上海(hai)乾思生物(wu)Epigentek品(pin)牌代(dai)理(li)專業(ye)經營(ying)進(jin)口胎(tai)牛(niu)血清(qing)、細(xi)胞因(yin)子、ELISA試劑盒、細胞、抗(kang)體、生物(wu)試劑、耗材、培養基(ji)、壹(yi)抗(kang)、二(er)抗(kang)、其產(chan)品(pin)吸附(fu)均(jun)勻(yun)，吸附(fu)性好(hao)，空白(bai)值低(di)，孔底(di)透(tou)明度(du)高(gao)，代(dai)做(zuo)ELISA實驗等(deng)。完(wan)善(shan)的(de)庫存(cun)及供(gong)應體系以及高(gao)效穩定(ding)的純化技(ji)術(shu)，保證產(chan)品(pin)均(jun)能(neng)現(xian)貨供(gong)應和產品(pin)質量(liang)的穩(wen)定(ding)性。

Epigentek

上海(hai)乾思生物(wu)Epigentek品(pin)牌代(dai)理(li)專業(ye)經營(ying)進(jin)口胎(tai)牛(niu)血清(qing)、細(xi)胞因(yin)子、ELISA試劑盒、細胞、抗(kang)體、生物(wu)試劑、耗材、培養基(ji)、壹(yi)抗(kang)、二(er)抗(kang)、其產(chan)品(pin)吸附(fu)均(jun)勻(yun)，吸附(fu)性好(hao)，空白(bai)值低(di)，孔底(di)透(tou)明度(du)高(gao)，代(dai)做(zuo)ELISA實驗等(deng)。完(wan)善(shan)的(de)庫存(cun)及供(gong)應體系以及高(gao)效穩定(ding)的純化技(ji)術(shu)，保證產(chan)品(pin)均(jun)能(neng)現(xian)貨供(gong)應和產品(pin)質量(liang)的穩(wen)定(ding)性。

怎樣(yang)查到(dao)壹(yi)個特(te)定細(xi)胞株(zhu)的(de)相(xiang)關知識和培養(yang)條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了(le)絕(jue)大多(duo)數細胞的(de)詳(xiang)細資(zi)料(liao)。打(da)開ATCC網頁的(de)Cells and hybridomas鏈(lian)接(jie)，輸入(ru)細(xi)胞名(ming)稱(cheng)就可(ke)以搜(sou)索ATCC的細胞數據庫。數據庫中(zhong)有每(mei)壹(yi)種(zhong)細胞的(de)詳(xiang)細描述，包括細(xi)胞的(de)來(lai)源，培(pei)養(yang)和(he)凍(dong)存條(tiao)件，以及相(xiang)關文獻(xian)等資(zi)料(liao)。
如何選(xuan)用特(te)殊(shu)細(xi)胞系培養基？
培(pei)養(yang)某(mou)類型(xing)細(xi)胞沒(mei)有固(gu)定(ding)的(de)培養條(tiao)件。MEM中(zhong)培養的細(xi)胞，很(hen)可(ke)能(neng)在DMEM或M199中(zhong)同(tong)樣(yang)容易(yi)生長。總(zong)之，*MEM、DMEM做(zuo)貼壁細胞培(pei)養(yang)；RPMI1640做懸浮細(xi)胞培(pei)養(yang)；各種(zhong)目的無血清培養(yang)*AIMV培(pei)養(yang)基（SFM）。

