上海乾思(si)生物AUSTRAL Biologicals品(pin)牌(pai)代理專(zhuan)業經營進口胎牛(niu)血清、細胞(bao)因(yin)子、ELISA試劑盒(he)、細胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生物試劑、耗(hao)材、培養基、壹(yi)抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產(chan)品(pin)吸附(fu)均(jun)勻(yun)，吸附(fu)性(xing)好，空(kong)白值(zhi)低(di)，孔(kong)底透(tou)明(ming)度(du)高(gao)，代做ELISA實(shi)驗(yan)等。完(wan)善(shan)的庫(ku)存及(ji)供應體(ti)系以及(ji)高(gao)效(xiao)穩(wen)定(ding)的純(chun)化技(ji)術(shu)，保證產(chan)品(pin)均(jun)能現(xian)貨供應和(he)產(chan)品(pin)質量(liang)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)。

AUSTRAL Biologicals

上(shang)海乾思(si)生物AUSTRAL Biologicals品(pin)牌(pai)代理專(zhuan)業經營進口胎牛(niu)血清、細胞(bao)因(yin)子、ELISA試劑盒(he)、細胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生物試劑、耗(hao)材、培養基、壹(yi)抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產(chan)品(pin)吸附(fu)均(jun)勻(yun)，吸附(fu)性(xing)好，空(kong)白值(zhi)低(di)，孔(kong)底透(tou)明(ming)度(du)高(gao)，代做ELISA實(shi)驗(yan)等。完(wan)善(shan)的庫(ku)存及(ji)供應體(ti)系以及(ji)高(gao)效(xiao)穩(wen)定(ding)的純(chun)化技(ji)術(shu)，保證產(chan)品(pin)均(jun)能現(xian)貨供應和(he)產(chan)品(pin)質量(liang)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)。

怎樣查到壹(yi)個特(te)定(ding)細胞(bao)株的相(xiang)關(guan)知識(shi)和培養條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了絕(jue)大(da)多數(shu)細胞(bao)的詳細資(zi)料(liao)。打開ATCC網頁(ye)的Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸(shu)入細(xi)胞(bao)名稱就可(ke)以(yi)搜(sou)索(suo)ATCC的細(xi)胞(bao)數(shu)據庫(ku)。數(shu)據庫(ku)中(zhong)有(you)每(mei)壹(yi)種(zhong)細胞(bao)的詳細描(miao)述(shu)，包括細胞(bao)的來源，培養和(he)凍(dong)存條(tiao)件，以(yi)及(ji)相(xiang)關(guan)文獻等(deng)資(zi)料(liao)。
如何(he)選用特殊(shu)細胞(bao)系培養基？
培養某(mou)類(lei)型(xing)細(xi)胞(bao)沒有固(gu)定(ding)的培養條(tiao)件。MEM中(zhong)培養的(de)細胞(bao)，很(hen)可(ke)能(neng)在(zai)DMEM或M199中同樣容(rong)易(yi)生長(chang)。總(zong)之，*MEM、DMEM做(zuo)貼(tie)壁細胞(bao)培養；RPMI1640做(zuo)懸浮(fu)細胞(bao)培養；各(ge)種(zhong)目的無(wu)血(xue)清培養*AIMV培養基（SFM）。

