上(shang)海乾思生(sheng)物Virusys Corporation​品(pin)牌代(dai)理(li)專業經營(ying)進(jin)口胎牛血清(qing)、細(xi)胞(bao)因子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體、生物試劑、耗材、培(pei)養(yang)基、壹(yi)抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產品(pin)吸(xi)附均(jun)勻，吸(xi)附性(xing)好，空(kong)白(bai)值低，孔(kong)底(di)透明(ming)度(du)高，代做ELISA實驗(yan)等(deng)。完(wan)善(shan)的庫存(cun)及供應體系(xi)以及高效穩定的純化(hua)技術，保(bao)證(zheng)產品(pin)均能(neng)現貨供應和產(chan)品(pin)質量(liang)的穩定(ding)性。

Virusys Corporation

上海(hai)乾(qian)思生(sheng)物Virusys Corporation品(pin)牌代(dai)理(li)專業經營(ying)進(jin)口胎牛血清(qing)、細(xi)胞(bao)因子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體、生物試劑、耗材、培(pei)養(yang)基、壹(yi)抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產品(pin)吸(xi)附均(jun)勻，吸(xi)附性(xing)好，空(kong)白(bai)值低，孔(kong)底(di)透明(ming)度(du)高，代做ELISA實驗(yan)等(deng)。完(wan)善(shan)的庫存(cun)及供應體系(xi)以及高效穩定的純化(hua)技術，保(bao)證(zheng)產品(pin)均能(neng)現貨供應和產(chan)品(pin)質量(liang)的穩定(ding)性。

怎(zen)樣查到(dao)壹(yi)個特定細(xi)胞(bao)株的相關(guan)知識(shi)和(he)培(pei)養(yang)條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了絕(jue)大多數細(xi)胞(bao)的詳細(xi)資(zi)料。打(da)開(kai)ATCC網(wang)頁的Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入細(xi)胞(bao)名稱就可(ke)以搜(sou)索ATCC的細(xi)胞(bao)數據庫(ku)。數據庫(ku)中有(you)每壹(yi)種細(xi)胞(bao)的詳細(xi)描(miao)述(shu)，包(bao)括(kuo)細(xi)胞(bao)的來(lai)源，培(pei)養(yang)和凍存(cun)條(tiao)件，以及相關(guan)文獻(xian)等(deng)資(zi)料。
如(ru)何選用特殊(shu)細(xi)胞(bao)系(xi)培(pei)養(yang)基？
培(pei)養(yang)某類(lei)型細(xi)胞(bao)沒(mei)有(you)固定(ding)的培(pei)養(yang)條(tiao)件。MEM中(zhong)培(pei)養(yang)的細(xi)胞(bao)，很可能在(zai)DMEM或(huo)M199中(zhong)同(tong)樣容易(yi)生(sheng)長。總(zong)之(zhi)，*MEM、DMEM做(zuo)貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)；RPMI1640做懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)；各種目(mu)的無血清(qing)培(pei)養(yang)*AIMV培(pei)養(yang)基（SFM）。

