上海乾思(si)生物diapharma品(pin)牌(pai)代理(li)專業經(jing)營進(jin)口(kou)胎(tai)牛血(xue)清、細胞(bao)因子、ELISA試(shi)劑(ji)盒、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生物試(shi)劑(ji)、耗材、培養(yang)基(ji)、壹(yi)抗(kang)、二(er)抗(kang)、其(qi)產(chan)品吸(xi)附均勻，吸(xi)附性好，空白(bai)值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透明(ming)度高(gao)，代做ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完(wan)善(shan)的(de)庫存及供(gong)應體系(xi)以及(ji)高(gao)效(xiao)穩定的(de)純化技術，保證(zheng)產品(pin)均能現(xian)貨供(gong)應和產(chan)品(pin)質量的穩(wen)定性。

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怎(zen)樣查(zha)到(dao)壹(yi)個特定(ding)細(xi)胞(bao)株(zhu)的(de)相(xiang)關(guan)知識和培(pei)養條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集了(le)絕大(da)多(duo)數細(xi)胞(bao)的(de)詳細資料。打開(kai)ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸入(ru)細(xi)胞(bao)名稱就(jiu)可(ke)以搜(sou)索(suo)ATCC的細(xi)胞(bao)數據(ju)庫。數據(ju)庫中有(you)每(mei)壹(yi)種細胞(bao)的(de)詳細描述，包(bao)括(kuo)細(xi)胞(bao)的(de)來(lai)源(yuan)，培(pei)養(yang)和凍存條件(jian)，以及相(xiang)關(guan)文(wen)獻等資料。
如何(he)選用特殊細胞(bao)系(xi)培養(yang)基(ji)？
培(pei)養某類型(xing)細(xi)胞(bao)沒(mei)有(you)固(gu)定(ding)的(de)培養條件。MEM中(zhong)培(pei)養的細胞(bao)，很(hen)可能在DMEM或M199中(zhong)同(tong)樣容(rong)易(yi)生長。總(zong)之，*MEM、DMEM做貼(tie)壁細(xi)胞(bao)培(pei)養；RPMI1640做懸浮細胞(bao)培(pei)養；各(ge)種目的無(wu)血清培養*AIMV培養基(ji)（SFM）。

測(ce)序實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1 收集樣品
2 相(xiang)關(guan)試(shi)劑(ji) 總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提取(qu)試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆轉錄(lu)酶(mei)), RNA 純化試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒光(guang)定(ding)量PCR預(yu)混試(shi)劑(ji))。
3 實驗(yan)儀(yi)器(qi) 熒光(guang)定(ding)量PCR儀(yi); PCR儀(yi);低(di)溫(wen)離心機。
4 總RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合成 在0.5ml的(de)離心管(guan)中加入(ru)1µl模(mo)板(ban)總RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水至15µl體系(xi)。混勻後(hou)70℃變性RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰(bing)上(shang)速(su)冷1分(fen)鐘(zhong)，離心將(jiang)溶(rong)液(ye)收集至管(guan)底(di)加入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體系(xi)。PCR儀(yi)中反應條(tiao)件設置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保溫(wen)15min終止(zhi)反應。合成好的cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保存備用。
6 引物設(she)計與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shi)時(shi)定(ding)量PCR 按以下反應體(ti)系(xi)進(jin)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊引物F 1 ul，下(xia)遊引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀(yi)擴(kuo)增反應條(tiao)件設置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循(xun)環(huan))。
8 PCR產(chan)物溶(rong)解曲(qu)線(xian)分(fen)析(xi) 將所(suo)擴(kuo)增的PCR 產(chan)物進(jin)行溶(rong)解曲(qu)線(xian)分(fen)析(xi)，單峰(feng)溶(rong)解曲(qu)線(xian)表示(shi)擴(kuo)增產物單壹(yi)，無非特異(yi)性擴(kuo)增產物。溶(rong)解曲(qu)線(xian)生成的反應程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事(shi)項：收(shou)集標本前必須清楚(chu)要檢測(ce)的成(cheng)份是否足(zu)夠(gou)穩(wen)定(ding)，對(dui)收集後當(dang)天進(jin)行檢測(ce)的標本，儲存在4℃備(bei)用，如(ru)有(you)特殊原(yuan)因需要(yao)周期(qi)收集標本，將標本及時(shi)分(fen)裝後(hou)放(fang)在-20℃或-70℃條(tiao)件下保存。避免(mian)反復(fu)凍融(rong)，標本2-8℃可保存48小(xiao)時(shi)，-20℃可(ke)保存1個月(yue)，-70度可保存6個月(yue)，部分(fen)標本需添(tian)加(jia)抑(yi)肽(tai)酶(mei)。我公司是國內信譽(yu)雙收(shou)的放心企(qi)業代理(li)商，具有(you)良(liang)好的市(shi)場信譽(yu)與口(kou)碑(bei)，專業的(de)銷售(shou)和技(ji)術服(fu)務團隊(dui)，歡迎(ying)廣(guang)大(da)師(shi)生、研究機構等(deng)，洽商。

細胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，可重(zhong)發(fa)的(de)情(qing)況(kuang)有(you)哪些(xie)？判(pan)定(ding)標準是什(shen)麽(me)？
　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸途中遭(zao)遇(yu)的(de)各(ge)種問(wen)題(ti)，細胞(bao)丟(diu)失(shi)、破(po)損、漏液(ye)等，重(zhong)發(fa)；
　　（2）凍存的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇(su)後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數細(xi)胞(bao)未存活，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存活的(de)細胞(bao)靜(jing)置(zhi)24小(xiao)時(shi)後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數細(xi)胞(bao)未存活，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍存的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇(su)後(hou)或存活的(de)細胞(bao)靜(jing)置(zhi)4小(xiao)時(shi)後(hou)並(bing)且(qie)未開封，出(chu)現(xian)汙(wu)染(ran)，重(zhong)發(fa)；
　　（5）視具體情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)。
細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，不予(yu)以重(zhong)發(fa)的(de)情(qing)況(kuang)有(you)哪些(xie)？
　　（1）客(ke)戶(hu)造(zao)成(cheng)細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)，不重(zhong)發(fa)；
　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確(que)操(cao)作致細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，不重(zhong)發(fa)；
　　（3）細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，未提供(gong)細胞(bao)培(pei)養前3天照片的，不重(zhong)發(fa)；
　　（4）細(xi)胞(bao)培(pei)養時(shi)經(jing)其(qi)它處(chu)理(li)的(de)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（5）細(xi)胞(bao)收(shou)到2天內，未告(gao)知(zhi)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（6）視具體情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)。