上海乾思生物(wu)Bachem品牌(pai)代理專(zhuan)業(ye)經(jing)營(ying)進口(kou)胎(tai)牛(niu)血清(qing)、細胞因(yin)子、ELISA試劑盒、細胞、抗(kang)體、生物(wu)試劑、耗(hao)材(cai)、培(pei)養基、壹(yi)抗(kang)、二抗、其產品吸附均(jun)勻，吸附性好，空(kong)白值(zhi)低，孔底透明度(du)高，代做ELISA實驗等(deng)。完(wan)善的庫(ku)存(cun)及供(gong)應(ying)體系(xi)以(yi)及(ji)高效(xiao)穩(wen)定(ding)的純化技術，保(bao)證產品均能現貨供應(ying)和(he)產品質量(liang)的穩(wen)定(ding)性。

Bachem

上海乾思生物(wu)Bachem品牌(pai)代理專(zhuan)業(ye)經(jing)營(ying)進口(kou)胎(tai)牛(niu)血清(qing)、細胞因(yin)子、ELISA試劑盒、細胞、抗(kang)體、生物(wu)試劑、耗(hao)材(cai)、培(pei)養基、壹(yi)抗(kang)、二抗、其產品吸附均(jun)勻，吸附性好，空(kong)白值(zhi)低，孔底透明度(du)高，代做ELISA實驗等(deng)。完(wan)善的庫(ku)存(cun)及供(gong)應(ying)體系(xi)以(yi)及(ji)高效(xiao)穩(wen)定(ding)的純化技術，保(bao)證產品均能現貨供應(ying)和(he)產品質量(liang)的穩(wen)定(ding)性。

怎樣(yang)查到(dao)壹(yi)個特(te)定(ding)細胞株的相關(guan)知識和(he)培養(yang)條件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了(le)絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細胞的詳細資(zi)料(liao)。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入(ru)細胞名(ming)稱(cheng)就(jiu)可(ke)以搜(sou)索(suo)ATCC的細胞數(shu)據庫(ku)。數(shu)據庫(ku)中(zhong)有(you)每(mei)壹種細胞的詳細描(miao)述(shu)，包括(kuo)細胞的來源，培養(yang)和(he)凍存(cun)條件(jian)，以(yi)及(ji)相(xiang)關(guan)文(wen)獻等(deng)資(zi)料(liao)。
如(ru)何選用(yong)特(te)殊細胞系(xi)培(pei)養(yang)基？
培(pei)養(yang)某類(lei)型細胞沒(mei)有(you)固定(ding)的培養(yang)條(tiao)件(jian)。MEM中(zhong)培(pei)養(yang)的細胞，很(hen)可(ke)能在DMEM或M199中(zhong)同樣(yang)容(rong)易生長。總(zong)之，*MEM、DMEM做貼(tie)壁(bi)細胞培(pei)養(yang)；RPMI1640做懸浮(fu)細胞培(pei)養(yang)；各種目的無(wu)血(xue)清(qing)培養*AIMV培(pei)養(yang)基（SFM）。

