上海(hai)乾思(si)生(sheng)物(wu)BellBrook Labs品(pin)牌(pai)代理專(zhuan)業(ye)經(jing)營(ying)進(jin)口胎(tai)牛(niu)血清(qing)、細(xi)胞(bao)因子、ELISA試(shi)劑盒、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生(sheng)物(wu)試(shi)劑、耗材、培(pei)養基(ji)、壹抗(kang)、二(er)抗(kang)、其(qi)產品(pin)吸(xi)附(fu)均勻，吸(xi)附(fu)性好，空(kong)白值低，孔底(di)透(tou)明(ming)度高(gao)，代做ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完善(shan)的(de)庫存及(ji)供(gong)應體(ti)系以(yi)及(ji)高(gao)效(xiao)穩(wen)定(ding)的(de)純化技術(shu)，保(bao)證產(chan)品(pin)均(jun)能(neng)現(xian)貨供(gong)應和(he)產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的穩定(ding)性(xing)。

BellBrook Labs

上海(hai)乾思(si)生(sheng)物(wu)BellBrook Labs品(pin)牌(pai)代理專(zhuan)業(ye)經(jing)營(ying)進(jin)口胎(tai)牛(niu)血清(qing)、細(xi)胞(bao)因子、ELISA試(shi)劑盒、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生(sheng)物(wu)試(shi)劑、耗材、培(pei)養基(ji)、壹抗(kang)、二(er)抗(kang)、其(qi)產品(pin)吸(xi)附(fu)均勻，吸(xi)附(fu)性好，空(kong)白值低，孔底(di)透(tou)明(ming)度高(gao)，代做ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完善(shan)的(de)庫存及(ji)供(gong)應體(ti)系以(yi)及(ji)高(gao)效(xiao)穩(wen)定(ding)的(de)純化技術(shu)，保(bao)證產(chan)品(pin)均(jun)能(neng)現(xian)貨供(gong)應和(he)產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的穩定(ding)性(xing)。

怎樣查(zha)到壹個(ge)特(te)定(ding)細(xi)胞(bao)株的(de)相(xiang)關(guan)知(zhi)識和(he)培(pei)養(yang)條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕(jue)大(da)多數(shu)細(xi)胞(bao)的(de)詳(xiang)細(xi)資料。打(da)開(kai)ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈接，輸入(ru)細(xi)胞(bao)名(ming)稱(cheng)就(jiu)可以(yi)搜索(suo)ATCC的(de)細(xi)胞(bao)數(shu)據(ju)庫。數據(ju)庫中有每壹種(zhong)細胞(bao)的(de)詳(xiang)細(xi)描述(shu)，包括細胞(bao)的(de)來(lai)源(yuan)，培養和(he)凍(dong)存(cun)條(tiao)件，以(yi)及(ji)相(xiang)關(guan)文(wen)獻等資料。
如(ru)何選用(yong)特(te)殊細(xi)胞(bao)系培養基(ji)？
培養(yang)某類型(xing)細(xi)胞(bao)沒(mei)有固定(ding)的(de)培養(yang)條件。MEM中培養(yang)的細胞(bao)，很(hen)可(ke)能(neng)在DMEM或M199中同樣容(rong)易生(sheng)長(chang)。總(zong)之(zhi)，*MEM、DMEM做貼壁(bi)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)；RPMI1640做懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)培(pei)養(yang)；各(ge)種(zhong)目的無(wu)血清(qing)培(pei)養*AIMV培養(yang)基(ji)（SFM）。

