上海(hai)乾(qian)思(si)生物(wu)Golden West​品(pin)牌(pai)代(dai)理專業經(jing)營進口胎(tai)牛血清(qing)、細(xi)胞因(yin)子、ELISA試劑(ji)盒(he)、細胞(bao)、抗體(ti)、生(sheng)物(wu)試劑、耗材(cai)、培養(yang)基(ji)、壹(yi)抗、二(er)抗、其產(chan)品(pin)吸(xi)附均(jun)勻(yun)，吸附性好，空(kong)白(bai)值(zhi)低，孔(kong)底(di)透(tou)明(ming)度(du)高，代(dai)做ELISA實驗(yan)等。完善(shan)的(de)庫(ku)存及(ji)供(gong)應(ying)體(ti)系(xi)以及(ji)高效穩(wen)定(ding)的純(chun)化技術(shu)，保證(zheng)產品(pin)均(jun)能(neng)現(xian)貨(huo)供應(ying)和產品(pin)質(zhi)量(liang)的穩(wen)定(ding)性。

Golden West

上(shang)海(hai)乾(qian)思(si)生物(wu)Golden West品(pin)牌(pai)代(dai)理專業經(jing)營進口胎(tai)牛血清(qing)、細(xi)胞因(yin)子、ELISA試劑(ji)盒(he)、細胞(bao)、抗體(ti)、生(sheng)物(wu)試劑、耗材(cai)、培養(yang)基(ji)、壹(yi)抗、二(er)抗、其產(chan)品(pin)吸(xi)附均(jun)勻(yun)，吸附性好，空(kong)白(bai)值(zhi)低，孔(kong)底(di)透(tou)明(ming)度(du)高，代(dai)做ELISA實驗(yan)等。完善(shan)的(de)庫(ku)存及(ji)供(gong)應(ying)體(ti)系(xi)以及(ji)高效穩(wen)定(ding)的純(chun)化技術(shu)，保證(zheng)產品(pin)均(jun)能(neng)現(xian)貨(huo)供應(ying)和產品(pin)質(zhi)量(liang)的穩(wen)定(ding)性。

怎樣(yang)查到壹(yi)個特定(ding)細胞(bao)株(zhu)的相關(guan)知識(shi)和培養(yang)條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集了(le)絕大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞的(de)詳(xiang)細資料。打(da)開(kai)ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈接，輸入(ru)細(xi)胞名(ming)稱(cheng)就可(ke)以搜索ATCC的細(xi)胞(bao)數據庫(ku)。數(shu)據庫(ku)中(zhong)有每(mei)壹(yi)種(zhong)細(xi)胞(bao)的詳細描述(shu)，包(bao)括細胞的(de)來源，培(pei)養和凍(dong)存條(tiao)件(jian)，以及(ji)相(xiang)關(guan)文獻(xian)等(deng)資料。
如(ru)何(he)選用特(te)殊細胞(bao)系(xi)培(pei)養(yang)基(ji)？
培(pei)養某(mou)類型(xing)細(xi)胞(bao)沒有固定(ding)的培(pei)養條(tiao)件(jian)。MEM中(zhong)培養的細(xi)胞(bao)，很(hen)可(ke)能(neng)在(zai)DMEM或M199中同樣容易(yi)生(sheng)長(chang)。總之，*MEM、DMEM做貼壁細胞(bao)培養(yang)；RPMI1640做懸浮細胞(bao)培(pei)養；各(ge)種(zhong)目的(de)無(wu)血清(qing)培(pei)養*AIMV培養基(ji)（SFM）。

