上海(hai)乾思生物(wu)Genway品(pin)牌(pai)代理(li)專業(ye)經營進(jin)口(kou)胎牛血(xue)清(qing)、細(xi)胞(bao)因(yin)子、ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗體、生物(wu)試(shi)劑(ji)、耗(hao)材(cai)、培養基(ji)、壹(yi)抗、二(er)抗、其產品(pin)吸(xi)附(fu)均勻，吸(xi)附(fu)性好，空白(bai)值低，孔(kong)底透(tou)明度(du)高，代(dai)做(zuo)ELISA實(shi)驗(yan)等。完(wan)善(shan)的(de)庫存(cun)及供(gong)應(ying)體系以(yi)及高效(xiao)穩定的(de)純(chun)化(hua)技(ji)術，保證(zheng)產品(pin)均能現貨(huo)供(gong)應(ying)和(he)產品(pin)質量的穩定性(xing)。

Genway

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怎樣查(zha)到壹個特(te)定細(xi)胞(bao)株的相關(guan)知識(shi)和(he)培(pei)養條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕大多數細(xi)胞(bao)的詳(xiang)細(xi)資(zi)料。打開(kai)ATCC網頁(ye)的(de)Cells and hybridomas鏈(lian)接(jie)，輸(shu)入細(xi)胞(bao)名稱(cheng)就(jiu)可以(yi)搜索(suo)ATCC的細(xi)胞(bao)數據(ju)庫。數(shu)據(ju)庫中(zhong)有每壹種(zhong)細(xi)胞(bao)的詳(xiang)細(xi)描(miao)述(shu)，包(bao)括(kuo)細(xi)胞(bao)的來(lai)源，培(pei)養和(he)凍(dong)存(cun)條(tiao)件，以(yi)及相(xiang)關(guan)文(wen)獻(xian)等(deng)資(zi)料。
如(ru)何(he)選用特殊細(xi)胞(bao)系培養基(ji)？
培(pei)養某(mou)類(lei)型細(xi)胞(bao)沒有固(gu)定的(de)培(pei)養條(tiao)件。MEM中(zhong)培(pei)養的(de)細(xi)胞(bao)，很(hen)可能在DMEM或M199中同樣容易生長(chang)。總(zong)之(zhi)，*MEM、DMEM做(zuo)貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)培養；RPMI1640做(zuo)懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)培養；各(ge)種(zhong)目(mu)的無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養*AIMV培(pei)養基(ji)（SFM）。

測(ce)序(xu)實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1 收集(ji)樣品(pin)
2 相關(guan)試(shi)劑(ji) 總(zong)RNA提取試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提取試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶), RNA 純(chun)化(hua)試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定量PCR預混試(shi)劑(ji))。
3 實(shi)驗(yan)儀器(qi) 熒(ying)光(guang)定量PCR儀; PCR儀;低溫(wen)離(li)心機。
4 總(zong)RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的(de)離(li)心管(guan)中加入1µl模(mo)板總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至(zhi)15µl體系。混勻後70℃變性RNA 5分鐘，冰(bing)上速(su)冷1分鐘，離(li)心將(jiang)溶(rong)液(ye)收集(ji)至(zhi)管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至(zhi)30µl體系。PCR儀中(zhong)反(fan)應(ying)條(tiao)件設(she)置 37℃延伸60min，70℃保溫(wen)15min終止(zhi)反應(ying)。合(he)成好的cDNA置於 -20 ℃保存(cun)備用。
6 引(yin)物(wu)設(she)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shi)時(shi)定量PCR 按(an)以(yi)下反(fan)應(ying)體系進行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引物(wu)F 1 ul，下(xia)遊引物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀擴增反(fan)應(ying)條(tiao)件設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循(xun)環)。
8 PCR產物(wu)溶(rong)解曲線分析 將(jiang)所(suo)擴(kuo)增(zeng)的PCR 產物(wu)進(jin)行溶解曲(qu)線分析，單峰溶(rong)解(jie)曲(qu)線表(biao)示擴增產物(wu)單壹，無(wu)非(fei)特(te)異性擴(kuo)增(zeng)產物(wu)。溶(rong)解曲線生成的反應(ying)程(cheng)序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意(yi)事項：收集(ji)標本(ben)前必(bi)須(xu)清(qing)楚(chu)要檢(jian)測(ce)的成份是否(fou)足(zu)夠(gou)穩定，對(dui)收集(ji)後當(dang)天(tian)進行(xing)檢(jian)測(ce)的標本(ben)，儲存(cun)在4℃備用，如(ru)有特(te)殊原因(yin)需要(yao)周期收集(ji)標本(ben)，將(jiang)標本(ben)及時(shi)分裝後放(fang)在-20℃或-70℃條(tiao)件下(xia)保存(cun)。避免反(fan)復(fu)凍融，標本(ben)2-8℃可保存(cun)48小時(shi)，-20℃可保存(cun)1個月(yue)，-70度(du)可保存(cun)6個月(yue)，部分標本(ben)需添加抑(yi)肽(tai)酶。我公司(si)是國內信(xin)譽(yu)雙(shuang)收的放心企(qi)業(ye)代理(li)商，具有良(liang)好的市場(chang)信(xin)譽(yu)與(yu)口(kou)碑，專業(ye)的銷(xiao)售(shou)和技(ji)術服(fu)務(wu)團隊(dui)，歡(huan)迎廣大師(shi)生、研(yan)究(jiu)機構等(deng)，洽商。

細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，可重發的(de)情況有哪(na)些(xie)？判定標準(zhun)是什麽？
　　（1）細(xi)胞(bao)運輸(shu)途(tu)中遭(zao)遇(yu)的各種(zhong)問(wen)題(ti)，細(xi)胞(bao)丟失(shi)、破損(sun)、漏液(ye)等，重發；
　　（2）凍(dong)存(cun)的細(xi)胞(bao)復蘇(su)後，絕大多數細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活，重發；
　　（3）存(cun)活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置24小時(shi)後，絕大多數細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活，重發；
　　（4）凍(dong)存(cun)的細(xi)胞(bao)復蘇(su)後或存(cun)活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置4小時(shi)後並(bing)且未(wei)開封，出(chu)現汙染(ran)，重發；
　　（5）視(shi)具體情況而定。
細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，不(bu)予以(yi)重發的(de)情況有哪(na)些(xie)？
　　（1）客戶造(zao)成細(xi)胞(bao)汙染(ran)，不(bu)重發；
　　（2）客(ke)戶(hu)不正確(que)操(cao)作致(zhi)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態不好，不重發；
　　（3）細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態不好，未(wei)提供(gong)細(xi)胞(bao)培養前3天(tian)照(zhao)片(pian)的(de)，不(bu)重發；
　　（4）細(xi)胞(bao)培養時(shi)經其它(ta)處(chu)理(li)的，不(bu)重發；
　　（5）細(xi)胞(bao)收到2天(tian)內，未(wei)告知，不(bu)重發；
　　（6）視(shi)具體情況而定。