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至15µl體(ti)系(xi)。混(hun)勻後(hou)70℃變(bian)性(xing)RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰(bing)上(shang)速(su)冷(leng)1分(fen)鐘，離(li)心將溶液收集(ji)至管底加(jia)入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體(ti)系(xi)。PCR儀中反(fan)應(ying)條件設置 37℃延(yan)伸60min，70℃保溫(wen)15min終止(zhi)反(fan)應(ying)。合成(cheng)好的cDNA置(zhi)於 -20 ℃保存(cun)備(bei)用。
6 引物(wu)設(she)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成(cheng)
7 實(shi)時定(ding)量PCR 按以(yi)下(xia)反(fan)應(ying)體系(xi)進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊引物(wu)F 1 ul，下(xia)遊引物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀擴增反(fan)應(ying)條件設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循環(huan))。
8 PCR產(chan)物(wu)溶(rong)解曲(qu)線分(fen)析 將所擴增的PCR 產(chan)物(wu)進(jin)行溶解(jie)曲(qu)線分(fen)析，單峰溶(rong)解(jie)曲(qu)線表(biao)示擴增產(chan)物(wu)單(dan)壹，無(wu)非(fei)特異性(xing)擴增產(chan)物(wu)。溶(rong)解曲(qu)線生成(cheng)的反(fan)應(ying)程(cheng)序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意事項：收集(ji)標(biao)本(ben)前(qian)必須清楚要檢測的成(cheng)份(fen)是(shi)否(fou)足(zu)夠(gou)穩定(ding)，對(dui)收集(ji)後(hou)當天進行檢測的標(biao)本(ben)，儲存(cun)在(zai)4℃備(bei)用，如有(you)特殊(shu)原(yuan)因(yin)需要周期收集(ji)標(biao)本(ben)，將標(biao)本(ben)及時分裝(zhuang)後(hou)放(fang)在(zai)-20℃或(huo)-70℃條(tiao)件下(xia)保存(cun)。避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)，標(biao)本(ben)2-8℃可保存(cun)48小(xiao)時，-20℃可保存(cun)1個(ge)月(yue)，-70度(du)可(ke)保存(cun)6個(ge)月(yue)，部(bu)分標本(ben)需添(tian)加(jia)抑(yi)肽酶。我(wo)公司(si)是(shi)國(guo)內信譽(yu)雙(shuang)收的放(fang)心企業(ye)代(dai)理商，具有(you)良(liang)好的市場信譽(yu)與口(kou)碑(bei)，專業(ye)的銷(xiao)售和(he)技(ji)術(shu)服(fu)務(wu)團隊(dui)，歡(huan)迎廣(guang)大師(shi)生、研究機構等，洽商。

細胞出現問(wen)題，可重(zhong)發(fa)的情(qing)況有(you)哪些(xie)？判定(ding)標(biao)準是什(shen)麽(me)？
　　（1）細胞運輸途中遭遇的各(ge)種(zhong)問(wen)題，細胞丟(diu)失(shi)、破損、漏(lou)液等，重發；
　　（2）凍存(cun)的細胞復(fu)蘇後(hou)，絕(jue)大(da)多數細胞未存(cun)活(huo)，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存(cun)活(huo)的細胞靜(jing)置24小(xiao)時後(hou)，絕(jue)大(da)多數細胞未存(cun)活(huo)，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍存(cun)的細胞復(fu)蘇後(hou)或(huo)存(cun)活(huo)的細胞靜(jing)置4小(xiao)時後(hou)並且(qie)未開(kai)封(feng)，出現汙(wu)染(ran)，重(zhong)發；
　　（5）視具體(ti)情(qing)況而(er)定(ding)。
細胞出現問(wen)題，不予以重發(fa)的情(qing)況有(you)哪些(xie)？
　　（1）客戶(hu)造成(cheng)細胞汙(wu)染(ran)，不重發(fa)；
　　（2）客戶(hu)不正(zheng)確(que)操(cao)作(zuo)致(zhi)細胞狀(zhuang)態不好，不重發(fa)；
　　（3）細胞狀(zhuang)態不好，未提(ti)供細胞培(pei)養前(qian)3天照片(pian)的，不重發(fa)；
　　（4）細胞培(pei)養時經其它(ta)處理的，不重發(fa)；
　　（5）細胞收到2天內，未告(gao)知(zhi)，不重發(fa)；
　　（6）視具體(ti)情(qing)況而(er)定(ding)。