上(shang)海乾思生物(wu)Corning品(pin)牌(pai)代理(li)專(zhuan)業經(jing)營(ying)進口胎牛血(xue)清(qing)、細胞因(yin)子、ELISA試劑(ji)盒、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生物(wu)試(shi)劑(ji)、耗(hao)材(cai)、培(pei)養(yang)基(ji)、壹(yi)抗(kang)、二抗(kang)、其產(chan)品吸(xi)附均(jun)勻，吸(xi)附性好，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔底透(tou)明度高(gao)，代做ELISA實驗(yan)等。完善的庫存(cun)及供(gong)應體(ti)系(xi)以及高效(xiao)穩(wen)定的純化技(ji)術(shu)，保證(zheng)產(chan)品均(jun)能(neng)現貨(huo)供(gong)應和產(chan)品質(zhi)量的穩(wen)定性。

Corning

上(shang)海乾思生物(wu)Corning品(pin)牌(pai)代理(li)專(zhuan)業經(jing)營(ying)進口胎牛血(xue)清(qing)、細胞因(yin)子、ELISA試劑(ji)盒、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生物(wu)試(shi)劑(ji)、耗(hao)材(cai)、培(pei)養(yang)基(ji)、壹(yi)抗(kang)、二抗(kang)、其產(chan)品吸(xi)附均(jun)勻，吸(xi)附性好，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔底透(tou)明度高(gao)，代做ELISA實驗(yan)等。完善的庫存(cun)及供(gong)應體(ti)系(xi)以及高效(xiao)穩(wen)定的純化技(ji)術(shu)，保證(zheng)產(chan)品均(jun)能(neng)現貨(huo)供(gong)應和產(chan)品質(zhi)量的穩(wen)定性。

怎樣(yang)查到壹(yi)個(ge)特定(ding)細胞株的相(xiang)關(guan)知(zhi)識(shi)和培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了絕大(da)多數(shu)細胞(bao)的詳(xiang)細(xi)資(zi)料(liao)。打開(kai)ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈接，輸(shu)入細(xi)胞名稱(cheng)就可(ke)以搜(sou)索(suo)ATCC的細胞數(shu)據(ju)庫。數(shu)據(ju)庫中有每壹(yi)種細(xi)胞(bao)的詳(xiang)細(xi)描(miao)述，包(bao)括細胞的來源(yuan)，培(pei)養(yang)和凍(dong)存(cun)條(tiao)件(jian)，以(yi)及相(xiang)關(guan)文(wen)獻等(deng)資(zi)料(liao)。
如何選(xuan)用特(te)殊(shu)細胞(bao)系(xi)培(pei)養(yang)基(ji)？
培(pei)養(yang)某類(lei)型(xing)細胞(bao)沒有固定的培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)。MEM中培(pei)養(yang)的細胞，很(hen)可(ke)能(neng)在DMEM或M199中同(tong)樣(yang)容(rong)易生長(chang)。總(zong)之(zhi)，*MEM、DMEM做貼壁細胞(bao)培(pei)養(yang)；RPMI1640做懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞培(pei)養(yang)；各(ge)種目的無血清(qing)培(pei)養(yang)*AIMV培(pei)養(yang)基(ji)（SFM）。