測(ce)序實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1 收(shou)集(ji)樣品(pin)
2 相關(guan)試劑 總(zong)RNA提(ti)取(qu)試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄酶(mei)), RNA 純(chun)化(hua)試劑, RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR預(yu)混試劑)。
3 實驗(yan)儀器(qi) 熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀(yi); PCR儀;低溫離心機(ji)。
4 總(zong)RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合成 在(zai)0.5ml的離心管(guan)中加(jia)入(ru)1µl模板總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引(yin)物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至15µl體系(xi)。混勻後(hou)70℃變(bian)性(xing)RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰(bing)上(shang)速(su)冷(leng)1分鐘(zhong)，離心將溶液收(shou)集(ji)至管(guan)底加(jia)入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體系(xi)。PCR儀中(zhong)反(fan)應(ying)條(tiao)件設(she)置 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保溫15min終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)。合成好(hao)的cDNA置於 -20 ℃保(bao)存備用。
6 引(yin)物設(she)計與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shi)時定(ding)量(liang)PCR 按以下反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)進(jin)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊引(yin)物F 1 ul，下(xia)遊(you)引(yin)物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀(yi)擴增反(fan)應(ying)條(tiao)件設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循(xun)環)。
8 PCR產(chan)物溶解曲(qu)線(xian)分(fen)析(xi) 將所擴(kuo)增的PCR 產物進(jin)行溶解曲(qu)線(xian)分(fen)析(xi)，單峰(feng)溶解曲(qu)線(xian)表(biao)示(shi)擴(kuo)增產物單壹(yi)，無非(fei)特異(yi)性擴(kuo)增產(chan)物。溶解曲(qu)線(xian)生(sheng)成(cheng)的反(fan)應(ying)程(cheng)序(xu)為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意(yi)事項：收集(ji)標(biao)本前必須(xu)清楚(chu)要(yao)檢(jian)測(ce)的成份(fen)是否(fou)足夠(gou)穩(wen)定(ding)，對收(shou)集(ji)後(hou)當天(tian)進(jin)行檢(jian)測(ce)的標本(ben)，儲(chu)存在(zai)4℃備用，如有(you)特殊(shu)原(yuan)因需(xu)要(yao)周期(qi)收(shou)集(ji)標(biao)本，將標本(ben)及時分裝後(hou)放(fang)在-20℃或-70℃條(tiao)件下(xia)保存。避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)，標本(ben)2-8℃可保(bao)存(cun)48小時，-20℃可保存1個月(yue)，-70度可(ke)保(bao)存6個月(yue)，部(bu)分(fen)標(biao)本(ben)需(xu)添(tian)加抑肽酶。我(wo)公司(si)是(shi)國(guo)內信(xin)譽雙(shuang)收的放(fang)心企(qi)業(ye)代(dai)理(li)商(shang)，具(ju)有(you)良(liang)好(hao)的市場(chang)信(xin)譽與(yu)口碑，專業的銷(xiao)售(shou)和技術服(fu)務團(tuan)隊(dui)，歡(huan)迎(ying)廣(guang)大(da)師(shi)生、研究(jiu)機(ji)構(gou)等(deng)，洽商。

細(xi)胞(bao)出現問題，可重發(fa)的情況有(you)哪(na)些(xie)？判(pan)定標(biao)準(zhun)是什(shen)麽？
　　（1）細(xi)胞(bao)運輸途(tu)中遭(zao)遇(yu)的各種問題，細(xi)胞(bao)丟失(shi)、破(po)損、漏(lou)液等(deng)，重(zhong)發(fa)；
　　（2）凍存(cun)的細(xi)胞(bao)復蘇(su)後(hou)，絕(jue)大多數細(xi)胞(bao)未存活，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存(cun)活的細(xi)胞(bao)靜置24小(xiao)時後(hou)，絕(jue)大多數細(xi)胞(bao)未存活，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍存(cun)的細(xi)胞(bao)復蘇(su)後(hou)或(huo)存(cun)活(huo)的細(xi)胞(bao)靜置4小(xiao)時後(hou)並(bing)且(qie)未(wei)開(kai)封(feng)，出現汙(wu)染(ran)，重發(fa)；
　　（5）視(shi)具(ju)體情(qing)況而定。
細(xi)胞(bao)出現問題，不(bu)予以重發(fa)的情況有(you)哪(na)些(xie)？
　　（1）客戶(hu)造成(cheng)細(xi)胞(bao)汙染(ran)，不(bu)重發(fa)；
　　（2）客戶(hu)不(bu)正確(que)操(cao)作(zuo)致細(xi)胞(bao)狀態不(bu)好，不(bu)重發(fa)；
　　（3）細(xi)胞(bao)狀態不(bu)好，未(wei)提(ti)供細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)前3天(tian)照(zhao)片(pian)的，不(bu)重發(fa)；
　　（4）細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)時經其(qi)它(ta)處理(li)的，不(bu)重發(fa)；
　　（5）細(xi)胞(bao)收到2天(tian)內，未(wei)告(gao)知，不(bu)重發(fa)；
　　（6）視(shi)具(ju)體情(qing)況而定。