上(shang)海(hai)乾思(si)生物Enzymax品牌代(dai)理專(zhuan)業(ye)經營進(jin)口胎牛血清、細胞因(yin)子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細胞、抗體(ti)、生(sheng)物(wu)試劑(ji)、耗(hao)材(cai)、培(pei)養基、壹抗、二抗、其產(chan)品(pin)吸(xi)附(fu)均(jun)勻(yun)，吸(xi)附(fu)性好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透明(ming)度(du)高(gao)，代(dai)做ELISA實驗等。完善(shan)的庫(ku)存及供應體(ti)系以(yi)及高(gao)效穩(wen)定的(de)純(chun)化(hua)技(ji)術，保(bao)證(zheng)產(chan)品(pin)均能現貨(huo)供(gong)應和產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的穩(wen)定性。

Enzymax

上(shang)海(hai)乾(qian)思(si)生(sheng)物Enzymax品牌代(dai)理專(zhuan)業(ye)經營進(jin)口胎牛血清、細胞因(yin)子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細胞、抗體(ti)、生(sheng)物(wu)試劑(ji)、耗(hao)材(cai)、培(pei)養基、壹抗、二抗、其產(chan)品(pin)吸(xi)附(fu)均(jun)勻(yun)，吸(xi)附(fu)性好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透明(ming)度(du)高(gao)，代(dai)做ELISA實驗等。完善(shan)的庫(ku)存及供應體(ti)系以(yi)及高(gao)效穩(wen)定的(de)純(chun)化(hua)技(ji)術，保(bao)證(zheng)產(chan)品(pin)均能現貨(huo)供(gong)應和產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的穩(wen)定性。

怎(zen)樣(yang)查到(dao)壹個特定(ding)細(xi)胞株(zhu)的相(xiang)關知(zhi)識和培養條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕(jue)大多(duo)數(shu)細胞的(de)詳(xiang)細資(zi)料(liao)。打(da)開ATCC網(wang)頁的(de)Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入細(xi)胞名(ming)稱(cheng)就(jiu)可(ke)以(yi)搜(sou)索ATCC的細(xi)胞數(shu)據(ju)庫(ku)。數據(ju)庫(ku)中(zhong)有(you)每壹種(zhong)細胞的(de)詳(xiang)細描述，包括細(xi)胞的(de)來(lai)源(yuan)，培(pei)養和凍(dong)存條件，以(yi)及相(xiang)關(guan)文獻(xian)等(deng)資料(liao)。
如何(he)選(xuan)用特殊(shu)細(xi)胞系培養基？
培(pei)養某類型(xing)細胞沒(mei)有(you)固(gu)定的培(pei)養條件。MEM中(zhong)培養的細(xi)胞，很可能(neng)在DMEM或(huo)M199中(zhong)同樣(yang)容(rong)易(yi)生長。總之(zhi)，*MEM、DMEM做貼壁(bi)細胞培(pei)養；RPMI1640做懸浮細(xi)胞培(pei)養；各(ge)種(zhong)目的(de)無(wu)血(xue)清培養*AIMV培養基（SFM）。