測(ce)序實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1 收(shou)集(ji)樣(yang)品
2 相(xiang)關(guan)試劑(ji) 總RNA提(ti)取試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提取試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆轉錄(lu)酶(mei)), RNA 純化試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR預(yu)混(hun)試(shi)劑(ji))。
3 實驗(yan)儀(yi)器(qi) 熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi); PCR儀(yi);低(di)溫離心機(ji)。
4 總(zong)RNA提(ti)取
5 cDNA合成 在0.5ml的離心管(guan)中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機(ji)引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至(zhi)15µl體(ti)系(xi)。混(hun)勻(yun)後(hou)70℃變性RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰上速(su)冷1分(fen)鐘(zhong)，離心將(jiang)溶(rong)液(ye)收(shou)集(ji)至(zhi)管底(di)加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至(zhi)30µl體(ti)系(xi)。PCR儀(yi)中反(fan)應條(tiao)件(jian)設(she)置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保溫15min終止反(fan)應。合成好的cDNA置(zhi)於 -20 ℃保存(cun)備用。
6 引(yin)物設(she)計與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shi)時定量PCR 按以下(xia)反(fan)應體(ti)系(xi)進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊(you)引物F 1 ul，下遊(you)引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀(yi)擴(kuo)增反(fan)應條(tiao)件(jian)設(she)置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循環(huan))。
8 PCR產(chan)物溶(rong)解(jie)曲(qu)線分(fen)析(xi) 將所(suo)擴增的PCR 產(chan)物進行溶(rong)解(jie)曲(qu)線分(fen)析(xi)，單峰(feng)溶(rong)解曲(qu)線表(biao)示擴增產(chan)物單壹(yi)，無(wu)非(fei)特(te)異性擴增產(chan)物。溶(rong)解(jie)曲(qu)線生成(cheng)的反(fan)應程(cheng)序為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意(yi)事項(xiang)：收(shou)集(ji)標本(ben)前(qian)必(bi)須(xu)清(qing)楚要檢(jian)測(ce)的成份是(shi)否足夠穩(wen)定，對收(shou)集(ji)後當(dang)天(tian)進行檢(jian)測(ce)的標本(ben)，儲(chu)存(cun)在4℃備用，如有特(te)殊原(yuan)因需(xu)要周期(qi)收(shou)集(ji)標本(ben)，將(jiang)標本(ben)及時分(fen)裝(zhuang)後放(fang)在-20℃或-70℃條(tiao)件(jian)下(xia)保存(cun)。避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融，標本(ben)2-8℃可(ke)保存(cun)48小(xiao)時，-20℃可保存(cun)1個(ge)月，-70度可(ke)保存(cun)6個(ge)月，部分(fen)標(biao)本(ben)需(xu)添(tian)加抑(yi)肽(tai)酶(mei)。我(wo)公司是(shi)國內(nei)信(xin)譽雙收(shou)的放心企(qi)業代理(li)商(shang)，具有(you)良好的市場信(xin)譽與(yu)口碑，專(zhuan)業的銷售和技術(shu)服務(wu)團(tuan)隊(dui)，歡迎(ying)廣(guang)大(da)師生、研(yan)究(jiu)機(ji)構(gou)等，洽商(shang)。

細胞(bao)出現問(wen)題，可重(zhong)發(fa)的情況(kuang)有哪些？判定標準(zhun)是(shi)什麽(me)？
　　（1）細(xi)胞(bao)運輸(shu)途中遭(zao)遇(yu)的各(ge)種問(wen)題，細胞(bao)丟失(shi)、破(po)損(sun)、漏(lou)液(ye)等，重(zhong)發(fa)；
　　（2）凍(dong)存(cun)的細胞復(fu)蘇(su)後，絕大(da)多數(shu)細胞(bao)未存(cun)活(huo)，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存(cun)活(huo)的細胞靜(jing)置(zhi)24小時後，絕大(da)多數(shu)細胞(bao)未存(cun)活(huo)，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍(dong)存(cun)的細胞復(fu)蘇(su)後或存(cun)活(huo)的細胞靜(jing)置(zhi)4小時後並(bing)且未(wei)開(kai)封(feng)，出現汙(wu)染(ran)，重發(fa)；
　　（5）視(shi)具體(ti)情況(kuang)而(er)定(ding)。
細(xi)胞出現問(wen)題，不予以重(zhong)發(fa)的情況(kuang)有哪些？
　　（1）客戶造成(cheng)細(xi)胞汙染，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（2）客(ke)戶不正(zheng)確操(cao)作(zuo)致(zhi)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（3）細(xi)胞狀態(tai)不(bu)好，未(wei)提(ti)供(gong)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)前(qian)3天(tian)照片的，不重發(fa)；
　　（4）細(xi)胞培(pei)養(yang)時經(jing)其它(ta)處理(li)的，不重發(fa)；
　　（5）細(xi)胞收(shou)到2天(tian)內(nei)，未(wei)告(gao)知(zhi)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（6）視(shi)具體(ti)情況(kuang)而(er)定(ding)。