測(ce)序實驗流(liu)程(cheng)：
1 收(shou)集(ji)樣(yang)品(pin)
2 相(xiang)關試劑 總(zong)RNA提取(qu)試劑TREzol Reagent (RNA提取(qu)試劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄(lu)酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光(guang)定(ding)量PCR預(yu)混(hun)試劑)。
3 實驗儀(yi)器 熒(ying)光定量PCR儀; PCR儀(yi);低(di)溫(wen)離心機。
4 總(zong)RNA提取(qu)
5 cDNA合(he)成 在(zai)0.5ml的(de)離心管中(zhong)加入(ru)1µl模(mo)板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機(ji)引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體(ti)系。混(hun)勻後(hou)70℃變性RNA 5分鐘，冰上速冷1分鐘，離心將溶液收(shou)集(ji)至(zhi)管底(di)加入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體(ti)系。PCR儀中反應條(tiao)件設(she)置 37℃延伸(shen)60min，70℃保溫(wen)15min終止(zhi)反應。合(he)成好(hao)的(de)cDNA置(zhi)於 -20 ℃保存(cun)備用。
6 引物(wu)設計(ji)與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成
7 實(shi)時定量(liang)PCR 按(an)以下反應體系進(jin)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引物(wu)F 1 ul，下遊引物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定量(liang)PCR儀(yi)擴(kuo)增(zeng)反應條(tiao)件設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循(xun)環)。
8 PCR產物(wu)溶解(jie)曲線(xian)分析 將所(suo)擴增(zeng)的PCR 產物(wu)進(jin)行溶(rong)解(jie)曲線(xian)分析，單峰溶(rong)解(jie)曲線(xian)表示(shi)擴(kuo)增(zeng)產物(wu)單壹(yi)，無非特(te)異(yi)性擴(kuo)增(zeng)產物(wu)。溶解(jie)曲線(xian)生成的反應程(cheng)序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事(shi)項(xiang)：收(shou)集(ji)標(biao)本(ben)前(qian)必須清楚要(yao)檢(jian)測的成(cheng)份是否(fou)足(zu)夠(gou)穩(wen)定(ding)，對收(shou)集(ji)後(hou)當天進(jin)行檢(jian)測的標(biao)本(ben)，儲(chu)存在4℃備用，如有特(te)殊(shu)原(yuan)因(yin)需要(yao)周(zhou)期(qi)收(shou)集(ji)標(biao)本(ben)，將(jiang)標(biao)本(ben)及時分裝後(hou)放在(zai)-20℃或-70℃條(tiao)件下保存。避免(mian)反復凍融，標(biao)本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存48小時，-20℃可(ke)保(bao)存1個月，-70度(du)可(ke)保(bao)存6個月，部(bu)分標(biao)本(ben)需添(tian)加抑(yi)肽酶。我公(gong)司(si)是國(guo)內(nei)信(xin)譽雙收(shou)的(de)放(fang)心企業(ye)代(dai)理(li)商(shang)，具(ju)有良(liang)好(hao)的(de)市場信(xin)譽與口(kou)碑，專業(ye)的銷(xiao)售和技(ji)術(shu)服務團隊，歡(huan)迎(ying)廣(guang)大師(shi)生、研究(jiu)機(ji)構等，洽(qia)商(shang)。

細(xi)胞出(chu)現(xian)問題，可(ke)重(zhong)發的情(qing)況有哪(na)些？判定標(biao)準(zhun)是(shi)什麽(me)？
　　（1）細胞運(yun)輸途中(zhong)遭(zao)遇(yu)的(de)各種(zhong)問題，細胞丟(diu)失、破損(sun)、漏(lou)液(ye)等，重發；
　　（2）凍(dong)存(cun)的(de)細胞復(fu)蘇(su)後(hou)，絕大(da)多(duo)數細胞未(wei)存活(huo)，重發(fa)；
　　（3）存活(huo)的細(xi)胞靜(jing)置(zhi)24小時後(hou)，絕大(da)多(duo)數細胞未(wei)存活(huo)，重發(fa)；
　　（4）凍存(cun)的(de)細胞復(fu)蘇(su)後(hou)或存(cun)活(huo)的細(xi)胞靜(jing)置(zhi)4小時後(hou)並且(qie)未(wei)開封(feng)，出(chu)現(xian)汙(wu)染，重(zhong)發；
　　（5）視(shi)具體(ti)情況(kuang)而定。
細胞出(chu)現(xian)問題，不予以重(zhong)發(fa)的情(qing)況有哪(na)些？
　　（1）客戶(hu)造(zao)成細胞汙(wu)染，不(bu)重發；
　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確(que)操作致細胞狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，不重發(fa)；
　　（3）細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，未(wei)提供(gong)細(xi)胞培(pei)養(yang)前3天照(zhao)片的(de)，不(bu)重發(fa)；
　　（4）細胞培(pei)養(yang)時經其(qi)它處(chu)理(li)的(de)，不(bu)重發(fa)；
　　（5）細胞收(shou)到(dao)2天內(nei)，未(wei)告知，不重發；
　　（6）視(shi)具體(ti)情況(kuang)而定。