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在發(fa)展中求生存(cun)，不斷(duan)完善(shan)，以良好(hao)信(xin)譽和科(ke)學(xue)的管理促(cu)進(jin)企業(ye)迅(xun)速(su)發(fa)展
廠家(jia)實(shi)力
Manufacturer Strength
有(you)效(xiao)保(bao)修
Valid Warranty
質量保(bao)障
Quality Assurance產品(pin)分類(lei)
PRODUCT CLASSIFICATION技(ji)術文(wen)章(zhang)
TECHNICAL ARTICLES
詳(xiang)細介(jie)紹(shao)
IMMUNOSTEP
上海(hai)乾(qian)思生(sheng)物(wu)IMMUNOSTEP品(pin)牌代(dai)理專(zhuan)業(ye)經營進口胎牛血(xue)清(qing)、細胞(bao)因(yin)子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細胞(bao)、抗體、生物(wu)試劑、耗(hao)材、培(pei)養基(ji)、壹(yi)抗、二抗、其(qi)產(chan)品(pin)吸(xi)附均(jun)勻(yun)，吸(xi)附性(xing)好(hao)，空白值低(di)，孔底透(tou)明(ming)度高(gao)，代做(zuo)ELISA實驗等。完(wan)善的庫存及(ji)供應體(ti)系(xi)以及(ji)高(gao)效(xiao)穩定的純化技(ji)術，保(bao)證(zheng)產(chan)品(pin)均(jun)能現(xian)貨供應和(he)產品(pin)質量的穩定性(xing)。
怎(zen)樣(yang)查到壹(yi)個(ge)特定細胞(bao)株(zhu)的相關知識(shi)和培(pei)養條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收集了(le)絕(jue)大多數(shu)細胞(bao)的詳(xiang)細資料。打開ATCC網頁(ye)的Cells and hybridomas鏈接，輸(shu)入細胞(bao)名(ming)稱(cheng)就可(ke)以搜索(suo)ATCC的細胞(bao)數(shu)據庫。數(shu)據庫中(zhong)有(you)每壹(yi)種細胞(bao)的詳(xiang)細描(miao)述(shu)，包括細胞(bao)的來(lai)源，培(pei)養和(he)凍存條件(jian)，以及(ji)相(xiang)關文獻等資料。
如(ru)何選用特殊細胞(bao)系(xi)培(pei)養基(ji)？
培(pei)養某(mou)類(lei)型細胞(bao)沒(mei)有(you)固定的培(pei)養條(tiao)件(jian)。MEM中培(pei)養的細胞(bao)，很可(ke)能在(zai)DMEM或(huo)M199中(zhong)同(tong)樣(yang)容易(yi)生(sheng)長。總之，*MEM、DMEM做(zuo)貼(tie)壁細胞(bao)培(pei)養；RPMI1640做(zuo)懸浮細胞(bao)培(pei)養；各(ge)種目(mu)的無血(xue)清(qing)培(pei)養*AIMV培(pei)養基(ji)（SFM）。
測(ce)序(xu)實驗(yan)流程(cheng)：
1 收(shou)集樣(yang)品(pin)
2 相關試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取試劑), M-MLV(cDNA逆轉錄(lu)酶(mei)), RNA 純(chun)化(hua)試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預混(hun)試劑)。
3 實(shi)驗(yan)儀(yi)器(qi) 熒光定量PCR儀(yi); PCR儀(yi);低(di)溫離(li)心機(ji)。
4 總RNA提取
5 cDNA合成(cheng) 在(zai)0.5ml的離(li)心管中加入1µl模(mo)板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機(ji)引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系(xi)。混勻(yun)後70℃變(bian)性(xing)RNA 5分鐘(zhong)，冰(bing)上速(su)冷(leng)1分鐘(zhong)，離(li)心將溶液收(shou)集至(zhi)管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系(xi)。PCR儀(yi)中(zhong)反應條(tiao)件(jian)設置 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫15min終(zhong)止(zhi)反應。合(he)成好(hao)的cDNA置於 -20 ℃保(bao)存備用。
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