測序實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1 收集(ji)樣品(pin)
2 相(xiang)關(guan)試(shi)劑 總(zong)RNA提取試(shi)劑TREzol Reagent (RNA提取試(shi)劑), M-MLV(cDNA逆轉(zhuan)錄酶(mei)), RNA 純化試(shi)劑, RealqPCR MasterMix (熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR預混(hun)試(shi)劑)。
3 實(shi)驗(yan)儀器 熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀; PCR儀;低溫(wen)離(li)心(xin)機。
4 總(zong)RNA提取
5 cDNA合(he)成(cheng) 在0.5ml的離(li)心(xin)管中加入(ru)1µl模(mo)板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機(ji)引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體(ti)系。混(hun)勻(yun)後(hou)70℃變(bian)性(xing)RNA 5分鐘，冰上(shang)速(su)冷(leng)1分鐘，離(li)心(xin)將溶(rong)液收集(ji)至管底(di)加入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體(ti)系。PCR儀中(zhong)反應條件設(she)置 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終止反應。合(he)成(cheng)好的(de)cDNA置於 -20 ℃保(bao)存備(bei)用。
6 引(yin)物(wu)設(she)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成(cheng)
7 實(shi)時(shi)定(ding)量(liang)PCR 按以(yi)下反應體(ti)系進(jin)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊引(yin)物(wu)F 1 ul，下遊(you)引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀擴增(zeng)反應條件設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循(xun)環(huan))。
8 PCR產(chan)物(wu)溶解(jie)曲(qu)線(xian)分析 將(jiang)所(suo)擴增(zeng)的(de)PCR 產(chan)物(wu)進(jin)行溶(rong)解曲(qu)線(xian)分析，單(dan)峰溶解曲(qu)線(xian)表(biao)示(shi)擴增(zeng)產(chan)物(wu)單壹(yi)，無非特(te)異性(xing)擴增(zeng)產(chan)物(wu)。溶解(jie)曲(qu)線(xian)生(sheng)成(cheng)的(de)反應程序(xu)為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事(shi)項：收集(ji)標(biao)本(ben)前(qian)必須清(qing)楚(chu)要檢(jian)測的成(cheng)份(fen)是(shi)否足(zu)夠穩定(ding)，對收集(ji)後(hou)當天進(jin)行檢(jian)測的標(biao)本(ben)，儲存(cun)在4℃備用，如有特(te)殊原(yuan)因需要周(zhou)期收集(ji)標(biao)本(ben)，將標(biao)本(ben)及(ji)時(shi)分裝後(hou)放(fang)在-20℃或-70℃條件下保(bao)存。避(bi)免(mian)反復凍(dong)融，標(biao)本(ben)2-8℃可保(bao)存48小時(shi)，-20℃可保(bao)存1個(ge)月，-70度可(ke)保(bao)存6個(ge)月，部分標(biao)本(ben)需添(tian)加抑肽(tai)酶(mei)。我(wo)公(gong)司(si)是國內信(xin)譽雙收的放(fang)心(xin)企業(ye)代理商(shang)，具有良好的(de)市場(chang)信譽與口(kou)碑，專(zhuan)業(ye)的(de)銷(xiao)售(shou)和(he)技(ji)術(shu)服務團(tuan)隊(dui)，歡迎(ying)廣大師生(sheng)、研(yan)究(jiu)機(ji)構(gou)等(deng)，洽(qia)商(shang)。

細胞(bao)出(chu)現(xian)問題，可重發的情況有哪些(xie)？判定(ding)標(biao)準(zhun)是什(shen)麽？
　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸途中(zhong)遭遇(yu)的(de)各(ge)種(zhong)問題，細胞(bao)丟(diu)失(shi)、破(po)損、漏液等(deng)，重(zhong)發；
　　（2）凍存的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇(su)後(hou)，絕(jue)大(da)多數(shu)細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活(huo)，重發；
　　（3）存活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置(zhi)24小時(shi)後(hou)，絕(jue)大(da)多數(shu)細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活(huo)，重發；
　　（4）凍存的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇(su)後(hou)或(huo)存(cun)活(huo)的細胞(bao)靜(jing)置(zhi)4小時(shi)後(hou)並且未(wei)開(kai)封，出(chu)現(xian)汙染，重(zhong)發；
　　（5）視(shi)具體(ti)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)。
細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問題，不予以(yi)重(zhong)發的情況有哪些(xie)？
　　（1）客(ke)戶造成(cheng)細胞(bao)汙(wu)染，不(bu)重發；
　　（2）客戶不正(zheng)確操作致細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，不(bu)重發；
　　（3）細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，未(wei)提供細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)前(qian)3天照片(pian)的(de)，不重發；
　　（4）細胞(bao)培(pei)養(yang)時(shi)經其(qi)它處理(li)的，不重(zhong)發；
　　（5）細胞(bao)收到2天內，未(wei)告(gao)知，不(bu)重發；
　　（6）視(shi)具體(ti)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)。