測(ce)序(xu)實驗流程：
1 收集(ji)樣(yang)品
2 相關(guan)試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR預混(hun)試劑)。
3 實驗儀器 熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀; PCR儀;低溫離(li)心機。
4 總(zong)RNA提取
5 cDNA合(he)成 在(zai)0.5ml的離心管中加入(ru)1µl模板總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至15µl體系(xi)。混(hun)勻(yun)後(hou)70℃變性RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰(bing)上速冷(leng)1分(fen)鐘(zhong)，離心將溶(rong)液(ye)收集(ji)至管底加入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至30µl體系(xi)。PCR儀中反(fan)應(ying)條件(jian)設(she)置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫15min終(zhong)止(zhi)反應(ying)。合(he)成好(hao)的cDNA置於 -20 ℃保(bao)存(cun)備用(yong)。
6 引(yin)物(wu)設(she)計(ji)與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成
7 實時(shi)定(ding)量(liang)PCR 按以(yi)下(xia)反(fan)應(ying)體系(xi)進(jin)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引(yin)物(wu)F 1 ul，下(xia)遊(you)引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀擴增反(fan)應(ying)條件(jian)設(she)置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循(xun)環(huan))。
8 PCR產物(wu)溶(rong)解曲(qu)線(xian)分(fen)析 將(jiang)所擴增的PCR 產物(wu)進(jin)行溶(rong)解曲(qu)線(xian)分(fen)析，單(dan)峰溶(rong)解曲(qu)線(xian)表示(shi)擴增產物(wu)單(dan)壹，無(wu)非(fei)特(te)異(yi)性擴增產物(wu)。溶(rong)解曲(qu)線(xian)生(sheng)成的反應(ying)程序(xu)為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意事項(xiang)：收(shou)集(ji)標(biao)本前(qian)必(bi)須(xu)清(qing)楚要檢(jian)測(ce)的成份(fen)是否足夠(gou)穩(wen)定(ding)，對(dui)收(shou)集(ji)後(hou)當天進行檢(jian)測(ce)的標本(ben)，儲(chu)存(cun)在4℃備用(yong)，如(ru)有(you)特(te)殊原(yuan)因需要周期收集(ji)標(biao)本，將標本(ben)及(ji)時(shi)分(fen)裝(zhuang)後放在(zai)-20℃或-70℃條(tiao)件(jian)下(xia)保(bao)存(cun)。避免反復(fu)凍(dong)融，標(biao)本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存(cun)48小時(shi)，-20℃可(ke)保(bao)存(cun)1個月(yue)，-70度(du)可(ke)保(bao)存(cun)6個月(yue)，部分(fen)標本(ben)需添加抑(yi)肽(tai)酶。我(wo)公(gong)司是國內(nei)信(xin)譽雙收(shou)的放心企業代理商，具(ju)有(you)良好的市場信(xin)譽與口(kou)碑(bei)，專(zhuan)業(ye)的銷售(shou)和(he)技術服(fu)務團(tuan)隊，歡(huan)迎(ying)廣(guang)大(da)師生、研(yan)究機構(gou)等(deng)，洽商。

細胞出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，可(ke)重發的情況有(you)哪(na)些(xie)？判(pan)定(ding)標(biao)準(zhun)是什麽(me)？
　　（1）細胞運(yun)輸途(tu)中遭(zao)遇(yu)的各種問(wen)題(ti)，細胞丟(diu)失(shi)、破(po)損(sun)、漏液(ye)等，重(zhong)發；
　　（2）凍存(cun)的細胞復(fu)蘇(su)後，絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細胞未(wei)存(cun)活(huo)，重發(fa)；
　　（3）存(cun)活(huo)的細胞靜置24小時(shi)後，絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細胞未(wei)存(cun)活(huo)，重發(fa)；
　　（4）凍存(cun)的細胞復(fu)蘇(su)後或存(cun)活(huo)的細胞靜置4小時(shi)後並且未(wei)開封(feng)，出(chu)現(xian)汙(wu)染(ran)，重發(fa)；
　　（5）視具(ju)體情況而(er)定(ding)。
細胞出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，不予以(yi)重發的情況有(you)哪(na)些(xie)？
　　（1）客戶造(zao)成細胞汙(wu)染(ran)，不重發(fa)；
　　（2）客戶不正確(que)操(cao)作致細胞狀(zhuang)態不好，不重發(fa)；
　　（3）細胞狀(zhuang)態不好，未(wei)提供細胞培(pei)養(yang)前(qian)3天(tian)照(zhao)片的，不重發(fa)；
　　（4）細胞培(pei)養(yang)時(shi)經(jing)其(qi)它(ta)處(chu)理的，不重發(fa)；
　　（5）細胞收(shou)到(dao)2天(tian)內(nei)，未(wei)告知，不重發(fa)；
　　（6）視具(ju)體情況而(er)定(ding)。