上海乾思生物AURION​品牌(pai)代(dai)理(li)專業經(jing)營(ying)進(jin)口(kou)胎牛(niu)血(xue)清(qing)、細胞因子、ELISA試劑盒(he)、細胞、抗體(ti)、生物試劑、耗(hao)材(cai)、培養(yang)基(ji)、壹(yi)抗(kang)、二(er)抗(kang)、其產品(pin)吸附均勻(yun)，吸(xi)附性(xing)好，空白(bai)值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透(tou)明(ming)度(du)高，代(dai)做(zuo)ELISA實驗(yan)等(deng)。完(wan)善(shan)的(de)庫存及(ji)供應(ying)體(ti)系以及高效(xiao)穩定(ding)的(de)純(chun)化(hua)技術，保(bao)證產品(pin)均能(neng)現(xian)貨(huo)供應(ying)和(he)產品(pin)質(zhi)量的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)。

AURION

上海乾思生物AURION品牌(pai)代(dai)理(li)專業經(jing)營(ying)進(jin)口(kou)胎牛(niu)血(xue)清(qing)、細胞因子、ELISA試劑盒(he)、細胞、抗體(ti)、生物試劑、耗(hao)材(cai)、培養(yang)基(ji)、壹(yi)抗(kang)、二(er)抗(kang)、其產品(pin)吸附均勻(yun)，吸(xi)附性(xing)好，空白(bai)值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透(tou)明(ming)度(du)高，代(dai)做(zuo)ELISA實驗(yan)等(deng)。完(wan)善(shan)的(de)庫存及(ji)供應(ying)體(ti)系以及高效(xiao)穩定(ding)的(de)純(chun)化(hua)技術，保(bao)證產品(pin)均能(neng)現(xian)貨(huo)供應(ying)和(he)產品(pin)質(zhi)量的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)。

怎樣查到壹(yi)個(ge)特(te)定(ding)細(xi)胞株(zhu)的(de)相關(guan)知(zhi)識和(he)培養(yang)條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集了(le)絕大(da)多(duo)數細胞的詳(xiang)細(xi)資料。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入細胞名稱就可(ke)以(yi)搜索ATCC的細(xi)胞數據(ju)庫。數據(ju)庫中(zhong)有每(mei)壹種(zhong)細胞的詳(xiang)細(xi)描述(shu)，包(bao)括(kuo)細胞的來源(yuan)，培養(yang)和(he)凍存條(tiao)件(jian)，以(yi)及(ji)相關(guan)文(wen)獻等(deng)資料(liao)。
如何(he)選(xuan)用特(te)殊(shu)細胞系培養(yang)基(ji)？
培養(yang)某(mou)類型細(xi)胞沒有固定(ding)的(de)培養(yang)條(tiao)件(jian)。MEM中(zhong)培養(yang)的(de)細胞，很可(ke)能(neng)在(zai)DMEM或M199中同樣容易(yi)生(sheng)長。總之，*MEM、DMEM做(zuo)貼(tie)壁細胞培養(yang)；RPMI1640做(zuo)懸浮(fu)細胞培養(yang)；各(ge)種目的(de)無(wu)血(xue)清(qing)培養(yang)*AIMV培養(yang)基(ji)（SFM）。

