上海乾(qian)思生(sheng)物(wu)Diaclone品牌(pai)代(dai)理專(zhuan)業經(jing)營(ying)進(jin)口(kou)胎(tai)牛(niu)血(xue)清、細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)、ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體、生(sheng)物(wu)試(shi)劑(ji)、耗(hao)材(cai)、培養基、壹抗(kang)、二抗(kang)、其產(chan)品吸(xi)附均(jun)勻(yun)，吸(xi)附性好(hao)，空白值(zhi)低，孔底透明(ming)度(du)高(gao)，代(dai)做ELISA實(shi)驗等(deng)。完善(shan)的(de)庫(ku)存(cun)及供應(ying)體系(xi)以(yi)及高(gao)效(xiao)穩定(ding)的(de)純化(hua)技術(shu)，保(bao)證產(chan)品均(jun)能(neng)現貨供應(ying)和(he)產(chan)品質(zhi)量的(de)穩定(ding)性。

Diaclone

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怎(zen)樣(yang)查到(dao)壹個(ge)特定細胞株的相關(guan)知識(shi)和(he)培養條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集了絕大多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)的詳細資料(liao)。打(da)開(kai)ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入(ru)細(xi)胞名稱(cheng)就可以(yi)搜(sou)索(suo)ATCC的(de)細(xi)胞(bao)數據庫(ku)。數(shu)據庫(ku)中(zhong)有每壹種(zhong)細胞的(de)詳(xiang)細(xi)描(miao)述，包括(kuo)細胞(bao)的來源，培養和(he)凍存(cun)條(tiao)件，以(yi)及相關(guan)文(wen)獻等(deng)資(zi)料。
如(ru)何(he)選用特殊(shu)細(xi)胞系培養基？
培養某(mou)類(lei)型(xing)細胞(bao)沒有(you)固定(ding)的(de)培養條(tiao)件。MEM中(zhong)培養的細(xi)胞(bao)，很可能(neng)在(zai)DMEM或M199中(zhong)同(tong)樣(yang)容(rong)易生(sheng)長(chang)。總(zong)之(zhi)，*MEM、DMEM做貼壁細胞培養；RPMI1640做懸浮細(xi)胞(bao)培養；各種(zhong)目的無血(xue)清培養*AIMV培養基（SFM）。

測(ce)序實(shi)驗流程：
1 收集樣品
2 相關(guan)試(shi)劑(ji) 總(zong)RNA提取(qu)試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提取(qu)試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆(ni)轉(zhuan)錄酶(mei)), RNA 純化(hua)試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定量PCR預(yu)混(hun)試(shi)劑(ji))。
3 實(shi)驗儀(yi)器(qi) 熒光(guang)定量PCR儀(yi); PCR儀(yi);低(di)溫(wen)離心(xin)機(ji)。
4 總(zong)RNA提取(qu)
5 cDNA合成(cheng) 在(zai)0.5ml的離心(xin)管中(zhong)加入(ru)1µl模板總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨機(ji)引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至15µl體系(xi)。混(hun)勻(yun)後70℃變(bian)性RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰(bing)上速(su)冷(leng)1分(fen)鐘(zhong)，離心(xin)將(jiang)溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體系(xi)。PCR儀(yi)中(zhong)反應(ying)條(tiao)件設(she)置 37℃延伸60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終(zhong)止反應(ying)。合(he)成(cheng)好(hao)的cDNA置(zhi)於 -20 ℃保(bao)存備用。
6 引(yin)物(wu)設計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成(cheng)
7 實(shi)時定量PCR 按以(yi)下(xia)反應(ying)體系(xi)進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引(yin)物(wu)F 1 ul，下遊(you)引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀(yi)擴增反應(ying)條(tiao)件設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循環(huan))。
8 PCR產(chan)物(wu)溶解曲線分(fen)析 將(jiang)所(suo)擴增的PCR 產(chan)物(wu)進(jin)行(xing)溶解曲線分(fen)析，單(dan)峰溶(rong)解曲線表(biao)示擴增產(chan)物(wu)單壹，無非特異(yi)性擴增產(chan)物(wu)。溶解曲線生(sheng)成的(de)反應(ying)程(cheng)序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意事(shi)項(xiang)：收(shou)集標本(ben)前(qian)必(bi)須清楚要(yao)檢(jian)測(ce)的成份(fen)是否足(zu)夠(gou)穩定(ding)，對(dui)收集後當天進(jin)行(xing)檢測(ce)的標本(ben)，儲存在(zai)4℃備用，如(ru)有特(te)殊(shu)原(yuan)因(yin)需要(yao)周(zhou)期(qi)收(shou)集標本(ben)，將標(biao)本(ben)及時分(fen)裝後放(fang)在(zai)-20℃或-70℃條(tiao)件下(xia)保(bao)存。避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)，標本(ben)2-8℃可保(bao)存48小時，-20℃可保(bao)存1個(ge)月(yue)，-70度可保(bao)存6個(ge)月(yue)，部分(fen)標本(ben)需添加(jia)抑(yi)肽(tai)酶(mei)。我公司是(shi)國(guo)內(nei)信(xin)譽(yu)雙收的(de)放(fang)心(xin)企(qi)業代(dai)理商，具(ju)有良好(hao)的市(shi)場信譽(yu)與(yu)口碑(bei)，專(zhuan)業的(de)銷售(shou)和(he)技術(shu)服務團(tuan)隊(dui)，歡迎廣(guang)大師生(sheng)、研究機(ji)構(gou)等(deng)，洽(qia)商。

細胞出(chu)現問題，可重發(fa)的情況有哪些？判定(ding)標(biao)準是什麽(me)？
　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸途(tu)中(zhong)遭(zao)遇的(de)各(ge)種(zhong)問題，細(xi)胞(bao)丟(diu)失(shi)、破(po)損、漏(lou)液等(deng)，重發(fa)；
　　（2）凍存的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇(su)後，絕大多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)未存活，重發(fa)；
　　（3）存活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置(zhi)24小時後，絕大多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)未存活，重發(fa)；
　　（4）凍存的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇(su)後或存活的(de)細(xi)胞靜(jing)置(zhi)4小時後並(bing)且未(wei)開(kai)封(feng)，出(chu)現汙染(ran)，重發(fa)；
　　（5）視(shi)具(ju)體情況而定。
細胞出(chu)現問題，不(bu)予(yu)以(yi)重發(fa)的情況有哪些？
　　（1）客戶(hu)造成(cheng)細(xi)胞(bao)汙染(ran)，不(bu)重發(fa)；
　　（2）客戶(hu)不(bu)正確操作(zuo)致細胞狀態(tai)不好(hao)，不重發(fa)；
　　（3）細胞狀態(tai)不(bu)好(hao)，未提供細(xi)胞(bao)培養前(qian)3天(tian)照(zhao)片的，不重發(fa)；
　　（4）細胞培養時經(jing)其(qi)它處(chu)理(li)的，不重發(fa)；
　　（5）細胞收到(dao)2天內(nei)，未告(gao)知，不重發(fa)；
　　（6）視(shi)具(ju)體情況而定。