上海(hai)乾(qian)思(si)生(sheng)物(wu)Cal Bioreagents​品(pin)牌代(dai)理(li)專(zhuan)業經營(ying)進(jin)口胎牛(niu)血(xue)清(qing)、細胞因子、ELISA試劑(ji)盒(he)、細胞、抗體、生(sheng)物(wu)試劑(ji)、耗(hao)材(cai)、培養基(ji)、壹抗、二抗、其(qi)產品(pin)吸附(fu)均勻(yun)，吸(xi)附(fu)性(xing)好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔底(di)透明(ming)度(du)高，代(dai)做ELISA實驗等。完善的庫(ku)存(cun)及供(gong)應體系(xi)以及(ji)高效穩定的(de)純(chun)化(hua)技(ji)術，保(bao)證(zheng)產品(pin)均能(neng)現(xian)貨供(gong)應和產品(pin)質(zhi)量(liang)的穩定(ding)性(xing)。

Cal Bioreagents

上海(hai)乾(qian)思(si)生(sheng)物(wu)Cal Bioreagents品(pin)牌代(dai)理(li)專(zhuan)業經營(ying)進(jin)口胎牛(niu)血(xue)清(qing)、細胞因子、ELISA試劑(ji)盒(he)、細胞、抗體、生(sheng)物(wu)試劑(ji)、耗(hao)材(cai)、培養基(ji)、壹抗、二抗、其(qi)產品(pin)吸附(fu)均勻(yun)，吸(xi)附(fu)性(xing)好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔底(di)透明(ming)度(du)高，代(dai)做ELISA實驗等。完善的庫(ku)存(cun)及供(gong)應體系(xi)以及(ji)高效穩定的(de)純(chun)化(hua)技(ji)術，保(bao)證(zheng)產品(pin)均能(neng)現(xian)貨供(gong)應和產品(pin)質(zhi)量(liang)的穩定(ding)性(xing)。

怎樣查(zha)到壹個(ge)特定細胞株的相關知(zhi)識和培(pei)養條件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了(le)絕(jue)大(da)多(duo)數細胞的詳(xiang)細資料。打開ATCC網頁(ye)的Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸(shu)入(ru)細胞名稱(cheng)就(jiu)可(ke)以(yi)搜(sou)索ATCC的(de)細胞數據(ju)庫。數(shu)據(ju)庫中(zhong)有每壹(yi)種(zhong)細胞的詳(xiang)細描述(shu)，包(bao)括(kuo)細胞的來源(yuan)，培養(yang)和凍(dong)存(cun)條件(jian)，以(yi)及(ji)相(xiang)關文獻(xian)等資(zi)料(liao)。
如(ru)何(he)選用(yong)特殊細胞系(xi)培養(yang)基(ji)？
培(pei)養某類(lei)型(xing)細胞沒有固(gu)定(ding)的(de)培養條件(jian)。MEM中(zhong)培(pei)養(yang)的細胞，很(hen)可(ke)能(neng)在(zai)DMEM或M199中(zhong)同樣容易生長。總(zong)之，*MEM、DMEM做貼壁(bi)細胞培養；RPMI1640做懸浮(fu)細胞培養；各(ge)種(zhong)目(mu)的(de)無(wu)血清(qing)培(pei)養(yang)*AIMV培(pei)養基（SFM）。

