上海乾(qian)思(si)生物(wu)virostat Quidel​品牌(pai)代理專業(ye)經(jing)營(ying)進(jin)口(kou)胎(tai)牛血清(qing)、細(xi)胞因(yin)子、ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)、細(xi)胞、抗(kang)體(ti)、生物(wu)試(shi)劑(ji)、耗材、培(pei)養(yang)基(ji)、壹(yi)抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產品吸附(fu)均(jun)勻(yun)，吸附(fu)性(xing)好，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔底透(tou)明度高，代做ELISA實(shi)驗等(deng)。完(wan)善的庫(ku)存及(ji)供(gong)應體系(xi)以(yi)及(ji)高效穩定(ding)的純化技(ji)術(shu)，保(bao)證產品均能現貨供應和產品質量的穩定(ding)性(xing)。

virostat Quidel

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怎樣(yang)查到(dao)壹(yi)個特定細(xi)胞株的相關(guan)知識(shi)和培(pei)養(yang)條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕大多(duo)數細(xi)胞的詳(xiang)細(xi)資(zi)料(liao)。打開ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入(ru)細(xi)胞名稱(cheng)就(jiu)可(ke)以(yi)搜(sou)索(suo)ATCC的細(xi)胞數據(ju)庫(ku)。數據(ju)庫(ku)中(zhong)有每壹(yi)種(zhong)細(xi)胞的詳(xiang)細(xi)描(miao)述，包括細(xi)胞的來(lai)源，培(pei)養(yang)和凍存條(tiao)件(jian)，以(yi)及(ji)相(xiang)關(guan)文(wen)獻(xian)等(deng)資(zi)料(liao)。
如何選(xuan)用(yong)特殊(shu)細(xi)胞系(xi)培(pei)養(yang)基(ji)？
培(pei)養(yang)某類型細(xi)胞沒有固定(ding)的培(pei)養(yang)條件。MEM中(zhong)培(pei)養(yang)的細(xi)胞，很可(ke)能在(zai)DMEM或(huo)M199中(zhong)同樣(yang)容(rong)易(yi)生長(chang)。總之，*MEM、DMEM做貼(tie)壁細(xi)胞培(pei)養(yang)；RPMI1640做懸浮(fu)細(xi)胞培(pei)養(yang)；各種目的無血清(qing)培(pei)養(yang)*AIMV培(pei)養(yang)基(ji)（SFM）。

測序(xu)實(shi)驗流(liu)程：
1 收(shou)集(ji)樣(yang)品
2 相關(guan)試(shi)劑(ji) 總(zong)RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)), RNA 純(chun)化試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒光定(ding)量PCR預混試(shi)劑(ji))。
3 實(shi)驗儀器 熒光定(ding)量PCR儀; PCR儀;低(di)溫(wen)離(li)心(xin)機。
4 總RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合(he)成(cheng) 在(zai)0.5ml的離心(xin)管(guan)中(zhong)加(jia)入1µl模(mo)板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至(zhi)15µl體(ti)系(xi)。混勻(yun)後70℃變性(xing)RNA 5分鐘(zhong)，冰(bing)上速冷(leng)1分(fen)鐘(zhong)，離(li)心(xin)將溶液收(shou)集(ji)至管(guan)底加(jia)入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至(zhi)30µl體(ti)系(xi)。PCR儀中(zhong)反應條件設(she)置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終(zhong)止(zhi)反應。合成(cheng)好的cDNA置於(yu) -20 ℃保存備(bei)用(yong)。
6 引物(wu)設(she)計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成(cheng)
7 實時(shi)定量PCR 按(an)以(yi)下(xia)反應體系(xi)進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊(you)引(yin)物(wu)F 1 ul，下(xia)遊(you)引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀擴增反應條件設(she)置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循(xun)環)。
8 PCR產(chan)物(wu)溶(rong)解曲(qu)線分(fen)析(xi) 將所(suo)擴增的PCR 產物(wu)進(jin)行(xing)溶解(jie)曲(qu)線分(fen)析(xi)，單(dan)峰(feng)溶解(jie)曲線(xian)表(biao)示(shi)擴增產(chan)物(wu)單(dan)壹，無非(fei)特(te)異(yi)性(xing)擴增產(chan)物(wu)。溶(rong)解曲(qu)線生成(cheng)的反應程序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意(yi)事項：收集(ji)標本(ben)前必(bi)須(xu)清(qing)楚(chu)要檢(jian)測的成(cheng)份是否(fou)足(zu)夠穩定(ding)，對(dui)收集(ji)後當天(tian)進行(xing)檢測的標本(ben)，儲存在(zai)4℃備(bei)用(yong)，如(ru)有特(te)殊(shu)原(yuan)因(yin)需要(yao)周期(qi)收(shou)集(ji)標本(ben)，將標本(ben)及(ji)時(shi)分裝後(hou)放(fang)在(zai)-20℃或(huo)-70℃條(tiao)件(jian)下(xia)保(bao)存。避(bi)免反復(fu)凍(dong)融，標本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存48小(xiao)時(shi)，-20℃可(ke)保(bao)存1個月(yue)，-70度可(ke)保(bao)存6個月(yue)，部分標(biao)本(ben)需添(tian)加(jia)抑(yi)肽酶。我(wo)公司(si)是國(guo)內(nei)信(xin)譽(yu)雙收(shou)的放心(xin)企(qi)業(ye)代理商，具(ju)有良(liang)好(hao)的市場(chang)信(xin)譽(yu)與(yu)口(kou)碑，專(zhuan)業(ye)的銷售(shou)和技(ji)術(shu)服(fu)務(wu)團(tuan)隊，歡迎(ying)廣(guang)大(da)師(shi)生、研究機構等(deng)，洽(qia)商。

細(xi)胞出現問題，可(ke)重發(fa)的情況有哪(na)些？判(pan)定(ding)標準(zhun)是什麽？
　　（1）細(xi)胞運輸途(tu)中(zhong)遭遇的各種(zhong)問題，細(xi)胞丟失、破(po)損(sun)、漏液等(deng)，重發(fa)；
　　（2）凍存的細(xi)胞復(fu)蘇(su)後(hou)，絕大多(duo)數細(xi)胞未存活(huo)，重發(fa)；
　　（3）存活(huo)的細(xi)胞靜(jing)置24小(xiao)時(shi)後，絕大多(duo)數細(xi)胞未存活(huo)，重發(fa)；
　　（4）凍存的細(xi)胞復(fu)蘇(su)後(hou)或存活(huo)的細(xi)胞靜(jing)置4小(xiao)時(shi)後並(bing)且(qie)未(wei)開(kai)封，出(chu)現汙染，重發(fa)；
　　（5）視具(ju)體情況而(er)定。
細(xi)胞出現問題，不(bu)予(yu)以(yi)重發(fa)的情況有哪(na)些？
　　（1）客(ke)戶(hu)造(zao)成(cheng)細(xi)胞汙染(ran)，不(bu)重發(fa)；
　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確(que)操(cao)作(zuo)致細(xi)胞狀態(tai)不(bu)好(hao)，不(bu)重發(fa)；
　　（3）細(xi)胞狀態(tai)不(bu)好(hao)，未(wei)提供細(xi)胞培(pei)養(yang)前3天照片(pian)的，不(bu)重發(fa)；
　　（4）細(xi)胞培(pei)養(yang)時(shi)經(jing)其(qi)它處理的，不(bu)重發(fa)；
　　（5）細(xi)胞收到(dao)2天內，未告知(zhi)，不(bu)重發(fa)；
　　（6）視具(ju)體情況而(er)定。