測序(xu)實驗(yan)流程：
1 收集樣(yang)品(pin)
2 相(xiang)關(guan)試劑(ji) 總RNA提取試劑(ji)TREzol Reagent (RNA提取(qu)試劑), M-MLV(cDNA逆轉錄(lu)酶), RNA 純化試劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR預混(hun)試(shi)劑(ji))。
3 實驗(yan)儀器 熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀; PCR儀;低溫離(li)心機(ji)。
4 總RNA提取
5 cDNA合成(cheng) 在(zai)0.5ml的離(li)心管(guan)中(zhong)加入(ru)1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機(ji)引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至(zhi)15µl體(ti)系(xi)。混(hun)勻(yun)後(hou)70℃變(bian)性(xing)RNA 5分鐘(zhong)，冰上速(su)冷(leng)1分鐘(zhong)，離(li)心將溶(rong)液(ye)收(shou)集至(zhi)管(guan)底(di)加入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至(zhi)30µl體(ti)系(xi)。PCR儀中(zhong)反(fan)應條(tiao)件(jian)設(she)置 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫15min終(zhong)止(zhi)反(fan)應。合(he)成(cheng)好(hao)的(de)cDNA置(zhi)於 -20 ℃保存備(bei)用。
6 引(yin)物(wu)設計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成(cheng)
7 實時定(ding)量(liang)PCR 按(an)以下(xia)反(fan)應體(ti)系(xi)進行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引物(wu)F 1 ul，下(xia)遊(you)引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀擴(kuo)增反(fan)應條(tiao)件(jian)設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循(xun)環)。
8 PCR產(chan)物(wu)溶(rong)解曲線(xian)分析(xi) 將(jiang)所(suo)擴(kuo)增的PCR 產(chan)物(wu)進行(xing)溶(rong)解曲線(xian)分析(xi)，單(dan)峰溶(rong)解曲線(xian)表(biao)示(shi)擴(kuo)增產物(wu)單(dan)壹(yi)，無(wu)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)擴(kuo)增產物(wu)。溶(rong)解曲線(xian)生成(cheng)的(de)反(fan)應程序為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意(yi)事項(xiang)：收(shou)集標(biao)本(ben)前(qian)必(bi)須清(qing)楚(chu)要檢測的(de)成份是(shi)否足夠穩定(ding)，對收集後(hou)當天(tian)進行(xing)檢測的(de)標本(ben)，儲(chu)存在(zai)4℃備用，如(ru)有特殊原(yuan)因(yin)需要周期收(shou)集標(biao)本(ben)，將(jiang)標(biao)本(ben)及(ji)時分裝(zhuang)後(hou)放(fang)在(zai)-20℃或-70℃條件(jian)下(xia)保(bao)存。避免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，標(biao)本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存48小(xiao)時，-20℃可(ke)保(bao)存1個月(yue)，-70度(du)可(ke)保(bao)存6個月(yue)，部分標(biao)本(ben)需添加抑(yi)肽酶。我公(gong)司(si)是(shi)國(guo)內信譽(yu)雙(shuang)收(shou)的(de)放(fang)心企業代(dai)理商，具(ju)有良好(hao)的(de)市場(chang)信譽(yu)與(yu)口(kou)碑，專業的銷售(shou)和技術(shu)服務團隊，歡迎(ying)廣大師(shi)生(sheng)、研究機(ji)構(gou)等，洽(qia)商(shang)。

細胞出現問(wen)題(ti)，可(ke)重(zhong)發(fa)的(de)情況(kuang)有哪些？判定(ding)標準(zhun)是(shi)什(shen)麽(me)？
　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸途(tu)中遭(zao)遇(yu)的各(ge)種(zhong)問(wen)題(ti)，細胞(bao)丟(diu)失、破(po)損(sun)、漏液(ye)等(deng)，重(zhong)發(fa)；
　　（2）凍(dong)存的(de)細(xi)胞復(fu)蘇(su)後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞未(wei)存活，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置(zhi)24小(xiao)時後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞未(wei)存活，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍(dong)存的(de)細(xi)胞復(fu)蘇(su)後(hou)或存活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置(zhi)4小(xiao)時後(hou)並且未(wei)開(kai)封，出現汙(wu)染(ran)，重(zhong)發(fa)；
　　（5）視(shi)具體(ti)情況(kuang)而(er)定(ding)。
細胞(bao)出現問(wen)題(ti)，不(bu)予以重(zhong)發(fa)的(de)情況(kuang)有哪些？
　　（1）客(ke)戶(hu)造成(cheng)細胞汙(wu)染(ran)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正確操作(zuo)致(zhi)細胞(bao)狀態(tai)不(bu)好，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（3）細(xi)胞(bao)狀態(tai)不(bu)好，未提(ti)供細胞(bao)培(pei)養(yang)前(qian)3天照片(pian)的(de)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（4）細(xi)胞(bao)培(pei)養時經(jing)其它(ta)處(chu)理的(de)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（5）細(xi)胞(bao)收(shou)到2天(tian)內，未(wei)告(gao)知(zhi)，不(bu)重(zhong)發(fa)；
　　（6）視(shi)具體(ti)情況(kuang)而(er)定(ding)。