測(ce)序(xu)實(shi)驗(yan)流程：
1 收集(ji)樣品(pin)
2 相(xiang)關(guan)試劑 總(zong)RNA提(ti)取試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取試劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR預(yu)混(hun)試劑)。
3 實(shi)驗(yan)儀器(qi) 熒光定(ding)量(liang)PCR儀; PCR儀;低(di)溫(wen)離心(xin)機(ji)。
4 總RNA提(ti)取
5 cDNA合(he)成 在0.5ml的離心(xin)管(guan)中加入1µl模(mo)板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨機引(yin)物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至(zhi)15µl體(ti)系。混勻後(hou)70℃變(bian)性(xing)RNA 5分鐘(zhong)，冰(bing)上速(su)冷1分鐘(zhong)，離心(xin)將(jiang)溶液收集(ji)至(zhi)管(guan)底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至(zhi)30µl體(ti)系。PCR儀中反應條(tiao)件設(she)置(zhi) 37℃延伸(shen)60min，70℃保溫(wen)15min終止(zhi)反應。合(he)成好的(de)cDNA置於(yu) -20 ℃保存備用。
6 引(yin)物設(she)計與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shi)時定(ding)量(liang)PCR 按(an)以(yi)下反應體(ti)系進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引(yin)物F 1 ul，下遊引(yin)物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀擴增反應條(tiao)件設(she)置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循(xun)環)。
8 PCR產(chan)物(wu)溶解曲線分析(xi) 將所擴增的(de)PCR 產(chan)物(wu)進行溶解曲線分析(xi)，單(dan)峰(feng)溶解曲線表示(shi)擴增產(chan)物(wu)單(dan)壹(yi)，無(wu)非(fei)特(te)異性(xing)擴增產(chan)物(wu)。溶解曲線生成的反應程(cheng)序(xu)為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事項(xiang)：收集(ji)標本前必須清楚(chu)要檢測的成份是否足夠(gou)穩(wen)定(ding)，對收(shou)集(ji)後(hou)當(dang)天進行檢測(ce)的(de)標本，儲存在4℃備用，如有(you)特殊(shu)原(yuan)因(yin)需(xu)要周期收(shou)集(ji)標本，將標本及(ji)時(shi)分裝(zhuang)後(hou)放在-20℃或-70℃條(tiao)件下保存。避免(mian)反復(fu)凍(dong)融，標本2-8℃可(ke)保存48小(xiao)時，-20℃可(ke)保存1個月，-70度(du)可(ke)保存6個月，部分標本需(xu)添加抑(yi)肽(tai)酶。我(wo)公(gong)司(si)是國(guo)內(nei)信譽(yu)雙收的(de)放心(xin)企(qi)業(ye)代理商(shang)，具有(you)良好的(de)市(shi)場信譽(yu)與(yu)口碑(bei)，專(zhuan)業的(de)銷售和技(ji)術(shu)服(fu)務團(tuan)隊(dui)，歡迎(ying)廣(guang)大(da)師(shi)生、研究(jiu)機構(gou)等，洽(qia)商。

細胞(bao)出現問(wen)題，可(ke)重(zhong)發(fa)的情(qing)況有(you)哪(na)些？判(pan)定(ding)標準(zhun)是什麽(me)？
　　（1）細(xi)胞(bao)運輸(shu)途(tu)中(zhong)遭遇的各(ge)種(zhong)問(wen)題，細(xi)胞(bao)丟失、破(po)損(sun)、漏(lou)液等，重(zhong)發(fa)；
　　（2）凍(dong)存的細胞(bao)復蘇(su)後(hou)，絕大(da)多數(shu)細胞(bao)未存活，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存活的細胞(bao)靜置24小(xiao)時後(hou)，絕大(da)多數(shu)細胞(bao)未存活，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍(dong)存的細胞(bao)復蘇(su)後(hou)或存活的細胞(bao)靜置4小(xiao)時後(hou)並(bing)且未開(kai)封，出現汙(wu)染(ran)，重(zhong)發(fa)；
　　（5）視具體(ti)情(qing)況而定(ding)。
細胞(bao)出現問(wen)題，不(bu)予以(yi)重(zhong)發(fa)的情(qing)況有(you)哪(na)些？
　　（1）客(ke)戶(hu)造(zao)成細胞(bao)汙染(ran)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（2）客戶不(bu)正(zheng)確(que)操(cao)作致細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（3）細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，未提(ti)供細胞(bao)培養前3天照片的(de)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（4）細胞(bao)培養時(shi)經其(qi)它處理(li)的，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（5）細胞(bao)收到2天內，未告(gao)知，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（6）視具體(ti)情(qing)況而定(ding)。