測序(xu)實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1 收(shou)集樣(yang)品
2 相關(guan)試劑 總(zong)RNA提(ti)取(qu)試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取(qu)試劑), M-MLV(cDNA逆轉錄(lu)酶), RNA 純化(hua)試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定(ding)量PCR預混(hun)試劑)。
3 實(shi)驗儀(yi)器(qi) 熒光定(ding)量PCR儀(yi); PCR儀(yi);低(di)溫離(li)心(xin)機(ji)。
4 總RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合成(cheng) 在(zai)0.5ml的(de)離心管(guan)中加(jia)入(ru)1µl模板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機(ji)引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至(zhi)15µl體(ti)系。混(hun)勻後70℃變(bian)性(xing)RNA 5分鐘(zhong)，冰上(shang)速冷1分鐘，離心(xin)將(jiang)溶液(ye)收(shou)集至(zhi)管(guan)底(di)加(jia)入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至(zhi)30µl體(ti)系。PCR儀中反(fan)應(ying)條(tiao)件(jian)設(she)置 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫15min終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)。合(he)成(cheng)好的cDNA置於 -20 ℃保存備(bei)用。
6 引(yin)物設(she)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成
7 實(shi)時(shi)定(ding)量PCR 按以下(xia)反(fan)應(ying)體(ti)系進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引物F 1 ul，下(xia)遊引(yin)物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀(yi)擴(kuo)增反(fan)應(ying)條(tiao)件(jian)設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循(xun)環(huan))。
8 PCR產物溶解曲線(xian)分(fen)析(xi) 將(jiang)所擴(kuo)增(zeng)的PCR 產物進(jin)行(xing)溶解曲線(xian)分(fen)析(xi)，單峰(feng)溶解曲線(xian)表示擴(kuo)增(zeng)產物單壹(yi)，無(wu)非(fei)特異性(xing)擴增(zeng)產物。溶解曲線(xian)生(sheng)成(cheng)的(de)反(fan)應(ying)程(cheng)序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意(yi)事(shi)項：收(shou)集標(biao)本前(qian)必(bi)須清(qing)楚要(yao)檢(jian)測的(de)成(cheng)份(fen)是(shi)否(fou)足夠穩定(ding)，對(dui)收(shou)集後當天(tian)進(jin)行(xing)檢(jian)測的(de)標(biao)本(ben)，儲(chu)存在(zai)4℃備(bei)用，如(ru)有(you)特殊原(yuan)因(yin)需要(yao)周(zhou)期收(shou)集標(biao)本，將標(biao)本(ben)及時分裝(zhuang)後放在(zai)-20℃或-70℃條件(jian)下(xia)保存。避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)，標本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存48小(xiao)時(shi)，-20℃可(ke)保(bao)存1個(ge)月(yue)，-70度可(ke)保(bao)存6個(ge)月(yue)，部分標本(ben)需添加(jia)抑(yi)肽酶。我公司是(shi)國內信(xin)譽雙(shuang)收(shou)的放心(xin)企業代(dai)理(li)商(shang)，具有(you)良好的市(shi)場信(xin)譽與(yu)口(kou)碑(bei)，專業的(de)銷(xiao)售和(he)技術服(fu)務(wu)團隊(dui)，歡(huan)迎(ying)廣(guang)大(da)師(shi)生(sheng)、研(yan)究(jiu)機(ji)構等(deng)，洽商(shang)。

細(xi)胞出現(xian)問(wen)題，可(ke)重發的(de)情況(kuang)有(you)哪(na)些？判(pan)定(ding)標(biao)準(zhun)是(shi)什(shen)麽(me)？
　　（1）細(xi)胞運輸途(tu)中(zhong)遭遇的各(ge)種問(wen)題(ti)，細(xi)胞丟(diu)失、破損、漏(lou)液(ye)等，重發；
　　（2）凍存的(de)細(xi)胞復蘇後，絕(jue)大(da)多(duo)數細胞未存活，重發；
　　（3）存活的細(xi)胞靜置24小時後，絕(jue)大(da)多(duo)數細胞未存活，重發；
　　（4）凍存的(de)細(xi)胞復蘇後或存活的細(xi)胞靜置4小時後並且未開封，出現(xian)汙(wu)染，重發；
　　（5）視(shi)具體(ti)情況(kuang)而(er)定(ding)。
細(xi)胞出現(xian)問(wen)題，不予以重發的(de)情況(kuang)有(you)哪(na)些？
　　（1）客(ke)戶造成(cheng)細(xi)胞汙(wu)染，不重發；
　　（2）客(ke)戶不正確(que)操(cao)作(zuo)致細胞狀(zhuang)態(tai)不好，不重發；
　　（3）細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)不好，未提(ti)供細(xi)胞培養(yang)前(qian)3天照片的(de)，不重發；
　　（4）細(xi)胞培養(yang)時(shi)經(jing)其它處(chu)理(li)的，不重發；
　　（5）細(xi)胞收(shou)到2天(tian)內，未告(gao)知(zhi)，不重發；
　　（6）視(shi)具體(ti)情況(kuang)而(er)定(ding)。