測(ce)序(xu)實(shi)驗流程：
1 收集(ji)樣(yang)品
2 相(xiang)關(guan)試(shi)劑 總(zong)RNA提(ti)取(qu)試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取(qu)試劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄酶), RNA 純(chun)化試劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR預混(hun)試(shi)劑)。
3 實驗儀(yi)器 熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR儀(yi); PCR儀(yi);低(di)溫(wen)離(li)心(xin)機。
4 總(zong)RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合(he)成 在0.5ml的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)加入1µl模板(ban)總RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至(zhi)15µl體(ti)系。混(hun)勻(yun)後(hou)70℃變性RNA 5分鐘(zhong)，冰(bing)上(shang)速(su)冷(leng)1分鐘(zhong)，離(li)心(xin)將溶(rong)液收集(ji)至(zhi)管底(di)加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至(zhi)30µl體(ti)系。PCR儀(yi)中(zhong)反應條件設置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保溫(wen)15min終止(zhi)反應。合(he)成好(hao)的cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保存備用。
6 引(yin)物設計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成
7 實時(shi)定量(liang)PCR 按以(yi)下反應體(ti)系進(jin)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引(yin)物(wu)F 1 ul，下(xia)遊引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀(yi)擴(kuo)增反應條件設置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循環)。
8 PCR產(chan)物(wu)溶(rong)解曲線(xian)分析(xi) 將所擴(kuo)增(zeng)的PCR 產(chan)物(wu)進(jin)行溶(rong)解曲線(xian)分析(xi)，單(dan)峰溶(rong)解曲線(xian)表(biao)示擴增產(chan)物(wu)單壹，無(wu)非(fei)特異性擴增(zeng)產(chan)物(wu)。溶(rong)解曲線(xian)生(sheng)成的反應程序(xu)為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意事(shi)項：收集(ji)標本(ben)前(qian)必須清楚要(yao)檢(jian)測(ce)的成份是否足夠(gou)穩(wen)定，對(dui)收集(ji)後(hou)當天進(jin)行檢(jian)測(ce)的標本(ben)，儲存在4℃備用(yong)，如有(you)特殊(shu)原因(yin)需(xu)要周期(qi)收集(ji)標本(ben)，將標本(ben)及時(shi)分裝(zhuang)後(hou)放在-20℃或(huo)-70℃條件下(xia)保(bao)存。避免(mian)反復凍(dong)融(rong)，標本(ben)2-8℃可保(bao)存48小時(shi)，-20℃可保存1個月，-70度(du)可保存6個月，部(bu)分標本(ben)需添加抑肽酶。我公(gong)司(si)是國內信(xin)譽(yu)雙(shuang)收的放心企業(ye)代(dai)理商(shang)，具有(you)良(liang)好(hao)的市(shi)場信(xin)譽(yu)與口碑，專(zhuan)業(ye)的銷售和技(ji)術服(fu)務(wu)團(tuan)隊，歡迎廣大(da)師生、研究(jiu)機構等(deng)，洽(qia)商(shang)。

細(xi)胞出(chu)現問題，可重發的(de)情況有(you)哪(na)些？判(pan)定(ding)標準是什麽？
　　（1）細胞運(yun)輸途(tu)中(zhong)遭遇(yu)的(de)各(ge)種(zhong)問題，細胞丟(diu)失(shi)、破(po)損(sun)、漏(lou)液等，重發；
　　（2）凍(dong)存的細胞復蘇(su)後(hou)，絕(jue)大多(duo)數(shu)細胞未(wei)存活(huo)，重(zhong)發；
　　（3）存活(huo)的(de)細胞靜(jing)置(zhi)24小時(shi)後(hou)，絕(jue)大多(duo)數(shu)細胞未(wei)存活(huo)，重(zhong)發；
　　（4）凍(dong)存的細胞復蘇(su)後(hou)或(huo)存活(huo)的(de)細胞靜(jing)置(zhi)4小時(shi)後(hou)並(bing)且未開封(feng)，出現(xian)汙染，重發；
　　（5）視(shi)具體(ti)情(qing)況而定(ding)。
細胞出(chu)現問題，不予(yu)以(yi)重發的(de)情況有(you)哪(na)些？
　　（1）客戶(hu)造(zao)成細胞汙(wu)染，不重(zhong)發；
　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確操(cao)作(zuo)致(zhi)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)不好(hao)，不重(zhong)發；
　　（3）細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)不好(hao)，未提(ti)供細(xi)胞培(pei)養前(qian)3天照(zhao)片的，不(bu)重(zhong)發；
　　（4）細(xi)胞培(pei)養時(shi)經其它(ta)處理的，不(bu)重(zhong)發；
　　（5）細(xi)胞收到(dao)2天內，未(wei)告知(zhi)，不重(zhong)發；
　　（6）視(shi)具體(ti)情(qing)況而定(ding)。