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在發(fa)展(zhan)中(zhong)求生(sheng)存(cun)，不(bu)斷(duan)完(wan)善(shan)，以良好信(xin)譽和科學的(de)管理促進(jin)企業迅(xun)速發(fa)展(zhan)
首(shou)頁(ye)-產品(pin)系統--合作(zuo)品(pin)牌-SYNChem UG and Co KG
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有效保(bao)修(xiu)
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PRODUCT CLASSIFICATION技(ji)術(shu)文(wen)章
TECHNICAL ARTICLES
詳(xiang)細介紹
SYNChem UG and Co KG
上海乾(qian)思(si)生(sheng)物(wu)SYNChem UG and Co KG品(pin)牌代理專(zhuan)業經(jing)營進口(kou)胎牛血清、細胞(bao)因(yin)子、ELISA試劑盒、細胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生(sheng)物(wu)試劑、耗材、培(pei)養(yang)基、壹(yi)抗(kang)、二(er)抗(kang)、其產品(pin)吸附均勻(yun)，吸附性(xing)好，空白(bai)值(zhi)低，孔底(di)透明度(du)高(gao)，代做(zuo)ELISA實(shi)驗(yan)等。完(wan)善(shan)的庫存及(ji)供應(ying)體(ti)系(xi)以及(ji)高(gao)效(xiao)穩(wen)定(ding)的純(chun)化技(ji)術(shu)，保證產品(pin)均能(neng)現貨(huo)供應(ying)和產品(pin)質量(liang)的穩定(ding)性(xing)。
怎(zen)樣(yang)查到(dao)壹(yi)個特(te)定(ding)細胞(bao)株(zhu)的相(xiang)關知(zhi)識和培(pei)養(yang)條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集了絕大(da)多(duo)數細胞(bao)的(de)詳細資料。打開(kai)ATCC網頁(ye)的(de)Cells and hybridomas鏈(lian)接(jie)，輸(shu)入(ru)細胞(bao)名(ming)稱就(jiu)可以搜(sou)索ATCC的(de)細胞(bao)數據庫。數據庫中有每壹(yi)種細胞(bao)的(de)詳細描(miao)述，包括(kuo)細胞(bao)的(de)來源(yuan)，培(pei)養(yang)和凍存(cun)條(tiao)件，以及(ji)相(xiang)關文(wen)獻(xian)等(deng)資料。
如(ru)何選(xuan)用特(te)殊(shu)細胞(bao)系(xi)培(pei)養(yang)基？
培(pei)養(yang)某類(lei)型(xing)細胞(bao)沒(mei)有固定(ding)的培(pei)養(yang)條件。MEM中(zhong)培(pei)養(yang)的細胞(bao)，很(hen)可能(neng)在(zai)DMEM或(huo)M199中同樣(yang)容(rong)易生(sheng)長(chang)。總(zong)之，*MEM、DMEM做(zuo)貼(tie)壁細胞(bao)培(pei)養(yang)；RPMI1640做(zuo)懸浮細胞(bao)培(pei)養(yang)；各種目的無(wu)血清培(pei)養(yang)*AIMV培(pei)養(yang)基（SFM）。
測(ce)序(xu)實驗(yan)流程(cheng)：
1 收集(ji)樣(yang)品(pin)
2 相關(guan)試劑 總RNA提(ti)取試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取試劑), M-MLV(cDNA逆轉錄酶), RNA 純(chun)化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光(guang)定(ding)量PCR預(yu)混(hun)試劑)。
3 實驗(yan)儀器 熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi); PCR儀;低溫離心機。
4 總(zong)RNA提(ti)取
5 cDNA合成 在(zai)0.5ml的(de)離心(xin)管中(zhong)加入1µl模(mo)板(ban)總RNA(1µg/µl); 2µl隨機(ji)引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體(ti)系(xi)。混(hun)勻(yun)後70℃變(bian)性(xing)RNA 5分(fen)鐘，冰(bing)上速冷1分(fen)鐘，離(li)心將(jiang)溶液收集至管底(di)加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體(ti)系(xi)。PCR儀(yi)中(zhong)反(fan)應(ying)條(tiao)件設置(zhi) 37℃延(yan)伸60min，70℃保溫15min終止反(fan)應(ying)。合(he)成好的cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保(bao)存備(bei)用。
6 引物設計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shi)時(shi)定(ding)量PCR 按(an)以下反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊引物F 1 ul，下(xia)遊(you)引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀(yi)擴增(zeng)反應(ying)條(tiao)件設置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環)。
8 PCR產物(wu)溶解曲(qu)線(xian)分析(xi) 將(jiang)所擴增(zeng)的PCR 產物(wu)進行(xing)溶解曲(qu)線(xian)分析(xi)，單(dan)峰溶解曲(qu)線(xian)表示(shi)擴增(zeng)產物(wu)單(dan)壹(yi)，無(wu)非(fei)特(te)異性(xing)擴增(zeng)產物(wu)。溶解曲(qu)線(xian)生(sheng)成的(de)反(fan)應(ying)程(cheng)序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。
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