測序實驗流(liu)程：
1 收(shou)集樣品(pin)
2 相關試劑(ji) 總(zong)RNA提取(qu)試劑(ji)TREzol Reagent (RNA提(ti)取(qu)試劑(ji)), M-MLV(cDNA逆轉錄酶), RNA 純(chun)化(hua)試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR預(yu)混試劑(ji))。
3 實驗儀器(qi) 熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR儀; PCR儀;低(di)溫離(li)心(xin)機。
4 總(zong)RNA提取(qu)
5 cDNA合成(cheng) 在(zai)0.5ml的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru)1µl模(mo)板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨機引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水至15µl體系(xi)。混勻(yun)後(hou)70℃變(bian)性(xing)RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰(bing)上速(su)冷(leng)1分(fen)鐘(zhong)，離(li)心(xin)將(jiang)溶(rong)液(ye)收(shou)集(ji)至管(guan)底(di)加(jia)入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水至30µl體系(xi)。PCR儀中反(fan)應條件(jian)設(she)置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終止反(fan)應。合成(cheng)好(hao)的(de)cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保(bao)存(cun)備用(yong)。
6 引(yin)物(wu)設(she)計(ji)與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成(cheng)
7 實時定(ding)量(liang)PCR 按以下反(fan)應體系(xi)進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引(yin)物(wu)F 1 ul，下遊引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀擴(kuo)增(zeng)反(fan)應條件(jian)設(she)置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循環(huan))。
8 PCR產物溶(rong)解曲(qu)線(xian)分(fen)析 將(jiang)所(suo)擴(kuo)增(zeng)的(de)PCR 產物進(jin)行(xing)溶(rong)解曲(qu)線(xian)分(fen)析，單(dan)峰(feng)溶(rong)解曲(qu)線(xian)表示(shi)擴(kuo)增(zeng)產物單(dan)壹(yi)，無(wu)非特異(yi)性(xing)擴(kuo)增(zeng)產物。溶(rong)解曲(qu)線(xian)生成(cheng)的反(fan)應程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事項(xiang)：收(shou)集標本(ben)前(qian)必須(xu)清(qing)楚要(yao)檢測的(de)成(cheng)份是(shi)否(fou)足(zu)夠穩(wen)定，對(dui)收集後(hou)當天(tian)進(jin)行(xing)檢(jian)測的(de)標本(ben)，儲(chu)存(cun)在(zai)4℃備用(yong)，如(ru)有(you)特殊原因需要周(zhou)期(qi)收(shou)集(ji)標本(ben)，將(jiang)標本(ben)及(ji)時分(fen)裝(zhuang)後放在(zai)-20℃或-70℃條件(jian)下保(bao)存(cun)。避免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)，標本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存(cun)48小(xiao)時，-20℃可(ke)保(bao)存(cun)1個(ge)月(yue)，-70度(du)可(ke)保(bao)存(cun)6個(ge)月(yue)，部分(fen)標本(ben)需(xu)添加(jia)抑(yi)肽酶。我(wo)公司是(shi)國內信譽雙(shuang)收(shou)的(de)放心(xin)企(qi)業代(dai)理(li)商(shang)，具有(you)良好(hao)的(de)市場信譽與口碑，專(zhuan)業的(de)銷售和技(ji)術服務團(tuan)隊，歡(huan)迎廣(guang)大(da)師生、研究(jiu)機構(gou)等，洽(qia)商(shang)。

細胞出現問題(ti)，可(ke)重發的(de)情(qing)況有哪些(xie)？判(pan)定標準(zhun)是(shi)什(shen)麽？
　　（1）細胞運輸途中遭(zao)遇的(de)各(ge)種(zhong)問題(ti)，細胞丟失、破(po)損(sun)、漏(lou)液(ye)等，重發；
　　（2）凍(dong)存(cun)的細胞復蘇(su)後，絕(jue)大(da)多(duo)數細胞未存(cun)活，重發；
　　（3）存(cun)活的(de)細胞靜置(zhi)24小(xiao)時後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數細胞未存(cun)活，重發；
　　（4）凍(dong)存(cun)的細胞復蘇(su)後或(huo)存(cun)活的(de)細胞靜置(zhi)4小(xiao)時後(hou)並且未(wei)開封，出現汙(wu)染，重發；
　　（5）視(shi)具體(ti)情況而定(ding)。
細胞出現問題(ti)，不予以(yi)重發的(de)情(qing)況有哪些(xie)？
　　（1）客戶造成(cheng)細胞汙(wu)染，不重發；
　　（2）客(ke)戶不正確操(cao)作致(zhi)細胞狀態(tai)不好(hao)，不重發；
　　（3）細胞狀態(tai)不好(hao)，未(wei)提(ti)供(gong)細胞培養前3天照(zhao)片(pian)的，不重發；
　　（4）細胞培養時經其(qi)它處(chu)理的(de)，不重發；
　　（5）細胞收到2天內，未(wei)告(gao)知(zhi)，不重發；
　　（6）視(shi)具體(ti)情況而定(ding)。